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N-糖基化对病毒的感染与增殖均具有重要作用,与PCV2复制相关的Rep蛋白含有三个N-糖基化位点。为了分析PCV2Rep蛋白N-糖基化位点突变对病毒复制的影响,本试验构建了三个双拷贝突变体感染性克隆2M23、2M256、2M286,并成功拯救病毒。通过间接免疫荧光检测病毒的拯救效果,TCID50测定病毒的感染力,荧光定量PCR检测细胞病毒的载量。结果显示,PCV2Rep蛋白的23~25aa、256~258aa N-糖基化位点突变后降低病毒的复制能力,而286~288aa突变后增强病毒的复制能力,为进一步阐明PCV2的复制及致病机制提供参考。 相似文献
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根据GenBank发表的猪圆环病毒2型(PCV2)基因序列设计并合成引物,通过点突变的方法对其进行单点、两点和3点突变,成功获得含单点、两点和3点的突变体。设计引物扩增突变体的ORF1片段,将目的片段分别经KpnI和XbaI双酶切进而将其连接到真核表达载体pVAX1中,成功构建PCV2-pVAX1-Rep真核表达载体。此重组表达载体的成功构建为进一步研究PCV2 ORF1编码蛋白的生物学活性打下了基础。 相似文献
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猪流行性腹泻病毒LAMP检测方法的建立及初步应用 总被引:1,自引:0,他引:1
猪流行性腹泻病毒是引起仔猪腹泻死亡的主要病原。为实现对猪流行性腹泻病毒(PEDV)的快速检测,利用PEDV S基因设计特异性引物,通过优化各种反应条件,建立了检测PEDV的环介导等温扩增快速检测方法(LAMP)。此方法特异性好,敏感度强,将反转录后的病毒c DNA稀释到108倍仍可检出,是PCR方法的100倍。本研究建立的LAMP方法操作简便、灵敏度高、特异性强,为临床PEDV的快速检测和预防奠定基础。 相似文献
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我国茶旅游与国外葡萄酒旅游相比尚处于起步阶段,需要借鉴和学习的内容有很多。本文从产业集群效益、政府与行业同力合作、借助节庆活动三个方面分析了国外葡萄酒旅游的发展经验,而后从建立联动机制、形成产业链条、提升参与程度、打造品牌形象、拓宽营销思路、利用节事活动等七个方面探讨了国外葡萄酒旅游对我国茶旅游的启示。 相似文献
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我国茶叶种植基地主要分布在各个少数民族地区。因此,茶园的规划具有民族特色。随着经济的快速发展,人们的生活压力不断的增加,为了缓解压力,通过旅游的方式来释放心中的压抑。茶文化旅游是最为一种新型的生态旅游形式,深得人们的青睐。茶园作为茶文化旅游的基地,茶园的规划直接影响这茶文化旅游的发展,所以我们要重视茶园的规划。 相似文献
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本研究旨在制备猪圆环病毒2型(PCV2)Rep蛋白单克隆抗体。PQE30-PCV2Rep蛋白在IPTG的诱导下表达,用SDS-PAGE对表达产物进行检测。将纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备单克隆抗体,ELASA法鉴定抗体亚型及效价。结果显示重组蛋白PQE30-PCV2Rep得到高效表达,筛选获得了3株稳定分泌抗Rep蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系1G4、2G4和6H12,其分泌的抗体分别为IgG2a、IgG2b、IgG2b亚型。其中,6H12抗体效价为256K,浓度为0.47mg/mL,纯度90%。本研究制备的单克隆抗体有较好的生物学特性,为PCV2的研究及快速诊断提供了新的方法。 相似文献
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JAK-STAT信号通路是阐明细胞因子生物学功能及病毒如何发挥作用的分子基础,但对于猪圆环病毒2型(PCV2)感染及病毒复制的作用机制,目前尚无报道。本研究采用PCR列阵方法,建立PK-15细胞JAK-STAT信号通路的功能分类芯片,分析JAK-STAT信号通路中所有已知的Jak和Stat家族成员、激活JAK-STAT信号通路的受体,以及与Stat蛋白相关的核辅助因子及共同活化因子、Stat诱导蛋白及该通路的负反馈调节蛋白等基因在PCV2感染后的差异表达情况,为进一步明确PK-15细胞JAK-STAT信号通路对病毒复制力和复制机制奠定基础。 相似文献