Study on Identification of Xinjiang Brown Cattle Inbred Group

This study was aimed to detect the genetic similarity and groups homozygosity of Xinjiang Brown cattle inbred group.Use 13 pairs of microsatellite primers to structure of genetics in the comparative analysis by the two Xinjiang Brown cattle over 40 years completely closed breeding out 55 Xinjiang Brown cattles group and 25 Xinjiang Brown cattles in control group,in order to carry out the identification of inbred groups.For Xinjiang Brown inbred group,the homozygosity was 0.9064,the polymorphism information content was 0.0873,it was found that the groups had a low polymorphism;The homozygosity was 0.4647,and polymorphic information content was 0.4882 in Xinjiang Brown cow of control group.According to the coat color of the inbreeding groups was divided into four subgroups A,B,C and D.The genetic purity of each subgroup were 0.9029,0.9632,0.9208 and 0.9551.The results showed that the detection of Xinjiang Brown cattle inbred group had higher homozygosity and lower heterozygosity,had became a high genetic purity of inbreeding group.The closure of Xinjiang Brown cattle inbred group was rare breeds of cattle,and was valuable genetic resources.     

角蛋白19片段单克隆抗体的制备及鉴定

为制备角蛋白19片段（CYFRA21-1）的单克隆抗体（mAb）,采用间接 ELISA 方法检测免疫小鼠的抗体效价,融合、筛选、克隆化单克隆抗体,将筛选得到的单克隆细胞株注入小鼠腹腔制备腹水,采用辛酸硫酸铵法、蛋白 A 柱纯化腹水抗体,以 SDS-PAGE 凝胶电泳、紫外分光光度法检测抗体纯度和浓度;利用鼠抗体亚型鉴定试剂盒对单克隆抗体进行亚型鉴定;采用阻断 ELISA 法测定 mAb 的敏感性（IC50）。结果表明,筛选获得4株分泌角蛋白19片段 mAb 的细胞株,将4株细胞株2F9、3H5、7C3、6F11注入小鼠腹腔,分别获得效价为2．56×105、5．12×105、5．12×105、2．56×105的单克隆抗体,经纯化,抗体蛋白浓度为12．43 mg／mL～16．00 mg／mL,为 IgG1型抗体,其 IC50在1．03 ng／mL～1．53 ng／mL 之间。说明获得了4株分泌高效价 CYFRA21-1单克隆抗体的细胞株,为建立 CYFRA21-1的检测试剂盒奠定了基础。     

猪ATGL基因5′调控区的SNPs检测及生物信息学分析

脂肪甘油三酯水解酶(ATGL)是脂肪组织脂肪动员过程中的水解限速酶,主要催化甘油三酯水解为甘油二酯。研究对金华猪、岔路黑猪、杜洛克、大约克和皮特兰5个猪种ATGL基因其5′调控区1.2 kb的片段进行SNPs检测和生物信息学分析。结果表明:ATGI基因5'调控区存在第-845位G→C和第-854位T→C的连锁突变。序列分析显示该区域可能存在启动子区,且2个突变都会导致其部分潜在转录因子结合位点的产生或消失。采用PCR-RFLP方法检测g-845G→C座位在金华猪、岔路黑猪、杜洛克、大约克和皮特兰中的分布情况,卡方分析结果显示,3种基因型在5个猪种中的分布存在极显著差异(P<0.01),提示不同猪种间脂肪性状的差异可能与ATGL基因5'调控区的基因突变有关。     

全株青贮构树对蛋鸡产蛋性能、蛋品质、器官指数及血清生化指标的影响

试验旨在研究全株青贮构树对海兰褐蛋鸡生产性能、蛋品质、器官指数及血清生化指标的影响.选取23周龄健康的海兰褐蛋鸡288只,随机分成3组,每组8个重复,每个重复12只鸡.对照组饲喂基础饲粮,试验组则分别在基础饲粮中添加1％和5％的青贮构树饲料,预试期7 d,正试期56 d.结果表明:与对照组相比,试验组提高了初产蛋鸡的平...     

小熊猫源犬瘟热病毒株H、F基因的克隆及序列分析

为了解1株圈养小熊猫源犬瘟热病毒(CDV) GD-1的遗传变异情况,通过RT-PCR方法对该株CDV进行H、F基因的克隆、测序及序列分析.结果 显示:该分离株的H基因序列与GenBank中丹麦报道的登录号为GU266280的犬源CDV毒株的核苷酸序列相似性最高,为96％;F基因序列与巴西报道的登录号为KY057355的...     

桑叶提取物和1-脱氧野尻霉素对大鲵生长性能、肝脏功能及免疫能力的影响

本试验旨在研究桑叶提取物(MLE)和1-脱氧野尻霉素(DNJ)对大鲵生长性能、肝脏功能及免疫能力的影响.选择初始均重为(47.81±0.23)g的大鲵72尾,随机分为3组,每组3个重复,每个重复8尾.对照组饲喂基础饲料,试验组在基础饲料中分别添加7.5 g/kg MLE(MLE组)和0.04 g/kg DNJ(DNJ组...     

猪流行性腹泻病毒TaqMan检测方法的建立及基于S基因的遗传变异分析

旨在建立一种能快速、高效且灵敏的检测出猪流行性腹泻病毒（PEDV）的通用型TaqMan qPCR检测方法,并进一步了解河北省PEDV的遗传变异情况。本研究参考PEDV变异株AJ1102的M基因的保守区域设计特异性引物及探针,对引物浓度、退火温度等条件进行优化,建立了一种应用于猪场筛查PEDV的qPCR方法,并对筛查出的阳性样品S基因扩增测序后进行遗传进化分析。结果显示：该方法的特异性强,与猪圆环病毒2型（PCV2）、猪瘟病毒（CSFV）及传染型胃肠炎病毒（TGEV）等猪病常见病原均无交叉反应;建立的检测方法对pMD19T-PEDV标准品的最低检测下限为1.09×10¹拷贝·μL^-1,比普通PCR灵敏约100倍,敏感性高;组内和组间的变异系数均小于1%,重复性良好。基于S全基因成功克隆出的9条序列分布于GⅡ的两个亚群,克隆的9条序列的核苷酸相似性为96.6%～99.1%;氨基酸的相似性为94.6%～98.7%。结果表明：本研究得到的PEDV流行株与近年来国内分离株的关系较为密切,而与中国目前使用的疫苗株以及欧洲株亲缘关系较远,这表明河北部分地区PEDV当前流行毒株比较复杂且有变异的趋势,提示持续检测PEDV流行毒株变异动态的必要性。本研究不仅为PEDV的临床诊断提供了技术支持,更为进一步掌握PEDV遗传进化规律提供了参考依据。     

牛环形泰勒虫HSP70基因的克隆表达、特性分析及互作蛋白网络构建

为了表达牛环形泰勒虫(Theileria annulata)截短HSP70基因编码蛋白并研究该蛋白的结构与功能特性,本研究扩增牛环形泰勒虫HSP70目的基因并构建重组质粒pMD18-T-HSP70,选取其他种的同源HSP70蛋白序列构建系统进化树;利用生物信息学方法分析HSP70基因编码蛋白的氨基酸组成、基本理化性质、亲疏水性、跨膜区结构、信号肽、可能的磷酸化位点、亚细胞定位及蛋白的二级结构和三级结构;对重组蛋白HSP70进行蛋白互作网络分析;构建原核表达载体pET28a-HSP70,筛选诱导表达条件,镍柱纯化重组蛋白及检测反应原性。结果显示,牛环形泰勒虫HSP70蛋白序列与小泰勒虫的序列同源性较高,蛋白分子质量为42 ku,理论等电点(pI)为5.61,属于酸性亲水性蛋白,无跨膜区及信号肽;蛋白功能预测结果显示,HSP70包含32个可能的磷酸化位点,亚细胞定位分析显示该蛋白主要分布于细胞质。蛋白质二级结构中α-螺旋、β-转角、无规则卷曲、延伸链分别占39.18%、8.51%、30.41%和21.91%。蛋白互作网络构建结果显示,与HSP70相互作用的蛋白主要为HSP90家族成员,另外还有伴侣蛋白GrpE同系物,预示着HSP70可能在细胞内与HSP90形成复合体发挥作用。本试验成功构建原核表达载体,获得了大小约为48 ku的融合蛋白,以0.6 mmol/L IPTG于37℃诱导5 h,蛋白表达较好;点状印迹及Western blotting结果表明,表达产物可被自然感染的牛环形泰勒虫阳性血清识别,具有良好的反应原性。本试验结果为进一步探讨牛环形泰勒虫HSP70功能机制提供了理论依据。     

基于土地利用的内蒙古牧区生态系统服务时空变化(2000-2015)

内蒙古牧区是我国北方生态安全屏障,生态脆弱,近年来开发强度大,土地利用变化明显.本文以内蒙古牧区为研究区,利用遥感地理信息系统和模型模拟的方法,通过2000—2015年土地利用转移矩阵和变化动态分析,了解生态系统服务碳固定、土壤保持演变特征,开展土地利用变化及碳固定、土壤保持评价,为牧区土地资源管理提供科学支撑.结果表...     

猪流行性腹泻病毒HB/HEBEU/2020株全基因组遗传变异与重组分析

【目的】了解猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的基因组特征及变异规律。【方法】以3只发病仔猪小肠病料作为模板,采用RT-PCR技术检测病原。以检测阳性的肝脏组织RNA为模板,进行RT-PCR,分段扩增PEDV全基因组,使用DNAStar软件对PEDV基因组测序结果进行剪辑、拼接和相似性分析,利用Mega X 10.0.5软件对PEDV基因组和S基因进行遗传进化分析;利用RDP4软件对PEDV基因组进行重组分析。【结果】PCR检测结果表明,3只病仔猪的小肠组织均检测到PEDV阳性。采用RT-PCR分段扩增成功获得1株PEDV全基因组序列,命名为HB/HEBEU/2020株,基因组大小为28 038 bp,含有7个开放阅读框,从5'到3'依次为复制酶1a基因、复制酶1b基因、S基因、ORF3基因、E基因、M基因和N基因。相似性分析结果显示,HB/HEBEU/2020与SNJ-P、USA/Colorado/2013和HB2018等变异毒株全基因组和S基因的相似性均较高,分别为97.8%~99.3%和95.7%~98.8%,在所有市售疫苗株中,与变异型疫苗株AJ1102毒株全基因组和S基因的相似性分别为98.3%和97.3%;遗传进化分析结果显示,21株PEDV可划分为G1群和G2群2个分支,G1群进一步分化为G1a亚群和G1b亚群,G2群进一步分化为G2a亚群和G2b亚群,HB/HEBEU/2020属于G2a亚群。在G2群内,所有流行株均为2010年后出现,HB/HEBEU/2020与市售疫苗株AJ1102遗传距离较近,其次是LW/L,与CV777和attenuated CV777株遗传距离较远;经重组分析,HB/HEBEU/2020基因组可能为重组毒株,存在3个潜在的重组事件,重组事件1~3的断点分别为15 918—22 119、100—734和2 214—2 729 bp,其中重组事件1和2发生概率较大。【结论】HB/HEBEU/2020为1株变异型PEDV,与以CV777为代表的经典毒株亲缘关系较远,与2010年后中国发生的变异型毒株亲缘性较近,并且存在潜在重组事件。本研究结果可为调研中国当前PEDV进化和变异提供重要资料,为遏制PEDV蔓延与进化、制定合理防控方案提供理论和现实依据。