应用双抗夹心ELISA法检测皱纹盘鲍致病病原—创伤弧菌的研究

以皱纹盘鲍脓足病致病病原－ － 创伤弧菌为抗原,制备兔抗血清,抗体纯化后以辣根过氧化物酶标记,建立检测创伤弧菌的双抗夹心ＥＬＩＳＡ 检测法。结果表明,双抗夹心ＥＬＩＳＡ 法有较高的灵敏度,可检出含菌１０４ 个／ｍｌ 的菌悬液。与创伤弧菌对照菌株有明显的阳性反应不与副溶血弧菌、溶藻胶弧菌、河流弧菌等８ 株对照菌株产生影响检测结果的交叉反应。应用该法检测３０ 份病鲍样品,阳性检出率为６６ ．７ ％ 。     

坛紫菜自由丝状体细胞超微结构的初步研究

本文介绍了用扫描电镜和透射电镜对坛紫菜自由丝状体细胞观察的结果。发现在坛紫菜自由丝状体的膨大藻丝细胞外壁上具有脊突；在丝状藻丝及膨大藻丝细胞的间壁上，存在着孔状联系。在坛紫菜自由丝状体的细胞质中，清晰地观察到内质网结构；这些内质网多分布于细胞核的周围，有些地方并与核膜连接，在细胞膜的附近也能观察到内质网的存在。在细胞核中可以看到双层核膜，在双层核膜之间是一核膜间区，核膜上具有核孔，此外还可见到核仁和浓聚深色的染色质。     

黄颡鱼甘露糖受体基因的克隆和功能分析

甘露糖受体(MR)隶属凝集素超家族,主要表达于巨噬细胞和未成熟的树突状细胞表面。MR不仅在先天免疫防御中发挥重要作用,还通过参与抗原呈递,激活T淋巴细胞,启动获得性免疫应答过程。本研究采用同源克隆技术获得黄颡鱼甘露糖受体(pf MR)基因,采用荧光定量PCR技术检测MR在正常黄颡鱼体内的分布情况,采用鲖爱德华菌感染黄颡鱼头肾巨噬细胞和甘露聚糖封闭MR方法研究黄颡鱼MR在抗细菌感染中的作用。结果显示,pf MR同团头鲂、草鱼、斑马鱼和尼罗罗非鱼的MR聚为一支。pf MR在所检测的12个组织中均有分布,其在肾脏、脾脏和肌肉组织中表达量较高,在血液中表达量较少。鲖爱德华菌感染黄颡鱼头肾巨噬细胞后,pf MR、IL-1β和TNF-a均被细菌诱导表达,超氧阴离子和一氧化氮的含量也上升,超氧阴离子在感染30 min后即显著上升,一氧化氮在感染12 h后才显著上升。甘露聚糖竞争结合MR,显著抑制巨噬细胞内化GFP标签的鲖爱德华菌,加入EDTA减少内化的荧光强度,加入Ca~(2+)使内化的荧光强度回升。研究表明,黄颡鱼头肾巨噬细胞MR参与鲖爱德华菌的识别和内吞过程,而且依赖Ca~(2+)。     

浸泡免疫迟钝爱德华氏菌疫苗诱导牙鲆黏液细胞的动态变化

为探明鱼类黏膜相关淋巴组织中黏液细胞对疫苗免疫的应答特性,本研究利用组织学和组织化学技术,研究了浸泡免疫灭活迟钝爱德华氏菌前后牙鲆皮肤、鳃、前肠、中肠和后肠中黏液细胞数量和特性的时序变化。苏木精-曙红(HE)、阿尔新蓝-过碘酸雪夫氏(AB-PAS)染色结果显示,免疫前皮肤主要分布含中性黏多糖的Ⅰ型黏液细胞以及含中性黏多糖和少量酸性黏多糖的Ⅲ型黏液细胞,鳃中可观察到Ⅰ、Ⅲ型以及含酸性黏多糖和少量中性黏多糖的Ⅳ型黏液细胞,前肠中主要分布Ⅰ型黏液细胞,中肠、后肠上皮中可观察到Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型和含酸性黏多糖的Ⅱ型黏液细胞。免疫后,牙鲆黏膜免疫相关淋巴组织中黏液细胞总量随时间呈现先增多后减少趋势,后肠在第5天达到峰值,其他于第3天达到峰值;免疫后各组织中Ⅰ型黏液细胞数量减少,含酸性黏多糖成分的Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ型黏液细胞数量显著增多,表明疫苗免疫诱导黏液细胞成分由中性黏多糖向酸性黏多糖转变。p H 2.5和p H 1.0条件下AB染色结果显示,免疫后黏膜相关淋巴组织中酸性黏液细胞数量增多,且多数为硫酸化酸性黏液细胞。本研究结果为鱼类黏液的免疫防御功能及黏液细胞在鱼类黏膜免疫中的作用提供了理论依据。     

Characterization of Collagen Enzymatic Hydrolysates Derived from Lizardfish (Synodus fuscus) Scales

Acid soluble collagen was extracted from the scales of lizardfish and characterized with sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and amino acid analysis. After 8 h of collagen hydrolysis, hydrolysates had an estimated degree of hydrolysis (DH) from 4 ± 0.05 to 25 ± 0.63% (p < 0.05). All hydrolysates had angiotensin converting enzyme inhibitory and antioxidant activity. These activity levels showed little change after treatment with gastrointestinal proteases. Results indicated that the lizardfish by-products may be improved by enzymatic treatment with acid-soluble collagen from lizardfish scales.     

岗更湖鲫的生长和生活史对策研究

2008年5～9月于岗更湖取得803尾鲫标本,研究了其生长及生活史类型.用鳞片鉴定年龄,鳞径(R)和体长(L)的关系为L=3.667R-1.737;用特殊von Bertalanffy生长方程、一般von Bertalanffy生长方程、Gompertz生长方程和灰色动态生长模型共4种生长模型拟合了岗更湖鲫的生长,根据各模型拟合残差平方和的大小判断,特殊von Bertalanffy生长方程拟合效果最好;根据r-选择和k-选择的典型特征及7个生态学参数值,判断出岗更湖鲫偏向r-选择,应用平衡产量模式计算改变瞬时捕捞死亡率(F)和渔业补充年龄(tc)对应的产量变化,同样证实岗更湖鲫偏向r-选择.作为渔业管理对策,岗更湖鲫的捕捞年龄应在3龄以上,捕捞强度不应超过2.0.     

乌苏里江黑斑狗鱼种群生态学特征的研究

本报道乌苏里江名贵冷水鱼类黑斑狗鱼种群生态学。通过158尾样品测定，对其形态学特征、捕捞群体的体长体重组成、年龄与生长、生殖力、性比、初始性成熟、成熟系数、肥满度、摄食等生态学特征进行研究，并提出其资源繁殖保护措施。     

Effect of dietary phosphorus levels on growth and body composition of crucian carp,Carassius auratus under indoor and outdoor experiments

Indoor and outdoor experiments were carried out simultaneously to evaluate the effects of dietary phosphorus levels on growth performance and body composition of crucian carp. Monocalcium was used to formulate extruded feed containing available phosphorus (AP) of 1.5 (D1), 4.7 (D2), 6.3 (D3) and 9.0 (D4) g kg^?1. Twelve 500‐L recirculating tanks were assigned to four triplicate groups with each tank stocked with 15 juveniles (39.88 ± 0.14 g) for indoor experiment. Twelve polyethylene enclosures were assigned to four groups with each one stocked with 120 juveniles (44.08 ± 1.36 g). After 8 weeks of feeding, survival ranged from 96% to 100%. Weight gain, special growth rate, protein efficiency ratio and feed conversion rate did not show significant differences among dietary treatments in both experiments. Fish cultured in the enclosures grew better, although D1 and D2 treatments did not reach significant level. Crude protein and phosphorus content of the fish were not significantly affected by dietary phosphorus level. Moisture, crude lipid, crude ash and vertebrae phosphorus were significantly affected by different phosphorus levels. Based on vertebrae phosphorus, crucian carp cultured in the tanks and in the enclosures showed phosphorus deficiency under 4.7 g kg^?1 and 6.3 g kg^?1 AP, respectively.     

草鱼、鲢鱼催产前后血液中促性腺激素含量的变动

应用放射免疫测定法,研究了草鱼、鲢鱼催产前后血液中GTH含量的变化。催产后草鱼、鲢鱼血液中GTH的含量增加到“排卵阈值”水平,也就是比产卵前增加30-40倍,产卵活动才能实现。由此阐述了鱼类也象其他脊椎动物一样,存在着丘脑下部——垂体——性腺系统的调节机制。     

鲤细胞因子多克隆抗体的制备及检测

为从蛋白质水平研究细胞因子在鲤体内免疫应答过程中的合成变化,本研究采用PCR技术克隆TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-10和TGF-β基因含有部分抗原决定簇的片段,引入双酶切位点Bam HⅠ和HindⅢ后连接至p ET-32a/21a,构建相应的表达载体,制备多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价,并以此作为实验工具,检测经嗜水气单胞菌感染后鲤血清中炎性细胞因子的合成变化。结果显示,基因TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-10和TGF-β融合蛋白分子量分别约为31.8、31.7、35.3、32.5、18.0和33.6 ku;抗体效价达到2.4×106;在病原菌感染后的不同阶段,促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12和抗炎细胞因子IL-10、TGF-β呈现出不同的合成变化。研究表明,制备的抗体具有较高的效价、亲和力和特异性,可用于鲤细胞因子的定量研究,该抗体的获得为鲤免疫应答与细胞因子合成的系统研究奠定了基础。同时,获取的鲤细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-10和TGF-β的抗体亦可用于其他鱼类细胞因子蛋白质水平的定量研究。