牡荆总黄酮提取工艺优化及其对产气荚膜梭菌抑菌活性研究

【目的】 探究牡荆总黄酮的提取工艺,并探讨牡荆提取物对产气荚膜梭菌的抑菌活性。【方法】 以芦丁作为对照品,采用分光光度法对牡荆中的总黄酮含量进行测定;以总黄酮含量为考察指标,先通过单因素试验研究乙醇浓度、提取时间、提取温度、料液比4个单因素对牡荆总黄酮提取量的影响,确定单因素情况下最佳工艺的水平范围;在单因素试验基础上,通过设计L9（3⁴）正交试验,利用NaNO₂-AL （NO₃）₃-NaOH显色法对牡荆总黄酮含量进行测定,绘制标准曲线,计算回归方程,通过精密度、稳定性、重复性、加样回收率进行方法学考察,验证标准曲线。通过将试验所得数据代入标准曲线,比较得出牡荆总黄酮的最佳制备工艺,并在此基础上通过微量二倍稀释法考察其提取物对产气荚膜梭菌的抗菌活性。【结果】 牡荆总黄酮最佳提取工艺条件为：乙醇浓度60%、提取温度50 ℃、提取时间2.5 h、料液比1：35。在此最优提取条件下,牡荆总黄酮含量最高（43.17 mg/g）。其因素影响顺序为料液比>提取时间>乙醇浓度>提取温度,料液比对牡荆总黄酮含量影响最大。最佳工艺下的牡荆提取物对产气荚膜梭菌的最小抑菌浓度（MIC）值为7.81 μg/mL。【结论】 在乙醇浓度60%、提取温度50 ℃、提取时间2.5 h、料液比1：35的条件下提取的牡荆总黄酮含量最高,所制备提取物对产气荚膜梭菌具有较强的抑菌作用,为生产高质量的牡荆提取物提供了理论依据。     

关中奶山羊睾丸不同发育阶段代谢物的差异分析

【目的】 试验旨在从代谢组学角度探究关中奶山羊睾丸发育代谢机制。【方法】 选择1月龄断奶雄性关中奶山羊和24月龄体成熟的雄性关中奶山羊各6只,采集睾丸组织,使用液相色谱-质谱（LC-MS）技术对睾丸组织进行化学检测,通过多维和单维分析相结合的方式对两组不同代谢物进行化学检测、对比与鉴别,通过富集差异代谢物分析筛选关中奶山羊发育代谢中的潜在关键通路。【结果】 在1和24月龄关中奶山羊睾丸组织中共筛选出334个差异代谢物,其中显著上调137个,显著下调197个。对前36个差异代谢物进行比较鉴定发现,分别为脂质和类脂质分子、有机酸及其衍生物、未分类化合物和苯丙烷和聚酮化合物四大类。经相关性分析发现,在1和24月龄关中奶山羊睾丸发育过程中,脂质和类脂质分子与甘油磷脂呈最大正相关,羧基及其衍生物与甘油磷脂呈最大负相关。对不同的代谢物进行富集分析,筛选出7条潜在的重要代谢通路,分别为肿瘤中的胆碱代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、肿瘤中的中心碳代谢、铁死亡、谷胱甘肽代谢、氨酰-tRNA生物组成以及牛磺酸和亚牛磺酸代谢。【结论】 本试验从代谢组学角度揭示了1和24月龄关中奶山羊睾丸的差异代谢物及代谢机制,为今后哺乳动物睾丸的发育研究奠定了基础。     

苜蓿种质资源对锈病的抗性研究

为获得优良苜蓿(Medicago)抗锈病种质,在实验室条件下,用喷洒夏孢子悬浮液的方法对国内外85份(国内54份、国外31份)苜蓿种质材料进行人工接种,并根据病情指数对其苗期抗锈性进行筛选和评价。结果表明:不同苜蓿种质材料间对苜蓿锈病的抗病性存在较大差异,病情指数变化范围在29.25%~70.65%;没有对苜蓿锈病免疫的种质;丹麦的‘庞迪苜蓿’抗锈性最强;中抗材料10份,其中国内4份,国外6份;中感材料55份;高感材料19份,其中感锈性最强的是‘陇东’天蓝苜蓿。从46份苜蓿种质材料中筛选出了过敏反应型抗锈单株,不同种质中抗锈单株的过敏反应等级不同。     

云南中亚热带禾本科高产饲草引种试验

在云南中亚热带试验点,对8个禾本科饲草栽培种进行引种栽培试验,结果表明墨西哥类玉米、8493墨西哥类玉米、大力士甜高粱、先锋高丹草和M-8IE甜高粱5个栽培种干物质产量高,适应性强,适宜在相似气候条件地区推广种植.     

铬对泌乳期奶牛的生产性能和主要生理指标的影响

研究了泌乳期奶牛日粮中添加吡啶羧酸铬或赖氨酸铬对其生产性能和血液主要生理指标的影响。选择75头泌乳前期（〈80d）的荷斯坦奶牛随机分为试验组A、B和对照组C。试验组A和B每天日粮中分别补充吡啶羧酸铬和赖氨酸铬，供试期间对照组C不添加有机铬。结果表明：铬可提高泌乳期奶牛的生产性能，增强和改善泌乳奶牛的免疫力和应激状态。试验组A和试验组B泌乳量高于对照组C（P〈0．01）；试验组B血清中的甘油三酯的浓度低于对照组C（P〈0．05）；试验组A血清中胰岛素浓度低于对照组C（P〈0．01）；试验组A和试验组B血清中葡萄糖浓度都高于对照组C（P〈0．01）；试验组A和试验组B血清中皮质醇的浓度分别比对照组C低7．21nmol／L和4．92nmol／L，试验组A和试验组B血清中IgG的浓度分别比对照组C高2．1g／L和3．1g／L。     

干扰素诱导跨膜蛋白1对猪源冠状病毒吸附宿主细胞的影响

为探索干扰素诱导跨膜蛋白1（interferon-inducible transmembrane protein 1,IFITM1）对猪源冠状病毒复制的影响,本研究选用猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus,TGEV）高致病毒株及其宿主细胞PK15作为研究对象。正常PK15细胞接种TGEV后,实时荧光定量PCR检测感染后不同时间点PK15细胞中一些干扰素刺激基因（interferon-stimulated genes,ISGs）的mRNA表达水平;利用慢病毒表达系统构建稳定表达和稳定干扰IFITM1表达的PK15细胞系。将一段靶向干扰猪源IFITM1的shRNA序列及猪源IFITM1全长,分别插入pLKO.1-EGFP-Puro载体及pLVML-Myc-MCS-IRES-Puro载体中,分别构建出pLKO.1-IFITM1shRNA-EGFP-Puro及pLVML-Myc-IFITM1-IRES-Puro重组质粒。将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染293FT细胞后获得带有目的基因的重组慢病毒,慢病毒侵染PK15细胞后用嘌呤霉素进行筛选,获得稳定表达及稳定干扰IFITM1表达的PK15细胞系,分别命名为PK15-IFITM1及PK15-IFITM1^-/-,并分别用实时荧光定量PCR、间接免疫荧光试验（IFA）及Western blotting检测IFITM1干扰效率及表达情况;TGEV接种PK15-IFITM1^-/-和PK15-IFITM1,实时荧光定量PCR测定细胞中TGEV的拷贝数。结果显示,PK15细胞接种TGEV后的48 h内,一些ISGs的mRNA水平均有所上升;PK15-IFITM1^-/-细胞系的干扰效率为70%,PK15-IFITM1细胞系表达成功;在PK15-IFITM1^-/-细胞系中,IFITM1的mRNA水平显著下调,促进了TGEV的复制。反之,在PK15-IFITM1细胞系中,TGEV的复制受到了抑制。但IFITM1的表达或缺失却不影响TGEV对PK15的吸附作用。总之,IFITM1对TGEV有显著的抗病毒作用,IFITM1不影响TGEV对PK15细胞的早期吸附,这为后续IFITM1抗冠状病毒机制的研究奠定了基础。     

Isolation,Identification and Genotyping of Pasteurella multocida from Fowl Cholera

In order to determine the suspected avian cholera pathogen and geneotypes, bacteria isolation technology was used to isolate and culture pathogenic bacteria, the isolated bacteria were identified by traditional methods and molecular biological methods. Geneotyping of the isolated bacteria were determined using PCR technology and gene sequence analysis. The results demonstrated that the isolated bacteria had typical culture characteristics of Pasteurella multocida (Pm),and the morphology of the colony, the characteristics of cell staining, the physiological and biochemical characteristics were consist with Pm; 457 bp fragment was amplified by PCR. Geneotyping results showed that only A primer amplified the target gene fragment of 1 050 bp, sequence analysis also showed that the isolated bacteria shared 97.6% to 100.0% sequence homology with reference strains, and phylogenetic tree analysis showed that the isolated bacteria and A type Pm were in a branch.The experimental results indicated that the isolated bacteria was identified as capsular serotype A of Pm, the results provided reference for the prevention and control of fowl cholera.     

Preparation of Monoclonal Antibody Against Lasalocid and Deveopment of Indirect Competitive ELISA Detection Method

To prepare monoclonal antibodies (MAb) against lasalocid (LAS) and establish an indirect competitive ELISA (Ci-ELISA) detection method,conjuaction of LAS-BSA and LAS-OVA were synthetized as the immunogen and coating antigen by using active ester method in this experiment. After 6 times of immunization,the spleen cells of mice and myeloma cells were fused. Finally,a hybridoma cell line that could stably secrete specific MAb against LAS was screened.The immunological subtype of the MAb was identified as IgG1,and its light chain was κ type.The titer of the ascites was 1:16 000, which showed no cross activity with monensin sodium, salinomycin sodium,maduramycin,cefalotin sodium and streptomycin sulfate. Ci-ELISA method was established based on the MAb against LAS with the linear equation was y=0.376x-0.2374(R²=0.9914), and the linear range was 5 to 1 000 ng/mL and the IC₅₀ was 90.22 ng/mL. The method was used to detect LAS in spiked samples and the recovery rate was 81.76% to 102.41% within the detection range,indicating that the method was successfully established with good accuracy and high sensitivity. The preparation of MAb against LAS and the establishment of Ci-ELISA method laid the foundation for the development of LAS detection kit.     

44例宠物犬肿瘤病理诊断及分析

收集北京地区2015~2016年宠物医院的部分宠物犬肿瘤病例56例,采用组织病理学方法进行病理诊断,并对患病动物的品种、发生部位、年龄和性别与肿瘤发生关系进行了统计分析。结果发现,56个病例中有44例确诊为肿瘤,其中良性肿瘤21例,包括肛周腺瘤、皮脂腺瘤和肥大细胞瘤等;恶性肿瘤23例,包括乳腺癌、鳞状上皮细胞癌和肛周腺癌等。本次采集的病例中,大型犬与小型犬发病率持平,皮肤、肛周与乳腺部位肿瘤的发生率较高;7岁以后是肿瘤高发期;雌性犬皮肤和乳腺肿瘤的患病率高于雄性,雄性宠物犬肛周腺肿瘤的发生率高于雌性,肿瘤总患病率雄性与雌性持平。本研究为今后宠物犬肿瘤的流行病学及诊断提供了新的参考资料。     

三株鸡传染性法氏囊病毒弱毒株的分离与分子鉴定

本试验在江苏省鸡场分离获得3株鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）,采用RT—PCR法扩增VP2基因,将产物克隆入pMD18T载体,经测序,并与IBDV代表株VP2基因的高变区序列进行分析比较。结果显示,3个分离株与超强毒株、强毒株、突变株及弱毒株的核苷酸同源性在89．5％～98．9％之间,与弱毒株Cu-1和疫苗株PBG-98同源性最高,为98．9％;推导出的氨基酸序列与代表性毒株的同源性在98．2％～99．5％之间。其中,七肽区的第三个丝氨酸残基突变为精氨酸或苏氨酸,279和284位氨基酸残基突变为天冬氨酸和苏氨酸,222、294和299位氨基酸残基分别突变为脯氨酸、亮氨酸和天冬氨酸。上述试验表明3株分离株均为临床弱毒株。