牛骨骼肌卫星细胞的分离鉴定和诱导分化

为了在体外研究西门塔尔牛的肌肉生长发育过程并建立牛骨骼肌卫星细胞的原代细胞模型。本研究采用0.2%的Ⅱ型胶原酶消化后再使用0.25%胰酶消化获得牛骨骼肌卫星细胞（bovine skeletal satellite cell，BSSC），并利用差速贴壁法分离获得纯化后的BSSC，使用RT-PCR、免疫荧光染色和Western blotting等方法鉴定BSSC，使用成脂诱导剂诱导其分化为脂肪细胞，油红O染色鉴定分化后细胞的成脂能力，使用2%马血清诱导其分化为肌细胞，RT-PCR鉴定静止期PAX7基因和肌细胞的标记基因MyoG在诱导前后表达量的变化。结果发现，分离纯化得到的BSSC呈梭形或纺锤形，细胞形态饱满，折光性强，随着培养时间的延长，细胞由原来的无序生长变为有序生长；RT-PCR检测发现，BSSC表面标志基因Desmin、c-Met、Myf5和特异性标志基因PAX7均呈阳性表达；免疫荧光染色及Western blotting结果显示，PAX7和MyoD基因均呈阳性表达；成脂细胞诱导分化后被油红O大量染色并观察到大量脂滴出现；成肌细胞诱导分化后静止时期PAX7基因表达量诱导前高于诱导分化后，而成肌标记基因MyoG表达量诱导前低于诱导分化后。综上，本研究成功分离获得BSSC，并证明BSSC具有分化成脂肪细胞和肌细胞的能力，为体外研究西门塔尔牛肉制品调控机制提供原代细胞模型。     

热休克蛋白HSP90B1影响牛病毒性腹泻病毒复制的研究

旨在探究热休克蛋白90 β家族成员1(heat shock protein 90 beta family member 1,HSP90B1)对牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)复制的影响。本研究通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)和Western blot检测BVDV感染MDBK细胞后HSP90B1 mRNA和蛋白的表达情况,利用CRISPR/Cas9技术构建HSP90B1 KO细胞,计数检测敲除HSP90B1对细胞生长的影响,BVDV TC株感染HSP90B1 KO和对照组Scramble细胞后,使用qRT-PCR、免疫荧光、病毒滴度以及细胞病变效应(cytopathic effects, CPE)检测BVDV的复制情况。结果表明,qRT-PCR检测显示BVDV感染24 h时与空白组相比HSP90B1 mRNA转录水平显著升高(P<0.05),36 h后极显著升高(P<0.01),同时Western blot显...     

增产菌对甜菜增产效果试验简报

增产菌是由北京农业大学植物生态工程研究所等单位研制成功的新型微生物制剂。经在小麦、水稻、大豆等多种作物试验均有显著增产效果。1988年黑龙江省八五二农场六分场与红兴隆农管局科研所、场农业科联合进行了增产菌对甜菜增产效果试验,结果表明,根可增产8.2％,增糖0.4～1.0度,现将结果简报如下:     

小檗胺对牛病毒性腹泻病毒感染BALB/c小鼠的影响研究

试验旨在研究天然小分子化合物小檗胺(berbamine, BBM)对牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)感染BALB/c小鼠的影响。共分为预防保护和治疗两部分试验。预防保护试验将24只BALB/c小鼠随机分成3组,每组8只,使用0、50、100 mg/kg BBM提前灌胃,每24 h灌胃1次,连续灌胃3 d,滴鼻感染BVDV 48 h后再次感染,于感染后继续每24 h灌胃,感染后5和10 d时分别处死4只,取肝、脾、肾、小肠等组织使用荧光定量PCR(qPCR)检测BVDV 5′UTR水平;制备病理切片并使用H&E染色检测各组织病变情况。治疗试验中将24只BALB/c小鼠随机分成2组,BVDV滴鼻感染,48 h后再次感染后使用0和100 mg/kg BBM灌胃BALB/c小鼠,每24 h灌胃1次,于感染后3、6和10 d时分别处死4只小鼠,使用qPCR检测BVDV载量,通过病理切片检测各组织病变情况。结果显示,预防保护试验发现,与对照组相比,50和100 mg/kg BBM使BVDV感染后各组织5′UTR水平最大降低约72倍,处理...     

石斛酚抑制黑色素瘤细胞增殖与迁移的作用以及潜在靶点miRNA的分析

探究石斛酚对黑色素瘤细胞生物学功能的调节作用及其对miRNA表达谱的影响。用不同浓度(0,40,80,160,320μmol·L^-1)石斛酚处理小鼠黑色素瘤B16细胞，采用CCK-8法检测B16细胞增殖能力，采用细胞划痕实验检测B16细胞迁移能力。利用Small RNA-seq技术检测Control组和石斛酚组(160μmol·L^-1)细胞中的miRNA的表达情况，构建其差异表达谱，并对差异表达miRNA进行生物信息学分析，确定差异表达miRNA的主要生物学功能及其可能参与的信号通路。结果表明：石斛酚对黑色素瘤B16细胞的增殖与迁移能力均有抑制作用，且具有剂量依赖性，160μmol·L^-1和320μmol·L^-1石斛酚处理的增殖抑制率分别为51.19%和70.51%，迁移率分别为(21.82±6.27)%和(8.54±5.02)%。Small RNA-seq数据分析结果显示，与Control组相比，石斛酚组显著上调表达42个miRNA和显著下调表达11个miRNA，这53个差异表达miRNA共预测到...     

天然小分子药物小檗胺影响牛肠道病毒复制的研究

为分析天然小分子药物小檗胺(BBM)是否影响牛肠道病毒(BEV)的复制，本研究以不同浓度的BBM与牛肾细胞(MDBK)共孵育后，采用MTT法检测BBM对MDBK细胞的影响，结果显示，与对照浓度相比，1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L BBM对细胞增殖抑制作用均较小(P>0.05)。因此选择上述3种浓度的BBM分别处理MDBK 12 h后以103TCID50BEV感染，24 h后采用间接免疫荧光试验(IFA)检测BEV双链RNA (dsRNA)，以确定BBM对BEV的最佳抑制浓度。MDBK细胞经10μmol/L BBM处理后感染BEV，观察48 h内BEV致细胞病变效应(CPE)，采用荧光定量PCR检测BEV 5’UTR m RNA转录水平及测定子代病毒滴度，以确定BBM体外对BEV的抑制效果。IFA结果显示，与对照组相比，10μmol/L BBM对BEV ds RNA具有极显著性抑制作用(P<0.01)；细胞形态观察结果显示，BBM对BEV引起的细胞大面积脱落具有一定的抑制效果；荧光定量PCR结果显示，与对照组相比，在感染48 h的细胞中BEV 5’UTR m...     

牛ATG10基因的克隆、原核表达、纯化和生物信息学分析

为了获得牛自噬相关基因10(ATG10)蛋白，试验参照GenBank中牛ATG10基因设计引物，PCR扩增ATG10基因，与pET-N-His-TEV载体连接，测序鉴定正确后用IPTG诱导ATG10蛋白表达，利用Ni-TED琼脂糖树脂进行蛋白纯化，Western-blot鉴定ATG10蛋白表达情况，通过生物信息学在线软件对ATG10蛋白进行分析，获得其相应的理化性质及参数。结果表明：克隆得到的ATG10基因序列长度约为705 bp,测序鉴定正确后得到pET-N-His-TEV-ATG10原核表达载体，IPTG成功诱导表达了ATG10蛋白，分子量为28 ku; ATG10蛋白与兔抗ATG10抗体特异性结合；ATG10蛋白是一种较为稳定的、含38个潜在的磷酸化位点、无跨膜区及信号肽的亲水性蛋白，二级结构中无规则卷曲占比44.44%,与ATG5、ATG12、ATG16L1、ATG3等多个自噬相关蛋白相互作用。说明试验成功构建出pET-N-His-TEV-ATG10原核表达载体，并获得ATG10蛋白。