柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2基因真核表达载体的构建及在293T细胞中表达

为构建柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2(Eimeria tenella rhoptry neck protein 2,EtRON2)基因的重组质粒pCAGGS-EtRON2,并转染293T细胞进行表达,以柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA为模板,经PCR扩增其核心编码区的一部分,将其克隆至pGEM-Teasy载体,构建pGEM-Teasy-EtRON2质粒,双酶切出目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接,构建真核表达质粒pCAGGS-EtRON2。该重组质粒经酶切和测序鉴定后转染293T细胞进行表达,分别用免疫印迹和间接免疫荧光鉴定EtRON2基因的表达情况。所构建的真核表达质粒pCAGGS-EtRON2经过双酶切鉴定,可见一条大小约为1172 bp的目的条带,测序结果与GenBank所登录序列完全一致;免疫印迹实验可见大小约为43 kDa的目的蛋白条带,间接免疫荧光实验可以检测到特异性红色荧光。研究结果表明已成功构建了EtRON2的真核表达质粒pCAGGS-EtRON2,并在真核细胞中获得表达,为深入研究EtRON2的生物学功能奠定了基础。     

肉牛育种目标的经济导向

人们普遍认为,设计结构化育种方案的首要步骤是肉牛的育种目标,其发展可分为以下阶段:规范的育种、生产和销售系统,商业收入和费用支出来源,确定生物性状对收入和费用支出的影响,衍生的经济价值,育种选择标准,预估的表型特征和遗传参数。本文旨在综述肉牛养殖目标的发展及经济价值的导向。     

Effects of Donor Cells Treated with Egg Extracts on the Development Competence of Cloned Embryos

Japanese Balck cattle fetal fibroblasts (JBCFF) were induced with Xenopus leavis egg extracts and somatic cell nuclear transfer (SCNT) was carried out with the reprogrammed JBCFF as donor cells in order to investigate their effects on SCNT efficiency.Three samples of egg extracts were acquired from different Xenopus laevis.The protein contents and kinds in extracts were evaluated with BCA Protein Quantification Kit and SDS-PAGE.Concentration of Digitonin to permeabilize JBCFF was optimized and assessed with PI staining.Reprogrammed cells treated with egg extract were used as donor in SCNT.Additionally the reconstructed embryos were activated with ionomycin+6-DMAP and A23187+6-DMAP to compare their effects on the development competence.The protein contents of extracts samples were 56.2255,64.6570 and 71.2158 μg/mL,respectively,the each extract had the same composition about 40-55 and 70-100 ku.The optimal concentration of Digitonin was 7 μg/mL and the permeabilization rate was 55.44%.After extracts treatment and continuous culture for 6-7 d,JBCFF formed well-defined colony structures.No significant composition difference was found in rates of fusion (92.83% vs 96.04%),cleavage (89.64% vs 89.78%) and blastocyst formation (24.06% vs 23.12%) of cloned embryos when the colony cells and JBCFF without extracts treatment were used as donor cells (P>0.05).Similarly,the two activation methods had no significant effect on the developmental competence of cloned embryos (cleavage rate 92.16% vs 92.28%,blastocyst rate 23.21% vs 24.18%).Conclusively,Xenopus leavis,egg extracts could induce JBCFF reprogramming to a low differentiated state.However donor cells with reprogramming partially could not improve the development of cloned embryos and its mechanism requires further research.     

禽致病性大肠杆菌的分离、O血清群鉴定及药物敏感试验

对2005年5月~2016年3月自河北、山东、河南、江苏、陕西、辽宁等省发病鸡场疑似大肠杆菌病的病死鸡病变部位分离的194株禽致病性大肠杆菌进行了生化特性测定、O抗原血清群鉴定及药敏试验。试验用5种大肠杆菌单因子（O1、O2、O57、O65、O78）阳性血清进行O血清群鉴定,确定了124株O血清群,占鉴定菌株数的63.9%（124/194）,其中O1 3株、O2 26株、O57 15株、O65 47株和O78 33株,O65和O78为优势菌株,而O2和O57血清群菌株次之,O1血清群菌株最少。8种药物（氨苄西林、新霉素、多西环素、磺胺间甲氧嘧啶、替米考星、环丙沙星、头孢噻呋和氟苯尼考）的药敏试验结果表明,受试的5株大肠杆菌分离株均对环丙沙星和新霉素敏感,而对其他药物均有不同程度的耐受。本研究结果表明O65、O78、O2和O57血清群高度流行,为进一步研发多价菌苗奠定了基础。     

粗粮型羊乳奶泡加工工艺的响应面优化

以羊乳、玉米面为主要原料,以产品的感官评分和硬度为响应值,利用响应面分析法对粗粮型羊乳奶泡的加工工艺进行优化。结果表明：最佳工艺参数为：玉米面与羊乳比例（m/V）0.435∶1、木糖醇与蔗糖比例（m/m）约0.712∶1、蔗糖酯（以质量分数计,下同）0.18%、β-环状糊精2.8%,柠檬酸0.0958%、明胶1.994%。研制出的产品不仅外观光滑、色泽均匀、口感清凉且甜度适中、兼有羊乳和玉米面的特有香味,感官分值达95.48分,硬度为371.95 g,适合于绝大部分人群,产品中的营养物质和保健成分也得以最大程度保留。     

海藻多糖对肉鸡生长性能影响的研究

在肉鸡饲粮中添加1.5 %海藻多糖 ,对山东地方特色保种白羽鸡进行饲养试验 ,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)PAGE技术分析血液中脂酶(EST)、乳酸脱氢酶(LDH)、蛋白质的多态。结果表明 ,处理组90Ku蛋白亚基组分表达程度显著增强。EST同工酶快区Es -1位点 ,由多等位基因控制 ,酶带着色程度显著减弱 ,其活性下降42.7 %。LDH同工酶出现3条酶谱带 ,酶带着色的程度明显增强 ,其活性增加3倍。此外 ,添加组的饲料利用率、增重及生长性能明显提高 ,提示海藻多糖直接或间接调控基因表达水平 ,与生长性状呈正相关。     

原位PCR技术在兽医分子生物技术中的应用

本文阐述了原位PCR技术的原理、操作步骤及注意事项，原位PCR中非特异性问题及主要技术难点，原位PCR结果对照实验的目的和设计方法，不同原位检测技术的应用比较及其在兽医分子生物技术的应用和前景。对临床兽医分子水平的研究和诊断具有一定的指导作用，是兽医分子生物技术的重要研究内容。     

一种利用气相色谱快速检测瘤胃体外发酵液中三甲胺浓度的方法

本试验旨在建立一种利用气相色谱快速检测瘤胃体外发酵液中三甲胺浓度的方法.瘤胃体外发酵试验设置2个组,对照组(n=4)和试验组(n=4),试验组每个发酵瓶中添加0.0414 g三甲胺盐酸盐,发酵24 h.采用10 mol/L氢氧化钾溶液对发酵液样品进行预处理,使用WEL-PEG20M色谱柱和氢火焰离子检测器对三甲胺进行分...     

鸡繁殖性能近交衰退相关CpG岛差异甲基化基因的筛选

鸡繁殖性能近交衰退是地方鸡遗传资源活体保种过程中面临的重要问题之一,本研究旨在探讨全基因组CpG岛(CpG island,CGI)区DNA甲基化在鸡繁殖性能近交衰退中的作用.分别从狼山鸡高近交组和低近交组中各选取健康母鸡3只,即试验分2个组,每组3个重复,然后采用全基因组重亚硫酸盐测序(WGBS)技术,检测分析两组个体...     

复合微生物菌剂在猪粪无害化处理中的应用

为了研究微生物菌剂对粪便恶臭组分及微生物菌群的影响,选取猪粪和玉米秸秆作为堆肥原料进行28 d的堆肥试验.试验分为5组,A、B和C组分别用玉米秸秆调节堆体水分为40％、50％和60％,D和E组不加玉米秸秆,A、B、C和D组分别接种微生物菌剂,E组不添加菌剂.结果 显示,B组堆体的高温持续时间最长,粪便腐熟效果最好.与E...