山羊碱性氨基酸转运载体基因SLC3A1cDNA序列克隆及表达

试验旨在克隆山羊碱性氨基酸转运载体基因SLC3A1 cDNA序列,探究其表达的组织特异性及其在小肠中的表达发育模式。参考GenBank已发表的绵羊、牛SLC3A1基因mRNA序列设计引物,克隆山羊SLC3A1基因的cDNA序列,采用实时荧光定量PCR的方法分析其在1日龄山羊11种组织及其在1日龄、6月龄、8月龄、10月龄、12月龄山羊十二指肠、空肠、回肠中的mRNA表达情况。结果表明,成功克隆得到了山羊SLC3A1基因cDNA序列,其与绵羊、牛、野猪、人、小鼠、大鼠的同源性分别为99%、97%、88%、86%、80%和79%。SLC3A1基因转录表达有明显的组织特异性,其在1日龄山羊肾脏、回肠、空肠、结肠中表达量依次降低(P<0.05),其他组织中表达量很低。同一月龄山羊,SLC3A1基因在不同肠段的表达量数值上回肠>空肠>十二指肠。SLC3A1基因在不同月龄山羊十二指肠表达量以1日龄山羊为最高(P<0.05),6~12月龄山羊相同肠段之间表达量无显著差异(P>0.05);空肠表达量随山羊年龄的增加均呈现逐步降低的趋势;回肠表达量在各个月龄山羊之间差异不显著(P>0.05)。结果说明,山羊碱性氨基酸转运载体基因SLC3A1的主要表达部位在肾脏和肠道,推测b^0,+碱性氨基酸转运系统转运氨基酸的主要部位为肾脏和肠道。SLC3A1基因在山羊小肠受肠段和发育阶段的影响,具有不同的表达发育模式。     

芪合酶基因的克隆及其酵母表达载体的构建

应用基因工程技术将从中国野生属葡萄种高抗白粉病的华东葡萄白河-35-1中分离出的芪合酶基因cDNA片段（Stilbene synthase，STS）进行PCR扩增；把回收的目的基因PCR产物定向插入克隆载体pGEM-TEasy中进行测序与序列分析；采用定向克隆的方法将芪合酶基因克隆到大肠杆菌-酵母菌穿梭型酿酒酵母表达载体pYES6／CT上，转化大肠杆菌，提取阳性重组质粒转化酿酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）菌株INVScl，酵母菌落PCR电泳结果显示，在约1200bp处有一条亮带，证明芪合酶基因酵母表达载体构建成功，为后期工作的开展奠定了基础，并为开发一种含有白藜芦醇生物活性成分的酵母微生态制剂提供了重要的实验素材。     

酵母菌生长曲线的测定及其转葡萄芪合酶基因重组菌遗传稳定性的检测

采用分光光度计比浊法测定酿酒酵母INVSc1的生长曲线,确定菌体生长规律;并以此为依据,制备酿酒酵母感受态细胞,进行葡萄芪合酶基因酿酒酵母重组质粒的转化;采用菌落PCR法快速鉴定阳性重组子,并进一步检测重组质粒在重组菌中的稳定性.结果表明,于酵母菌对数生长中期(OD600为0.8时)进行重组质粒的转化,可以得到较高的转化效率;在0～72 h发酵培养过程中重组质粒在宿主菌中的稳定性达到100%.这为后续工作开展葡萄芪合酶基因在酿酒酵母中的诱导表达研究奠定了技术基础.     

黄淮麦区小麦品种高分子量谷蛋白亚基组成及遗传多样性分析

为给小麦育种和面粉的深加工提供参考依据，利用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）方法对黄淮五省区50份主推小麦品种的高分子量谷蛋白亚基（HMW-GS）组成进行了研究，并按照Payne等的评分方法计算其Glu-1位点的品质得分。结果表明，黄淮麦区小麦品种中HMW-GS变异较为丰富，在参试材料中共检测到12种不同的亚基类型和17种HMW-GS组合类型，品质平均得分在5．5～7．5分之间。根据HMW-GS组成，可将其聚为3大类，第一大类包括7个品种，其Glu-1品质评分最高，为8～10分；第三大类有4个品种，该类品种品质评分很低，为5分；其它小麦品种被聚于第二大类，其品质评分变化幅度较大，为4～8分。     

水稻CRISPRa系统的优化及验证

CRISPR激活(CRISPR activation, CRISPRa)是通过dCas9-sgRNA复合体融合或招募转录激活域至启动子区以增强基因转录的CRISPR衍生技术。为提高水稻CRISPRa系统特异性及其激活效率,设计点突变引物将dCas9突变为特异性更强的HFdCas9,同时采用2×35S启动子表达密码子优化的水稻HFdCas9-TV。通过将HFdCas9-TV质粒和sgRNA质粒共转染水稻原生质体,基于 OsGW7和 OsF3H的相对表达量变化检测所构建的CRISPRa系统激活效率。结果表明,该系统可激活 OsGW7至对照组的95倍,为CCTV系统的2.2倍;可同时激活 OsGW7、 OsF3H表达量分别至对照组的33倍和26倍。该系统的建立为开发特异性更强、效率更高的植物CRISPRa系统奠定前期试验基础,为水稻及其他作物分子育种提供“多重加法”的技术方案。     

生物技术综合大实验开设的实践与探索

对生物技术综合设计性实验的特点、实施方法、教学效果等进行了系统的总结与分析。实践表明,生物技术综合大实验提高了学生对专业文献资料获取的能力,培养了学生在科研工作中严谨的作风以及独立分析问题和解决问题的能力,激发了学生对实验知识及实验技能的学习兴趣和参与实践的积极性,是培养学生综合素质和创新能力的有效途径。     

水杨酸对玉米幼苗抗旱性的影响

利用土培研究了不同浓度水杨酸(Saliclic Acid,简称SA)对玉米幼苗抗旱性的影响.结果表明,叶面喷施SA0.2 g/L,可以增强玉米幼苗累积可溶性糖和脯氨酸,光合速率下降最小,气孔导度、蒸腾速率最小,提高了叶片内的水分含量.这些生理原因导致收获后玉米幼苗生物量较高。     

农业院校《动物生物化学》课程自主学习教学模式初探

 动物生物化学是农业院校动物科学与动物医学专业重要的专业基础课程。随着生物科学技术的迅猛发展,学科间交叉渗透不断产生新的生物边缘学科,使得动物生物化学课程涉及内容不断扩展,大量复杂教学内容和有限学时之间的矛盾已成为困扰大学动物生物化学教学工作的严峻问题。本文以建构主义教育理论为指导,结合动物生物化学课程的特点,总结近年教学改革成果,初步建立了动物生物化学课程大学生自主学习教学模式,其基本结构层次为：目标任务-兴趣动机-资源环境-过程控制-反馈交流-意义建构。此模式强调教师与学生在教学过程中的对等主体地位,着力培养学生在学习过程中的主动性和自主性。通过自主学习很好解决了课程有限学时与大量教学内容的矛盾,取得了良好的教学效果。同时,此模式对培养大学生自主学习能力与良好学习习惯,促进终身学习型社会的形成具有积极的作用。