猪囊尾蚴头节单链抗体-PE40重组蛋白的表达及抗虫活性分析

将含有抗猪囊尾蚴头节单链抗体基因（ScFv）和绿脓杆菌外毒素基因（PE40）的重组质粒pET28．ScFv-PE40转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,表达产物通过SDS-PAGE和westernblot鉴定,其表达蛋白的相对分子量约为68ku,表达量约占菌体总蛋白的13．8％。将融合蛋白通过金属Ni2^＋亲和层析柱纯化后,目的蛋白纯度在95％以上,可溶性蛋白的回收率约为50％,回收量为5mg／L。本研究所进行的纯化重组蛋白的体外杀伤六钧蚴试验表明,重组蛋白对六钩蚴具有较强的杀灭作用,而且与其剂量呈正相关性。     

猪衣原体感染的血清学调查报告

通过对平顶山地区6个县(市)29个猪场的3000头种猪血清进行鹦鹉热衣原体的间接血凝(IHA)抗体的检测。结果显示,血清的阳性率为3.2%～8%,平均为4.8%,猪场的阳性率为65%,该病在本地区较为普遍。     

LncRNA-NONMMUT131476.1对PHEV复制的影响及其靶基因Nlrc5的验证

长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)是长达200个以上核苷酸的转录本,在不同组织和发育阶段的表达具有特异性。为筛选与猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)致小鼠神经系统损失相关的LncRNA,本试验对正常小鼠和PHEV感染小鼠大脑皮质进行高通量测序,获得PHEV感染过程中LncRNA差异表达数据。经过生物学分析,发现与PHEV感染相关的LncRNA-NONMMUT131476.1位于小鼠第8号染色体Herpud1(homocysteine-inducible,endoplasmic reticulum stress-inducible,ubiquitin-like domain member 1)和Nlrc5(NLR family,CARD domain containing 5)两基因间,由5个外显子构成。利用qPCR方法对感染PHEV的小鼠脑组织和N2a细胞中LncRNA-NONMMUT131476.1及Nlrc5基因的表达量进行检测,发现LncRNA-NONMMUT131476.1和Nlrc5基因的表达量均呈上调。研究发现干扰LncRNA-NONMMUT131476.1后Nlrc5表达被抑制,表明Nlrc5可能为其潜在靶基因。同时,沉默LncRNA-NONMMUT131476.1表达能促进病毒复制增殖,表明该LncRNA可能作为调节因子,参与调控PHEV感染过程,但其具体机制有待于进一步研究。本试验为PHEV感染发病机制和PHEV防制研究提供新思路。     

猪戊型肝炎病毒ORF2片段克隆及原核表达

设计套式引物，内套引物含有BamHⅠ／XhoⅡ酶切位点，采用RT-PCR技术扩增猪戊型肝炎病毒（UEV）结构蛋白基因ORF2部分片段，长度为634bp，将其克隆于PGEX-T载体，测序结果表明插入的片段属于戊型肝炎病毒ORF2部分，将该片段插入PproEXHTb表达载体，经酶切鉴定证实获得了重组表达质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL21，经1mmol／L IPTG诱导，得到表达，表达蛋白分子量为27Ku，以包涵体形式存在。Western blot分析表明，该蛋白可以与猪戊型肝炎阳性血清反应，表明该蛋白具有良好的反应原性。     

羊胎盘转移因子注射液体液免疫调节作用的研究

[目的]通过研究羊胎盘转移因子注射液对实验动物免疫球蛋白、B淋巴细胞和抗体形成细胞数量变化的影响,探讨受试药品对实验动物体液免疫的调节作用,进而评估其临床体液免疫调节的使用价值。[方法]试验1:用小白鼠进行免疫球蛋白测定试验,比较给药前后小白鼠血清免疫球蛋白的变化;试验2:用大白兔进行EAC玫瑰花环试验,测定给药前后B淋巴细胞数量的变化;试验3:用小白鼠进行溶血空斑试验,比较试验组和对照组抗体形成细胞数的变化。[结果]试验1:试验组小白鼠血清免疫球蛋白含量显著提高(P<0.05);试验2:试验组受试动物EAC玫瑰花环的成环细胞数显著高于对照组(P<0.05);试验3:试验组小白鼠抗体生成细胞的数量极显著增加(P<0.01)。[结论]羊胎盘转移因子注射液对受试动物体液免疫有显著调节作用。     

金钱豹猫瘟热疫苗免疫后血清抗体水平的检测

金钱豹经2种猫瘟热灭活疫苗和1种弱毒疫苗免疫接种后,间隔不同的时间采血分离血清,用SPA-ELISA和HI两种方法测定猫瘟热血清抗体效价。结果猫瘟热灭活疫苗和弱毒疫苗均能有效诱导金钱豹产生较高效价的抗体,抗体持续时间相对较长。3种疫苗免疫效果比较显示,美国Fort Dodge猫三联灭活疫苗免疫效果最好。在猫瘟热血清抗体检测中,SPA-ELISA和HI的吻合率达到93%以上。     

利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在家蚕中表达人瘦素蛋白

瘦素(leptin)蛋白由肥胖基因编码,对人体能量代谢等多种生理过程起着重要的调节作用。利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,将人瘦素蛋白基因(lep)克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb,并转化E.coli DH10Bac,获得重组杆粒Bacmid-lep,然后转染家蚕BmN细胞,获得重组杆状病毒。用SDS-PAGE和Western blotting方法在感染重组病毒的家蚕BmN细胞检测到大小约22 kD的蛋白条带,与预期的人瘦素蛋白分子质量相符。给家蚕5龄起蚕注射重组病毒液后的4～5 d出现发病症状,RT-PCR检测发病家蚕的血液中有lep基因转录,并通过SDS-PAGE和Western blotting检测到大小为22 kD的人瘦素蛋白的表达。研究结果表明,利用Bac-to-Bac表达系统能够获得含有人瘦素蛋白基因的重组杆状病毒,并且目的蛋白能在家蚕细胞及幼虫体内表达。     

草原生态系统的土壤微生物生态

1980～1998年,在内蒙古锡林河流域等草原地区开展了土壤微生物生态学方面的系列研究. "干重换算法"为草原土壤微生物不同类群的生物量测定提供了一个较实用的方法;内蒙古不同草原和荒漠区土壤微生物活性具有不同的地理分布特征;锡林河流域六种植物群落下土壤微生物的区系组成及生物量分布亦有所不同;羊草等牧草具有明显的根际效应;不同放牧率及退化草场围栏恢复、落地油污染、施用稀土元素等人为因素会对土壤微生物数量及活性产生不同的生态效应;微生物多样化变化亦符合"中度干扰理论";土壤微生物在草原生态系统物质转化和能量流动中起着非常重要的作用;植物残体分解过程中微生物类群存在明显的优势更替现象.     

西门塔尔牛、和牛与荷斯坦牛杂种优势预测及实际杂交效果分析

旨在利用覆盖全基因组和性状的特异性SNPs标记预测和牛、西门塔尔牛与荷斯坦牛杂种优势,为牛杂种优势利用和选种选配提供参考依据。本研究分别利用牛Illumina Bovine HD 770 K和GGP Bovine 100 K芯片对464头和牛、1 222头西门塔尔牛和43头荷斯坦牛3个亲本群体进行基因型分型,并通过牛QTLs数据库筛选与目的性状对应的QTLs,对比牛参考基因组映射得到与初生重、周岁重、胴体重性状相关的特异性SNPs;然后构建覆盖全基因组和性状特异性SNPs两种标记状态同源矩阵,通过计算杂交组合亲本间的遗传距离来预测品种间杂种优势,并利用配合力分析验证较优组合的实际杂交效果。结果表明,基于全基因组和性状特异性SNPs计算的各杂交组合遗传距离差异不显著。在全基因组水平上,西门塔尔牛♂×荷斯坦牛♀（S×H）与和牛♂×荷斯坦牛♀（W×H）亲本间杂交组合遗传距离分别为0.346 1和0.338 9;在初生重、周岁重和胴体重性状上,S×H亲本间遗传距离分别为0.343 1、0.348 7和0.336 7,而W×H遗传距离分别为0.337 6、0.340 7和0.329 2;两种SNPs标记计算的遗传距离均为S×H较大,W×H次之。因此,在初生重、周岁重、胴体重性状上,S×H为较优杂交组合。通过分析德系西门塔尔牛♂×荷斯坦牛♀实际杂交群体的配合力,发现10个父系在初生重性状上一般配合力和特殊配合力均为正效应,最高效应值分别达到3.760 9和8.931 2。西门塔尔牛与荷斯坦牛杂交可在初生重、周岁重和胴体重获得较高的杂种优势。     

应用单克隆抗体的免疫组织化学法研究雏鸭体内鸭瘟病毒的分布

本实验应用了免疫组织化学的单克隆抗体间接酶标染色法，对人工感染鸭瘟病毒雏鸭的组织切片进行染色观察。旨在研究病毒在鸭体内分布，对其进行定位。研究结果显示，鸭的心脏、肝脏、脾、胸腺、肠、法氏囊、胰、肺、肾等组织的细胞浆内均出现了染色的特异阳性反应物。结果表明，鸭瘟病毒广泛分布于感染雏鸭的各种组织器官，并造成一定的组织病理变化。