重组细胞因子在禽类疫苗中的应用进展

细胞因子是免疫系统的重要调节因子,具有明显的免疫佐剂效应。随着鸡细胞因子(IL-2,IL-6,IL-12,IL-18,IFN-γ等)相继克隆成功,重组细胞因子在禽类疫苗中的应用研究也逐步深入。研究表明,用原核、真核载体或者病毒构建的细胞因子重组质粒或表达的重组蛋白,能很好的发挥免疫佐剂的活性。论文综述了细胞因子的免疫增强机制,以及重组细胞因子在现代禽类疫苗中的应用概况。     

新兴地区鸭疫里默氏杆菌血清3型的分离鉴定

通过对广东省新兴地区某番鸭养殖场疑似鸭疫里默氏杆菌病的病死鸭进行病原分离、生化鉴定及血清学鉴定,确诊该次疫情为鸭疫里默氏杆菌血清3型所引起。     

超高双立柱巷道堆垛机振动分析

 高度为24m和负载2700kg的双立柱巷道堆垛机的结构振动特性是该产品可靠性设计的关键因素,研究分析堆垛机的工况载荷结构受力和模态特性以验证其是否符合强度和振动要求。基于结构模态振动理论和有限元方法,运用耦合自由度方法对各零件结合面进行连接处理和施加工况边界条件,建立了超高双立柱堆垛机的真实复杂动力学分析有限元模型。在此基础上,计算了堆垛机结构的最大变形量和最大应力值,前10阶预应力模态频率和振型。分析了堆垛机的工况载荷结构强度,预应力模态振动特性和结构的振动不稳定情况。计算结果表明超高巷道堆垛机在工况载荷下具有很好的结构强度和较大的模态振动位移等特性,为以整机系统振动为目标的超高巷道堆垛机动态设计改进以及避免结构的共振提供理论指导和参考数据。     

禽流感病毒河北株的分离鉴定

禽流感（Ａｖｉａｎ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）是由 Ａ型流感病毒引起的一种禽类的病毒性传染病,被国际兽疫局确定为Ⅰ类烈性传染性病。该病毒属正粘病毒科,几乎所有的野生与家养禽类均可感染。１８７８年在意大利的鸡群中首次暴发,其后许多国家和地区都相继报道ＡＩＶ存在的事实,近几年,我国在不同地区都分离到禽流感病毒,广泛存在的主要是Ｈ９亚型病毒,且多为中等以下毒力的毒株。本试验采集病料主要针对河北省养鸡业较为发达的几个县市的七个小型养鸡场,选择未注过流感疫苗,临床症状出现产蛋下降和呼吸道症状严重的鸡只,剖杀,采集病变明显的脏器,如胰、肝、肺、脾、气管、肾、泄殖腔及其干酪样物等,剪碎研磨,加抗生素处理后,接种９－１０日龄鸡胚,弃掉２４小时内死亡的鸡胚,收集２４－７２小时死亡鸡胚的尿囊液,盲传三代,并做血凝试验,对于ＨＡ阳性的样品,进一步做ＨＩ试验,结果有２株禽流感病毒为Ｈ９亚型;进一步测定其神经氨酸酶活性,结果为Ｎ２。取１： １０稀释的尿液０．２ｍｌ肌肉接种８只８周龄ＳＰＦ鸡测其致病力指数,观察１０天内鸡只发病情况,结果第三天鸡群精神稍有沉郁,其中一只出现歪脖的神经症状,采用英国中心兽医实验室静脉致病指数（ＩＶＰＩ）测定计算方法     

鸡新城疫、支气管炎、病毒性关节炎、法氏囊炎四联油乳剂灭活苗的研究

用接种新城疫病毒克隆３０株、鸡传染性支气管炎病毒Ｍ４１株、病毒性关节炎病毒Ｓ－１１３３株和鸡传染性法氏囊炎病毒Ｄ７８株的含毒鸡胚液制成四联油乳剂灭活苗，接种于３～４周龄鸡和成鸡后１０天产生免疫力，保护率达９０％以上，免疫期达５个月以上。自１９９３年用本苗在黑龙江、山东、河南、吉林、浙江、广东、天津等省市免疫接种．２６万余只鸡，获得满意效果。     

猪白细胞介素-18基因表达及重组蛋白的纯化

以pcDNA3.1-IL18为模板进行PCR扩增获得猪白细胞介素-18(IL-18)的成熟肽基因,以KpnⅠ、SacⅠ双酶切PCR产物作为供体,KpnⅠ、SacⅠ双酶切的pET41c和pET32c作为载体,连接载体供体,转化DH5α,经双酶切、PCR鉴定及测序筛选出阳性重组质粒,并命名为pET41c-IL18和pET32c-IL18。将pET41c-IL18和pET32c-IL18转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),用1 mmol/L IPTG 37℃诱导表达。SDS-PAGE及W estern-blotting分析结果表明,所表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,pET32c-IL18重组蛋白分子质量约33 ku,与预期大小相符。将包涵体提取物用8 mol/L脲变性,经N i-NTA柱纯化,透析复性,得到了纯化的IL-18蛋白。     

鸡传染性法氏囊炎、传染性鼻炎及病毒性关节炎疫苗的安全性和免疫效力试验

鸡传染性法氏囊病 (ＩＢＤ)、鸡传染性鼻炎 (ＩＣ)、鸡病毒性关节炎病 (ＲＥＯ)是危害养禽业的几种主要传染病 ,优质高效的疫苗能有效地预防这些疫病的发生。受梅里亚动物保健有限公司的委托 ,对该公司生产的疫苗进行免疫效力评估 ,现将该公司生产的ＩＢＤ、ＩＣ和ＲＥＯ疫苗的安全性免疫效力检测结果报告如下。1　材料和方法1.1　疫苗ＩＢＤ油乳剂灭活疫苗Ａ(新疫苗 ) ,生产日期为 2 0 0 0 0 90 3,仅供试验使用 ;ＩＢＤ油乳剂灭活疫苗Ｂ(旧疫苗 ) ;ＩＣ油乳剂灭活疫苗 (ＨＥＡＭＯＶＡＸ) ,批号为 0 2 88;ＨＶＴ -ＢＵＲ70 6二联液氮苗 ,批…     

应用血凝抑制试验和琼脂扩散试验检查减蛋综合症(EDS—76)

试验证明EDS-76“AV-127”株可在鸭胚中增殖。用含毒的鸭胚尿液研制的血凝抑制试验抗原和琼脂扩散试验抗原检查人工感染鸡证明,二种血清学方法均有明显的特异性,感染鸡抗体的持续期较长,人工感染后5天抗体上升,7天至6个半月100％呈阳性反应。用以对我国一些鸡场进行了调查,初步认为,在我国的鸡群中还未发现有此病污染,但在鸭群中有抗体存在。     

禽流感油乳剂灭活疫苗的研究

将6种不同亚型的禽流感病毒（AIVH2N9、H3N8、H5N1、H5N2、H7N1、H9N2）分别接种鸡胚,收获尿囊液,经甲醛灭活,以矿物油为佐剂制成油乳剂灭活疫苗。疫苗接种4和8周龄SPF鸡,注苗后均无不良反应。每种亚型疫苗免疫后14天和21天攻毒保护率均达90％-100％。分别用H5N1和H9N2亚型灭活疫苗免疫8周龄SPF鸡、25和28周龄健康商品蛋鸡,免疫后7天产生免疫力,14天保护率达100％,21天后抗体达高峰,仔鸡接苗后最高血凝抑制（HI）几何平均滴度（GMT）为7.3-8.0log2,蛋鸡为8.0-10.5log2。免疫后180天,抗体效价不低于6.5log2。免疫后180天分别以AIV攻击,H5亚型疫苗组,用强毒攻击无一发病和死亡,对照鸡全部发病死亡;H9亚型疫苗组,对照鸡在攻毒后72小时停产,免疫鸡无一发病且产蛋正常,对同源攻毒的保护率达100％。     

猪IL-18基因的原核表达及重组蛋白的纯化

以pcDNA3．1-pIL-18为模板，采用PCR技术扩增到了猪白细胞介素18（IL-18）的成熟蛋白基因，通过KpnⅠ＋SacⅠ双酶切及连接反应，构建了pET32c—pIL—18原核表达质粒。经过限制性内切酶分析、PCR鉴定及DNA序列测定证实，重组质粒中的基因片段连接正确。之后，重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），于37℃、1．0mmol／L IPTG条件下诱导表达。菌体裂解产物经SDS—PAGE分析，在分子质量约为33ku处出现了预期的目的蛋白。用8mol／L脲对表达产物变性，经Ni^2＋NTA柱纯化，透析复性，得到了纯化的IL-18蛋白。Western—blot分析证实，纯化的重组IL-18蛋白具有反应活性。上述研究结果为重组IL-18的应用奠定了基础。