甲氧普烯中手性异构体杂质超临界色谱检测方法的建立

建立甲氧普烯中手性异构体的超临界流体色谱检测方法。用CHIRALCEL~? OX-3(150 mm×4.6 mm, 3μm)作为色谱柱,CO₂为流动相A,异丙醇为流动相B,梯度洗脱,紫外吸收检测器,流速为2.0 mL/min。结果表明,该方法在一定浓度范围内具有良好的线性关系,线性方程为y=1 652.285 0x-473.015 9,相关系数R~2为1.000 0,甲氧普烯中手性异构体检出限质量浓度为0.713 5μg/mL,定量限质量浓度为2.378 2μg/mL,加样回收率为80.00%～120.00%。结果显示,该方法可以快速、简便、灵敏、准确地测定甲氧普烯中手性杂质的残留量。     

表达NDV HN和IBDV VP2融合蛋白的重组减毒沙门菌的构建及其生物学特性分析

为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)HN和传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2融合蛋白的重组减毒沙门菌,并分析其生物学特性。本研究扩增了NDVHN和IBDVVP2主要抗原基因片段,通过重叠延伸PCR扩增获得HN-VP2融合基因,构建重组质粒pYA-HN-VP2,将该重组质粒电转化至减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔcyaΔasd中,获得表达HN-VP2融合蛋白的减毒重组菌SL1344ΔcrpΔcyaΔasd(pYA-HN-VP2),并分析其生化特性、遗传稳定性和毒力等生物学特性。Westernblot结果显示,重组减毒沙门菌可分泌表达HN-VP2融合蛋白,大小为84ku,且该融合蛋白分别能与相应特异性阳性血清发生反应;生物学特性结果显示,重组菌株失去了利用麦芽糖、山梨醇及乳糖等碳源的能力,其生长速度显著慢于野生菌株SL1344;毒力较野生菌株至少下降5个对数单位,且能够稳定遗传重组质粒pYA-HN-VP2。本研究为鸡新城疫-传染性法氏囊病-沙门菌病的三联口服疫苗研制奠定重要基础。     

土壤水与有机质对高光谱的作用及交互作用规律

【目的】定量揭示土壤水分与有机质对高光谱的作用规律,为提高土壤水分、有机质的光谱估测精度提供基础。【方法】以山东省泰安市岱岳区90个棕壤土样为研究对象,进行室外光谱采集、室内土壤水分和有机质测定,运用Savitzky-Golay filter对光谱曲线进行平滑去噪预处理。根据含水量、有机质含量的高低将土壤样本分为9组,运用比较法对9组原始光谱数据进行分析,初步探究土壤水、有机质对光谱的作用规律。然后采用相关分析法,分析水、有机质与土壤原始光谱反射率(raw spectral reflectance,R)、光谱一阶微分变换(first order differential reflectance,D(R))以及分组光谱的相关性。在假定其他影响因素基本相同的条件下,利用有交互作用的双因素方差分析法,定量分析水、有机质对土壤光谱反射率、光谱一阶微分的作用程度及其交互作用。根据土壤水与有机质的交互作用规律,按相关系数较大而交互作用小的原则选取特征因子,采取偏最小二乘回归模型建立土壤有机质含量的高光谱估测模型,分析依据两者交互作用规律选取的因子对提高光谱估测模型精度的有效性。【结果】在田间持水量范围内,水对土壤光谱反射率影响起主要作用;水与有机质对土壤光谱客观存在交互作用,当土壤含水量小于10%时,600—1 800 nm的原始光谱能较好反映有机质的作用,而当土壤含水量大于15%时,有机质的作用几乎被水的作用所掩盖。水、有机质对土壤原始光谱的作用及其交互作用分别在360—1 800,410—1 800,509—1 800 nm达到显著水平,且三者均在1 951—2 450 nm达到显著水平(α=0.05);对土壤光谱的作用程度由大到小依次为:水、有机质、交互作用;在425—1 800 nm水对土壤光谱的作用大约是有机质的5—8倍,在1 950—2 300 nm为8—12倍;在350—2 500 nm有机质对土壤光谱的作用大约是水与有机质交互作用的2倍。光谱经一阶微分变换之后,在450—530、600—790、1 019—1 027、2 000—2 020以及2 045—2 075 nm土壤水的作用增强,而在其他波段处减弱;土壤有机质的作用在471—824、851—949、967—1 140、1 172—1 340、1 379—1 428、1 450—1 770、1 953—2 122、2 174—2 199以及2 271—2 342 nm处得到增强,而在其他波段处减弱。水与有机质的交互作用也在不同波段处有所变化,但相对于土壤水与有机质的作用变化幅度而言是相对减弱的。基于土壤水与有机质的交互作用规律选取的特征因子,所建立的土壤有机质高光谱估测模型精度有所提高,其中16个检验样本的决定系数R2由不考虑交互作用的0.6764提高到0.7934。【结论】研究表明,在反演土壤含水量时,可以不考虑有机质对光谱的影响;而在反演有机质含量时,必须要剔除水对反射率的影响,还要考虑水与有机质对光谱的交互作用。考虑水与有机质对土壤光谱的交互作用,可有效提高土壤有机质的光谱估测精度。     

“互联网+”背景下兰州市乡村旅游精准扶贫的问题与对策

乡村旅游因其能够有效提高农民收入、提供大量村民就业机会、拉动乡村地区经济增长而成为我国脱贫攻坚的重要力量。在对乡村旅游精准扶贫理论梳理基础上,剖析兰州市乡村旅游精准扶贫中存在的问题,并从"互联网+"发展背景的角度提出相应的解决对策,以期为相关部门的决策提供参考依据。     

公农2号紫花苜蓿抗寒基因CAS19在烟草中的表达

[目的]研究公农2号紫花苜蓿抗寒基因CAS19在烟草中的表达。[方法]根据苜蓿抗寒基因（CAS19）核酸序列设计1对引物,用RT-PCR扩增出分离CAS19的蛋白基因,并克隆到pMD18-TVector载体中,再亚克隆到表达载体PBI121,成功构建重组表达质粒PB-CAS。经农杆菌介导转基因入烟草,并通过Sounthern-blotting杂交分析检测转基因苗。[结果]CAS19抗寒基因可以在烟草中得以高效表达。[结论]为进一步探明CAS19抗寒基因在烟草中的表达机制提供了理论依据。     

与灰葡萄孢致病性相关的真菌毒素及胞外酶

植物病原菌灰葡萄孢引发的灰霉病能侵染大部分经济作物和观赏植物,是一种严重的植物病害。灰葡萄孢侵染植物使植物细胞死亡是一个复杂的过程,这个过程涉及了多种真菌毒素,胞外酶和其它小分子物质。概述与灰葡萄孢致病性相关的主要真菌毒素和胞外酶,并讨论他们作用机理,旨在为研究靶标性的抗灰霉真菌剂提供参考。     

宝龙店种子林场森林资源动态变化分析

本文通过比较宝龙店种子林场2004年与2014年的森林资源规划设计调查成果,分析其相隔10年两期的森林资源动态变化特点。     

CRISPR/Cas9介导的猪IPEC-J2细胞CD13基因敲除细胞系的建立

旨在利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术制备CD13基因敲除的IPEC-J2(猪空肠上皮细胞系)细胞,揭示细胞表面分化抗原13(cluster of differentiation 13, CD13)在肠道病原微生物感染肠道细胞中所起的作用。本研究在猪CD13基因第2外显子区域设计2个向导RNA(guide RNA, gRNA),命名为g3、g5,然后分别将g3和g5克隆到pX330-GFP和pX330-RFP载体骨架上,电转染IPEC-J2细胞,48 h后通过流式细胞术分选具有双荧光标记的细胞,培养并获得单克隆细胞,PCR扩增、测序,从而获得CD13基因纯合敲除的阳性细胞系。对获得的20个细胞单克隆进行PCR,并挑取部分克隆PCR产物测序,发现共有7个克隆发生了基因片段缺失,其中1个克隆为单等位基因片段缺失,3个克隆为双等位基因杂合片段缺失,3个克隆为双等位基因纯合片段敲除。本研究检测双等位基因纯合片段敲除细胞的蛋白表达水平,其结果显示,在该纯合敲除细胞中CD13蛋白几乎不表达,表明成功构建了CD13敲除的IPEC-J2细胞系。本研究获得的CD13基因敲除细胞系为探究CD13在猪肠道病原微生物感染肠道细胞中所起的作用奠定了基础。     

流感等病毒感染过程中STATs蛋白非细胞因子依赖性的早期激活

STATs蛋白在宿主抗病毒应答中具有重要功能,但对其在病毒感染早期的作用研究不多。为确定STATs蛋白在病毒感染早期的激活,本文采用甲型流感病毒H1N1亚型的不同毒株（WSN和PR8）和伪狂犬病毒（PRV）分别感染细胞或基因敲除小鼠,利用Western blotting分析STAT1和STAT3酪氨酸位点的磷酸化水平。结果显示,病毒感染早期阶段的干扰素等细胞因子产生时,可直接诱导STAT1和STAT3的激活。该结果表明非细胞因子依赖性早期抗病毒的天然免疫应答反应的存在,不仅为阐明病毒-宿主互作的分子基础提供新的理论依据,也为筛选新型抗流感病毒药物靶标提供了新思路。