兽药粉剂中氯霉素类和硝基呋喃类药物的液相色谱-串联质谱分析方法的研究

建立了兽药粉剂中氯霉素类和硝基呋喃类共7种抗菌药物的液相色谱-串联质谱筛选方法。样品经水溶解,乙酸乙酯提取样品中的药物,OasisHLB固相萃取小柱净化,液相色谱-串联质谱仪测定。分别对该方法的检测限和专属性进行了实验室内和实验室外验证。结果表明,该方法简单、灵敏、特异性强,适用于兽药粉剂中氯霉素类和硝基呋喃类的定性筛选测定。     

伪狂犬病病毒鄂A株gG^—／LacZ^＋突变株的构建

以从湖北某猪场分离鉴定的鄂A株为亲本，提取其基因组DNA，克隆含gG基因的SphI/KpnI片段，然后将LacZ基因融合到gG启动子下游，得到重组质粒pUSKZ,将重组质粒与鄂A株基因组共转染PK－15细胞，待细胞完全病变后，在X－gal存在下，作蓝斑筛选纯化。经斑点杂交和PCR扩增证实得到的是基因型为gG^-/LacZ^ 的重组伪狂犬病病毒。     

连续低剂量黄曲霉毒素B1对大鼠肝肾损伤作用

用含有不同质量浓度黄曲霉素B1（AFB1）（0、4、20、25、50μg／kg）的污染饲料连续饲喂各试验组大鼠60d,于7、15、30、60d静脉取血,测定各组大鼠肝功能与肾功能生化指标。每周检测大鼠体质量,试验第60天断头处死大鼠,检测肝肾组织病理学变化并计算各组大鼠的脏体系数。试验期间备组受试动物未发现明显的中毒症状和异常情况,60d内无受试动物死亡。与对照相比,不同剂量组AFB1对大鼠体质量无显著性影响;连续喂饲7d,大鼠血清AST和BuN含量显著升高（P〈0．05）;连续喂饲15d,大鼠血清AsT、BUN和ALB含量显著升高（P〈0．05）,连续喂饲30d,大鼠血清BUN含量显著升高（P〈0．05）,连续喂饲60d,大鼠血清CR和BUN含量显著升高（P〈0．05）。在各测试质量浓度条件下,大鼠虽未发现明显的中毒症状和异常情况,试验期间无动物死亡,但与空白对照相比,各剂量组AFBl对大鼠均产生了显著的肝肾组织病理学损伤,中毒程度与给毒剂量成正相关性。随着毒素暴露时间延长,大鼠肝脏对低剂量AFBl表现出一定的耐受性,而大鼠的肾脏损伤与毒素暴露时间表现出显著的积累效应。     

副猪嗜血杆菌黑龙江株的分离与鉴定

为确定黑龙江某猪场发病猪群的病原,本研究从疑似浆膜炎的病料中分离到一株革兰氏阴性细小杆菌,通过对其进行细菌形态学、培养特征、生化特性和16S rRNA基因PCR鉴定,结果表明该分离菌株为副猪嗜血杆菌(HLJ-1分离株)。16S rRNA基因序列分析结果显示:该分离菌株与参考株的基因同源性达99%;药敏试验结果表明HLJ-1分离株对头孢曲松、头孢噻肟等β-内酰胺类抗生素高度敏感;小白鼠致病性试验结果显示,该分离株具有较强致病性。     

梧桐花黄酮的提取及其抑菌、抗病毒效果

以10倍原料质量的60％乙醇在75℃条件下对梧桐花进行浸提,并对总黄酮的含量进行了测定.为了研究梧桐花总黄酮对多种常见畜禽病原的体外抑菌、抗病毒作用,采用培养基打孔法,观察梧桐花总黄酮对致病菌的抑菌作用;采用试管法,检测梧桐花总黄酮的最小抑菌浓度;采用细胞培养技术,检测梧桐花总黄酮对新城疫病毒(NDV)和法氏囊病病毒(IBDV)在细胞内增殖的抗病毒作用.结果显示,梧桐花总黄酮对供试菌均具有抑菌作用,其中对四联球菌、八叠球菌、大肠杆菌、禽波氏杆菌的抑菌效果最好,抑菌直径D＞16 mm;梧桐花总黄酮在3.125 g/L时能够100％抑制NDV在CEF内增殖;梧桐花总黄酮在1.563 g/L时能够100％抑制IBDV在CFE内增殖;梧桐花总黄酮在体外质量浓度为1.563 g/L时可直接灭活所有NDV;梧桐花总黄酮在体外质量浓度为0.781 g/L时可直接灭活所有IBDV.结果表明,梧桐花总黄酮具有体外抑菌和抗病毒作用,为将其研制成新型、绿色环保的中草药制剂提供了试验基础.     

嗜水气单胞菌 β-hemA 重组菌的优化培养及其生长曲线的测定

用正交试验探讨温度、培养基、时间三个因素对嗜水气单胞菌β-hemA重组菌E.coliDH5α(PCB)基因产物表达量的影响,通过优化培养,选择最佳培养条件,显著提高了β的溶血素基因(β-hemolysisgene,β-hemA)产物的产量。实验结果表明:该重组菌株在100mlTSB(添加0.05%酵母浸提物,1.8μg/mlZnCl2),37℃培养30h收获,其毒素蛋白含量为3258μg,毒素溶血价为17.44hu/μg,而在LB(100ml)和营养肉汤(100ml)中最高蛋白量和溶血活性分别为1260μg,14hu/μg和1199μg,8.22hu/μg。所选择的三个因子中对毒素蛋白质含量影响最大的是培养基,其次是温度;而对溶血素影响最大的则是温度,其次为时间。最佳生长曲线测定结果表明,在培养基预热至37℃的情况下,PCB6h能进入对数期。     

饲料中添加不同水平醋糟对獭兔肉品质的影响研究

为研究醋糟作为粗纤维饲料对獭兔肉品质的影响,选择90日龄健康的生长獭兔180只,随机分成6组,分别饲喂6种不同比例醋糟替代谷草与小米壳(0%、7%、14%、21%、28%和35%)的饲粮。结果表明:各组氨基酸总量、鲜味氨基酸含量差异不显著(P>0.05);在人体必需氨基酸含量方面,各试验组都有一定程度的提高,其中35%组最高(P>0.05);兔肉中蛋白、灰分与水分含量各组差异不显著(P>0.05)。脂肪含量35%组与对照组接近,与21%组差异显著(P<0.05);各组滴水损失、熟肉率及剪切力差异不显著(P>0.05);肉色方面,35%组与对照组最低;在pH值方面,对照组与各试验组之间差异不显著(P>0.05)。因此,从兔肉的营养价值和饲料成本等综合考虑,在獭兔日粮中添加35%的醋糟对肉品质效果较好。     

Phylogenetic analysis of S1 gene of infectious bronchitis virus isolates from China

Between 2006 and 2009, seven strains of infectious bronchitis (IB) virus (IBV) were isolated from vaccinated chicken flocks on different chicken farms in China. The pathogenic characters of seven IBV strains were assessed. Each of the seven strains was infective to the test chickens and could induce an immune response. The results from chicken embryo cross-neutralization assays showed that these strains were antigenically distinct from classic IBV strains of H120, M41, Conn, and Gray. Compared to H120 vaccine strain, point mutation, short insertion, and deletion occurred at many positions in the S1 protein of the seven strains. Five of the seven strains had the motif (HRRRR), which was identical to that of the epidemic IBV strains in China. Two new motifs (HRLRR and RRIRR) emerged in the isolated strains. The homology of the nucleotide and amino acid sequences of the S1 gene among the seven isolates was 81.7%-99.7% and 79.0%-99.4%, respectively. These seven strains were also genetically different from the vaccine strains and non-China IBV strains but closely related to large numbers of Chinese strains. The seven isolates and 36 reference IBV strains were clustered into six distinct groups (I-VI). The seven strains were categorized into groups I, II, and III, forming a big phylogenetic branch, which is closely related to Chinese IBVs, whereas the vaccine strains belonging to group VI are genetically distant from groups I, II, and III. The results from this study indicate that different IBV strains cocirculate in the chicken population in China.     

紫花苜蓿与草地早熟禾轮作模式对其农艺性状和营养品质的影响

为研究紫花苜蓿（Medicago sativa,本试验中记为A）与草地早熟禾（Poa pratensis,本试验中记为K）轮作对其农艺性状和营养品质的影响,本试验以种植5年的紫花苜蓿（A）和草地早熟禾（K）为前茬,在2块草地上分别种植紫花苜蓿（A）和草地早熟禾（K）,即形成AA,AK,KA,KK 4种种植模式,以AK和KA为轮作处理,AA和KK为连作对照。研究了轮作对紫花苜蓿和草地早熟禾各刈割茬次的株高、干草产量、干鲜比、茎叶比、粗蛋白（Crude protein,CP）、中性洗涤纤维（Neutral detergent fiber,NDF）和酸性洗涤纤维（Acid detergent fiber,ADF）等指标变化的影响。结果表明：第1~3茬,AK轮作草地早熟禾的株高较KK连作提高6.31%~9.47%,且在第2茬差异显著（P<0.05）。KA轮作紫花苜蓿的株高较AA连作提高6.72%~9.02%,且在第2茬差异显著（P<0.05）。AK轮作的草地早熟禾年干草产量较KK连作提高8.54%,KA轮作的紫花苜蓿年干草产量较AA连作提高11.57%。AK轮作草地早熟禾的干鲜比较KK连作在3茬间差异显著（P<0.05）,且增加幅度大于KA比AA的增加幅度。不同轮作模式对茎叶比的提高在后2茬差异明显。AK轮作下,草地早熟禾的粗蛋白含量比KK提高14.16%~15.95%,增长幅度优于KA比AA的增加幅度。AK轮作和KA轮作的中性洗涤纤维含量和酸性洗涤纤维在不同茬次较KK连作和AA连作模式差异显著（P<0.05）。紫花苜蓿与草地早熟禾轮作可以提高后茬牧草的株高、干草产量、茎叶比和干鲜比以及粗蛋白含量;并且降低后茬的酸性洗涤纤维和中性洗涤纤维。本试验旨在通过探究紫花苜蓿与草地早熟禾轮作下牧草农艺性状和营养成分的变化情况,为今后豆-禾牧草轮作、草种搭配以及模式排布提供借鉴依据。     

硒锌和富啡酸配施对紫花苜蓿叶片抗氧化酶活性及产量的影响

在氮磷钾供应充分情况下,采用大田小区试验方法,通过播前基施硒（Se）、锌（Zn）微肥和腐殖酸（富啡酸,fulvic acid,FA）,设对照（CK,不施肥）、施氮磷钾（NPK）、增施富啡酸（NPK+FA）、增施锌、硒微肥（NPK+Zn+Se）、增施富啡酸和锌、硒微肥（NPK+FA+Zn+Se）等5个不同施肥处理,在严重缺硒和锌石灰性土壤中,研究了硒锌和富啡酸配施对紫花苜蓿叶片内过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）等抗氧化酶活性、游离脯氨酸（Pro）及丙二醛（MDA）和干草产量的影响。结果表明：两茬中叶片过氧化物酶（POD）活性均以NPK+FA处理最高,其次是NPK+FA+Zn+Se处理,说明富啡酸（FA）比微肥（Se+Zn）更能有效提高紫花苜蓿叶片过氧化物酶活性,而硒锌对其活性影响不显著;硒锌与富啡酸配施可显著提高紫花苜蓿叶片内游离脯氨酸（Pro）含量、过氧化氢酶（CAT）及超氧化物歧化酶（SOD）活性,从而显著提高紫花苜蓿抗氧化能力;但各施肥处理对丙二醛（MDA）无显著影响。施肥可显著提高紫花苜蓿产量,施用富啡酸比硒锌微肥的增产效果更明显,且硒锌与富啡酸配施效果最好。因此,在氮磷钾供应充足条件下,适量硒锌微肥或富啡酸均能显著提高紫花苜蓿的抗氧化能力及提高紫花苜蓿产量,且微肥和富啡酸配施效果最好。