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检测家畜血吸虫抗体的二步金标免疫渗滤法研究 总被引:3,自引:0,他引:3
将待检家畜血纸浸出液点在硝酸纤维素膜上,以金标记的血吸虫虫卵可溶性抗原为探针(以下简称血吸虫抗原胶体金),建立了检测家畜血吸虫抗体的二步金标免疫渗滤法(Two-step Dot Immunogold Filtration Assay,T—DIGFA)。家畜血吸虫病阳性血样在50-90S形成肉眼可观察的红色斑点,可进行快速诊断。该法可以检测出人工感染血吸虫尾蚴7d和7d以上的阳性牛和兔血纸抗体,与肝片吸虫、锥虫、蛔虫病之间无交叉反应。T—DIGFA检测粪孵血吸虫毛蚴阳性牛血纸139份、阴性牛血纸130份,与粪孵法阳性符合率为100%,阴性符合率为99.2%;T—DIGFA与斑点酶联SPA法阳性符合率和阴性符合率完全相同。血吸虫抗原胶体金在4~8℃保存期可达6个月、室温保存期为3个月。试验证实,T-DIGFA有很高的敏感性、特异性、重复性和稳定性,适合于基层单位和现场进行家畜血吸虫病抗体的快速诊断、普查和检疫。 相似文献
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为获得具有良好抗原性的日本血吸虫重组蛋白,本研究设计了两对特异性引物,以日本血吸虫mRNA为模板,RT-PCR方法分别克隆基因片段Sj22.6ku和LHD-Sj23,以重叠延伸PCR方法将两个片段连接,构建原核重组表达质粒pET28-Sj22.6-LHD-Sj23;该重组质粒在大肠杆菌Rosetta DE3中表达后所获得的融合蛋白Sj22.6-LHD-Sj23分子量约为35 ku。Western blot鉴定结果表明该重组蛋白有良好的免疫原性,为进一步研制日本血吸虫病分子诊断试剂盒奠定了基础。 相似文献