利用青枯菌胞外蛋白输出缺失突变体防治西红柿青枯病的研究

作者采用转座子Tn5诱变植物青枯菌获得了世界首例植物青枯菌胞外蛋白输出缺失突变体(简称eep突变体)。该突变体在缺失了许多胞外蛋白(包括有植物细胞壁降解酶、果胶酶类和纤维素酶类)外输功能后,也失去了对寄主的致病力。因此,该类突变体有可能被应用于植物青枯病的生物防治。本文主要是针对eep突变体在番茄上的定埴能力和生防效果进行研究。     

花生种子带青枯病菌对传播青枯病的影响

从我国花生主要产区广东、湖北两省的花生青枯病病株的荚果种子中分离出了花生青枯病菌,病株种子带菌率为5％。采用人工接种花生种子的方法证明花生种子所带病菌的存活力与其含水量有着密切的关系,当种子含水量下降时,病菌的生存力也随之降低。当花生种子含水量降到8.9％时青枯病菌失去了在花生体内的生存能力。表明在播种时花生种子含水量在8.9％以上,则病菌在种子体内仍可存活,并有传播病害的能力。若在花生收获后使含水量控制在8.9％以下,有可能防止带菌种子对青枯菌的传播。     

植物青枯菌aac基因克隆及猝灭群体感应信号功能的研究

 【目的】研究植物青枯菌（Ralstonia solanacearum）aac基因编码的蛋白是否具有降解细菌群体感应信号分子的功能。【方法】PCR扩增获得青枯菌GMI 1000菌株的aac基因,将aac基因克隆到pET-5a原核表达载体上,在大肠杆菌中表达出AAC融合蛋白,将AAC融合蛋白与胡萝卜软腐欧氏杆菌（Erwinia carotovora sp.carotovora）混合后,共接种于马铃薯块茎,研究细菌致病力的变化。【结果】克隆了全长的aac基因,完成了aac基因原核表达载体的构建,研究了AAC融合蛋白对细菌致病力的影响。【结论】青枯菌aac基因编码的蛋白具有减弱胡萝卜软腐欧氏致病力的功能,为开发新的控害策略提供了依据。     

植物青枯菌相关基因的克隆及致病力测定分析

以PM2644为受菌体，通过基因功能互补的方法，将从野生青枯菌基因文库中筛选得到的克隆进一步克隆得到克隆pLTK15。胞外酶活性测定结果表明，pLTK15与突变株PM2644接合产生的接合子能完全恢复突变株PM2644聚半乳糖醛酸酶的活性，接合子上清液SDS－PAGE电泳结果表明，接合子只能互补PM2644缺失的62．5kDa的一种胞外蛋白，经致病力测定，pLTDK15能使突变株PM2644的致病力得到部分恢复。结果表明，聚半乳糖醛酸酶和62．5kDa的胞外蛋白在青枯菌的致病过程中起着一定的作用。     

应用单克隆抗体免疫荧光技术检测马铃薯青枯病潜伏侵染的初步研究

应用单克隆抗体免疫荧光技术(MIF)检测了青枯病在马铃薯种薯上的潜伏侵染。测试结果表明,MIF检测青枯病茵的灵敏度为2×10~3～2×10~4细菌/毫升。787.5倍荧光显微镜,每视野平坶有5个以上典型荧光细菌,即可判别为带菌(阳性),而1～4个荧光细菌则视为可疑,需作生物测定。从种薯脐部取样,经组织匀浆后采用低、高速离心收集细菌体,可提高样品青枯菌的检出率。     

高GC含量青枯菌aac基因PCR扩增体系的建立与优化

通过添加增效剂、正交试验设计优化PCR反应体系、联合采用多种PCR程序等措施,建立并优化了PCR扩增体系,成功地从高GC青枯菌基因组中扩增出了长度为2434bp且GC含量高达70．9Y00的aac基因。PCR反应体系为20pL包括5％DMSO、2．5mmol／LMgCl2、500／xmol／L dNTP、10pmol／L引物、1．25U Taq酶、50ng模板DNA。首先采用热启动PCR：95℃5min,保持80℃,加入Taq酶;然后采用二步PCR：5个循环包括变性95℃1min,65℃1min;最后采用降落PCR：30个循环为95℃ 1min,78℃1min,每个循环降低0．5℃,72℃3min;补充10个循环为95℃1min,63℃1min,72℃3min;72℃10min。该试验体系的建立与优化为研究高GC含量生物的基因功能提供了方法。     

细菌在植物病害生物防治上应用研究的进展

以生物防治为手段来控制农作物病害的尝试,早在本世纪三十年代就已开始,但是在相当长一段时间中处于停滞不前的状态。近十多年来,植病生防的研究进展明显地加快了,在有些国家如澳大利亚和美国等,已成为一个热门学科,可望在植物病害的防治上走出一条新路。     

甘蓝型油菜对核盘菌及其毒素的抗性遗传分析

采用Griffing双列杂交第四类遗传试验设计,运用朱军发展的加性-显性遗传模型,直接估算了甘蓝型油菜抗核盘菌及其毒素草酸的遗传方差、遗传力和基因效应.抗病性鉴定采用温室病圃和草酸浸根鉴定法,它们分别鉴定了对核盘菌和草酸的抗性.结果表明,油菜对核盘菌及草酸的抗性加性方差和显性方差均极显著(P＜0.01),抗病性主要由加性和显性基因控制,且对核盘菌抗性的加性方差大于显性方差,而对草酸抗性则是显性方差大于加性方差.油菜对核盘菌和草酸的广义遗传力分别为0.750和0.576,狭义遗传力分别为0.403和0.236.高遗传力表明可通过适当的抗病性鉴定方法有效地培育抗病品种(系).基因效应评价结果表明,抗、感亲本的基因效应是不同的,其中抗病亲本783-3具有较理想的加性效应值,同时在多数组合中有较低的显性效应值,是抗病育种的优良亲本,而感病亲本相反.抗×感病的后代既可能为抗病,也可能为感病.     

马铃薯环腐病酶联试剂诊断盒及其应用

酶联免疫吸附试验是近10年发展起来的一项新的血清学技术,现已广泛应用于人、畜、植物病毒和细菌病害的诊断。80年代初美国Agdia公司研制出酶联试剂诊断盒,并大量商品化生产。我们于1984年把酶联技术应用于马铃薯环腐病的诊断,为了使     

马铃薯环腐病种薯检验技术程序

马铃薯环腐病〔Corynebactorium mi-chiganens PV.sepedonicum(Spiek＆Kotth.)Dye〕是马铃薯上一种危险的细菌性病害,各国都把它列为重要植物检疫对象,要求种薯带病许可量为零。 早期采用的马铃薯环腐病种薯检验方法,主要为症状观察、革兰氏染色和病原细