奶牛SRY基因核心保守区真核表达载体构建及序列分析

SRY基因是哺乳动物性别分化与控制的主导基因,参与有序的、多层次调控性别分化和控制的过程。本研究从牛血中提取总RNA,设计特异性引物,利用RT-PCR技术扩增出SRY基因HMG box基因片段,将该片段与pMD18-T载体连接并转化到大肠杆菌(E.coliTop)10中,提取质粒并用EcoRⅠ、AvrⅡ酶消化,将消化后的目的基因纯化并回收,与经同样的酶消化后并纯化回收的载体pPIC9K连接并转化到E.coliTop10,获得重组表达质粒pPIC9K-SRYHMG box,经PCR、酶切、测序验证了此载体构建成功,为下一步使用毕赤酵母表达SRY蛋白打下基础。     

山羊痘病毒P32基因真核表达载体的构建及表达

从重组克隆栽体pMD18-P32中扩增出山羊痘病毒P32基因,与毕赤酵母分泌性表达载体pPICgK相连接,构建重组表达载体pPIC9K-P32.重组质粒pPIC9K-P32用SaIⅠ线性化后,与毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115混合后电转化,使重组表达载体与酵母染色体发生同源重组.采用G418抗性梯度筛选法得到高拷贝重组菌株,甲醇诱导目的基因表达.SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,用酵母成功表达出了31 000的重组蛋白,该蛋白具有生物学活性,能被山羊痘阳性血清识别.     

牛AQP7基因第3外显子的单核苷酸多态性与精液品质的相关分析

采用PCR-SSCP技术分析了AQP7基因的第3外显子在西门塔尔和夏洛来群体中的遗传多态性.结果表明在所扩增的AQP7基因的第3外显子中发现PCR-SSCP多态,有2种等位基因A和B,有2种基因型AA型、AB型.对多态片段测序分析表明:在AQP7基因第3外显子中存在有一碱基G→C突变,导致编码氨基酸(精氨酸→苏氨酸)的改变.适合性卡方检验表明该位点的不同基因型频率处于Hardy-Weinberg平衡.用最小二乘法分析AQP7基因第3外显子不同基因型与西门塔尔和夏洛来精液品质的相关性,发现AQP7不同基因型对冻精活精子比率有极显著影响,AA型极显著高于AB型(P<0.01).AA型的冻精项体完整率和冻精活力显著高于AB型(P<0.05),对其他性状的影响差异不显著.研究结果表明,西门塔尔和夏洛来牛AQP7基因应是影响精液品质的一个主效基因或与影响精液品质的主效基因紧密连锁.     

双重RT-PCR同时快速检测H5亚型禽流感病毒和新城疫病毒强毒株

本研究针对AIV H5的血凝素(HA)基因和vNDV的融合蛋白(F)基因设计两对引物,建立了单管同时检测AIVH5和vNDV的双重RT-PCR(dRT-PCR),该方法能在单一反应管内同时检测AIVH5和vNDV,不与其它亚型AIV、弱毒NDV毒株以及其它病原体发生非特异性扩增;对含有AIV H5 HA基因和vNDV F基因重组质粒DNA的最低检测限分别为20.6和406fg,敏感性与单项RT-PCR相同;从样本处理到报告结果仅需5h。对24份临床疑似样本进行检测,AIVH5均为阴性,vNDV阳性18份,PCR产物测序证明为靶基因序列,其具有vNDV F基因的特征性序列,随机选9份vNDV阳性样本接种SPF鸡胚,分离出6株vNDV,病毒分离率为6/9;对100 ELD50的AIV H5N1和100 ELD50的vNDV人工同时感染5日龄SPF鸡的脑、肝脏、肺脏和泄殖腔棉拭子进行dRT-PCR检测,AIV H5的检测率为4/5,3/5,5/5,4/5,vNDV的检测率为3/5,5/5,4/5,3/5,而对H9N2和LaSota毒株实验同时感染样本及阴性对照样本的检测均为阴性。可见本研究建立的dRT-PCR为AIV H5和vNDV诊断、监测、检疫及分子流行病学调查提供了特异性强、操作简单、检测速度快、成本低廉的新方法。     

基于点云语义分割的猪只体尺测量方法研究

生猪的体尺参数是生猪生长状态的重要评判标准,而人工测量体尺耗时耗力且容易造成猪只的应激反应,本文研究了无接触式猪只体尺参数测量方法,借鉴人工测量经验法,提出基于点云语义分割的猪只体尺测量方法。本文以大约克夏猪为研究对象,搭建无接触式猪只点云采集平台,采集3 510组猪只双侧点云数据;利用直通滤波器与随机采样一致性分割处理方法去除背景点云,基于统计滤波器去除离群点,采用体素下采样方法稀疏点云,完成猪只点云的预处理;基于PointNet网络,结合注意力模块构建语义分割模型,针对不同分割部位设计猪只体尺测量方法。试验结果表明,在自制数据集上,改进的语义分割模型准确率为86.3%,相较于PointNet、PointNet++和3D-RCNN分别高8、5.7、2.6个百分点;体尺的测量值与实测值最大绝对误差为6.8 cm,平均绝对误差均在5 cm以内,具有较高的估算准确性,此方法能够用于猪只体尺测量。本文将语义分割与体尺测量相结合,可为后续非接触测量提供思路。     

温度、光照及PEG胁迫对兔儿伞种子萌发的影响

以兔儿伞(Syneilesis aconitifolia)种子为试验材料,对不同温度、光照及PEG-6000条件处理下对种子萌发特性进行了研究。研究结果表明:兔儿伞种子成熟度和光照对种子发芽率影响不大,温度是影响种子萌发的主要因素。种子萌发最适温度为15～25℃,但其耐高温和干旱,萌发前经过24 h高温(40℃)处理,发芽率达55%。高浓度PEG抑制种子萌发,而低浓度PEG促进种子萌发,种子经25%PEG处理后复水萌发,种子发芽率和出苗整齐度提高。     

果桑绿枝扦插影响因素研究

以"大十"果桑和"台湾果桑"为试材,以基质(河沙、草炭与蛭石混配基质)、插穗插口(插穗下剪口作平剪和斜剪)、生长素(NAA、吲哚丁酸、国光生根粉)为因素进行绿枝扦插正交实验,以在较短的时间内繁育出较多果桑优良苗木。结果表明:果桑绿枝扦插与品种有很大关系,"台湾果桑"适合于绿枝扦插,成活率较高,且在150mg/kg吲哚丁酸中浸泡生根率较高,为54.4%,有白色愈伤组织产生;平口剪效果好于斜口剪,河沙更适宜做扦插苗床,有利于生根。     

宁夏设施火龙果引种栽培试验初报

以"祥龙"和"白玉龙"2个火龙果品种为试材,经过4a时间观察其在宁夏地区设施栽培的生长状况。结果表明:2个品种在宁夏经设施栽培,均能正常生长发育,果实营养丰富,风味浓,品质好,适应性强、产量高。当年定植,第2年就开始结果,第3年"白玉龙"667m2产达1 086kg,"祥龙"667m2产达1 400kg,平均单果重400g,尤其以"祥龙"表现较好。     

基因型和环境互作对黄淮海夏玉米品种籽粒产量的影响

为准确评价黄海海地区夏玉米品种的稳定性、适应性和丰产性,采用稳定性指数(WAASB)和同时选择指数(WAASBY)对2018-2019年黄淮海地区25个夏玉米品种进行连续2年的产量进行分析.结果表明:籽粒产量在不同品种和试点间存在极显著差异(P＜0.001),品种和试点间存在极显著互作效应.GY(籽粒产量)×WAASB...     

双蛋白干酪成熟过程中品质相关指标的变化分析

为了研究发酵剂及豆蛋白添加量对成熟干酪蛋白质分解情况的影响,对干酪成熟过程中相关指标—理化成分、水溶性氮(WSN)、三氯乙酸可溶性氮(TCA-SN)和可溶性磷钨酸氮(PTA-SN)的变化,并使用SDS-PAGE电泳方法检测蛋白质水解情况。结果表明:10%豆乳的添加使干酪的蛋白质含量提高5%,脂肪降低4%,同时对干酪的水分和pH都有影响。随着干酪的成熟WSN、TCA-SN、PTA-SN的质量含量随着时间的增加逐渐升高,成熟6个月后,达到34.25%、17.26%和5.35%;对电泳中αs-CN、β-CN和β-伴球蛋白降解率分析得出筛选发酵剂对豆蛋白及酪蛋白都有很强的降解作用。