芒草染色体核型分析

应用根尖压片法对芒草的染色体数目和核型进行了研究,核型分析按李懋学标准进行,核型类型根据Stebbins标准划分,核型不对称性系数（As．K％）按Artmo的方法计算。结果表明：芒草的染色体数目为2n=48,染色体基数为x=24,核型中有13对m染色体、8对Sm染色体及3对St染色体。核型公式为：2n=2x=48=26m＋16Sm＋6St。染色体的相对长度变化范围为0．45％-2．45％,臂比变化范围为1．10-3．97。最长与最短的染色体的长度比为5．74。核型不对称性系数（As．K％）为63．07％,核型属“2C”型。     

洪平杏体细胞胚胎发生初探

以洪平杏(Armeniaca hongpingensis Yu et Li)不同取样时期的不同外植体进行愈伤组织的诱导,研究发现洪平杏开花11周左右的去子叶胚和子叶较容易诱导出愈伤组织,污染率低,诱导率高。不同外植体愈伤组织诱导能力大小依次为去子叶胚=子叶>未成熟胚>花药>嫩叶叶柄>嫩叶叶片。以洪平杏子叶为外植体诱导体细胞胚胎发生,诱导子叶愈伤组织的最佳培养基是MS+0.5 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L 6-BA,愈伤诱导率为(97.04±2.31)%;胚性愈伤组织诱导的培养基为MS+0.2 mg/L NAA+0.1 mg/L 6-BA;体细胞胚胎增殖的培养基为MS+0.2 mg/L NAA+0.1 mg/L 6-BA+0.2 g/L水解酪蛋白。     

农杆菌介导的籼稻9311和华占遗传转化体系的研究

【目的】水稻转基因技术是推动水稻分子生物学研究和精准育种的重要工具。农杆菌介导法是水稻遗传转化的主流方法。然而受基因型限制,典型籼稻的转化效率仍然偏低,需提高其转化效率。【方法】以顽拗型籼稻品种9311和华占为受体材料,研究了不同大量元素、微量元素、有机物和碳源的组合,植物激素浓度,侵染培养基,乙酰丁香酮（AS）浓度和光周期对遗传转化效率的影响。【结果】在成熟种子组织培养试验中,MS大量元素、B5微量元素、N6有机物和麦芽糖为9311最优组合,华占最优组合为MS大量元素、MS微量元素、MS有机物和麦芽糖。诱导培养基中添加0.5mg/L的BAP或1.5mg/L的KT可显著提高9311和华占的组织培养再生率,可达70.0%以上。在侵染过程中,添加100μmol/LAS的转化效率高于200μmol/LAS。光周期实验显示9311和华占宜采用不同的光周期策略,9311在全黑暗条件下进行愈伤诱导和筛选,在全光照条件下进行分化,转化效率最高,达6.0%～6.4%,而华占在12h光照/12h黑暗条件下进行诱导、筛选和分化,获得的转化效率最高（5.0%～7.5%）。【结论】本研究优化了顽拗型籼稻931...     

浙江楠染色体核型分析

采用染色体常规制片法,结合显微摄影技术对浙江楠染色体进行检测分析,结果表明:浙江楠染色体数为2n=24,核型公式是2n=24=18m+6 sm,全组染色体总长度为58.11 μm,长臂总长34.69μm,核型不对称系数(AS.K %)为59.70%,核型属于Stebbins核型分类中的"2B"类型.     

巴东木莲DNA的提取及SRAP-PCR反应体系的正交优化

研究确定了提取巴东木莲基因组DNA的方法,采用正交试验设计法对影响SRAP-PCR反应的引物浓度、Taq DNA聚合酶的用量、Mg2 和dNTPs浓度及PCR扩增程序中的退火温度及循环次数进行了比较、优化.同时对DNA模板浓度进行了筛选.结果表明,Mg2 、dNTPs、Taq酶及引物的不同水平均对PCR反应结果有显著的影响.建立了巴东木莲20μL SRAP-PCR的反应体系为lxbuffer、Mg2 浓度为2.O mmol.L-1、dNTPs浓度为O.25 mmol·L-1、引物浓度为0.45μmol·L-1、Taq酶为0.5 U和模板DNA 40ng.适宜的扩增程序为94℃预变性1 min,94℃变性1 min,33℃复性1 min,72℃延伸1 min,10个循环;94℃变性1 min.55℃复性l min,72℃延伸1 rain,30个循环;最后72℃延伸5min.试验表明,该体系重复性好、稳定性强.     

绿色荧光蛋白及其在农作物研究中的应用

作为一种新型、方便的报告标记,来自多管水母属的绿色荧光蛋白(GFP),相对于其他报告蛋白(如β-半乳糖苷酶和萤火虫荧光素酶)在原位、实时动态研究中具有很多优越性,已广泛应用于农作物科学研究的各个领域。就GFP的特性及其在农作物研究中应用作一简要阐述。     

CRP基因原核表达载体的构建和表达及其免疫原性检测

采用大肠杆菌表达体系来获得C-反应蛋白(CRP)融合蛋白。以pDNR-CRP质粒为模板,用PCR方法扩增获得全长的CRP基因,将其克隆入表达载体pET28 a( )中,再转化到宿主菌BL21(DE3)中,加入IPTG诱导表达,表达产物做SDS-PAGE电泳分析,最后做免疫原性检测。成功地构建了CRP基因原核表达载体pET28 a( )-CRP,经IPTG诱导SDS-PAGE电泳分析表明C-反应蛋白能在大肠杆菌中获得表达,但免疫原性检测初步结果为阴性。结果证明CRP能以融合蛋白的形式在宿主菌BL21(DE3)中得到大量表达,表达产物缺乏免疫原性,其机理还有待进一步试验探讨。     

种子特异表达启动子的克隆分析及其植物表达载体的构建

根据GenBank已公布的种子特异性的Oleosin蛋白基因启动子序列设计合成引物,利用PCR技术从油菜总基因组DNA中扩增出Oleosin基因启动子序列(SOP),将该序列克隆到pGM-T载体中,经鉴定获得pGM-T-SOP重组载体。测序和序列分析表明,该启动子序列由899 bp核苷酸组成,其核苷酸序列与GenBank中的Oleosin基因启动子序列同源性高达95.6%。分别用限制性内切酶HindⅢ和BamH I双酶切重组质粒pGMT-SOP和双元植物表达载体pBI121,分别回收pGMT-SOP重组质粒中的SOP小片段和pBI121植物表达载体中去掉CaMV35S组成型启动子的大片段,经连接、转化和鉴定,获得由SOP驱动报告基因GUS的新型植物表达载体pBI121-SOP,为外源基因在油菜种子中的定位表达研究奠定基础。     

黑花生再生体系和遗传转化的初步研究

以黑花生品种黑霸920成熟种胚、幼叶和胚轴为外植体，对黑花生植株再生和遗传转化进行了研究。通过设置一系列不同浓度激素配比的培养基来优化各阶段培养条件，初步建立了高效的黑花生再生体系，即花生种子经75％乙醇表面消毒15min，MS＋6-BA2．0mg／L为最优化的种子萌发培养基，MS＋2，4-D2．0mg／L为最佳诱导愈伤培养基，幼叶为最佳诱导愈伤组织的外植体，MS＋6-BA8mg／L＋NAA0．5mg／L＋AgNO3 1mg／L为最佳分化培养基，MS＋NAA2．0mg／L＋6-BA0．2mg／L＋活性炭200mg／L为最佳生根培养基。同时确定了愈伤组织和幼苗的卡那霉素筛选压分别为30mg／L和300mg／L。利用农杆菌介导法将含有GUS基因和NPTⅡ基因的植物表达栽体pBI121导入花生组织，在对愈伤组织、幼叶和胚轴的GUS表达检测中均有蓝色斑块出现，证明GUS基因已成功转入到花生细胞中。     

兰花基因组DNA多态性RAPD分析

利用随机扩增多态DNA技术(RAPD)对兰属的3个品种春兰、春剑、蕙兰进行了分析与研究,建立了它们之间的DNA指纹图谱,找到了参试样品的特征谱带,并探讨它们之间的亲缘关系.结果从20条BA系列引物中筛选出能稳定扩增的10个引物,且对3个品种的植株进行扩增,共扩增出257条,其中243条具有多态性,分析结果表明春剑与春兰的相似系数较之与蕙兰的相似系数要高.