影响共聚焦荧光法检测单细胞中蛋白表达的因素探讨

采用免疫荧光技术联合共聚焦技术研究不同培养细胞中蛋白的表达及定位.结果发现:①同样以丙酮固定293细胞,不用0.5%Triton X-100处理,着丝粒蛋白E亚型(CENP-E)在分裂期细胞核周浓聚,核内未见;而用0.5%TritonX-100处理后,CENP-E呈散点状分布于分裂期细胞的核内.②分别以甲醇、95%乙醇和4%多聚甲醛固定并以1%TritonX-100处理k562细胞,不同固定剂处理组间结果无明显差异,信号转导与转录激活因子(STAT3)均定位于胞浆.共聚焦系统PMT=511时,显示胞核染色适中,核仁染色明显,而PMT=593时,整个核呈饱和染色状,微细结构不清楚.③以2%甲醛联合0.5%TritonX-100处理平滑肌细胞,固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)在整个细胞中呈弥散性分布,核内含量较高,高尔基体上SCAP无特异性高表达.结论:是否使用TritonX-100处理对293细胞中核蛋白CENP-E的定位具有较大影响;k562细胞对醛类固定剂及醇类固定剂无特殊选择性,图片采集时共聚焦参数PMT对蛋白定位结果也有影响;醛类固定剂和Triton联用可准确定位SCAP在平滑肌细胞中的表达.

Abstract：

The expression and location of proteins in single cells cultured under different conditions were studied with a laser scanning confocal microscope. CENP-E appeared mainly around the nucleus in HEK293 cells by fixing with acetone without 0.5% Triton X-100 treatment, but localized mainly in the nucleus when the cells were fixed with acetone plus further 0.5 %Triton X-100-PBS solution and scattered in the nucleus with condensed points. Plus l% Triton treatment, K562 cells fixed with 4% paraformaldehyde, methanol or 95 % ethanol all showed that STAT3 protein mainly distributed in cytoplasm at the edge of the cell body, the nucleus occupied a greater part of the cell body with PI staining, nucleolus staining seemed stronger under PMT= 511, but seemed the same as the other part of the nucleus under PMT=593. SCAP (SREBP cleavage-activating protein) could be detected in cytoplasm and was more accumulated in nucleus in smooth muscle cells fixed with 2 % formaldehyde and 0.5 % Triton penetrating, and Golgi apparatus were found to scatter around the nucleus. In conclusion, it is important to locate CENP-E protein in HEK293 cells with TritonX-100 by immunofluorescence microscopy. SCAP in smooth muscle cells and STAT3 expression in K562 cell can be exactly located with the combination of formaldehyde and Triton penetrating. STAT3 expression in k562 cells fixed with formaldehyde or spirits fixative has no difference.The confocal system itself, such as PMT gain, can also affect the location of proteins in single cells.     

我国北方地区花生品种的遗传多样性分析

利用SSR分子标记对我国北方地区育种品种以及区试品种共计68个栽培花生品种进行遗传多样性分析,结果表明,104对SSR引物中有15对在品种间存在多态,多态率为14.4%,平均每个标记产生3.8个位点。15对引物的多态信息量在0.397~0.667之间。山东地区花生品种的遗传多样性要高于我国北方其他地区供试品种。小粒组品种的遗传多样性要略高于大粒组品种。聚类分析表明我国北方68个育成和区试品种的遗传相似系数在0.64~0.91之间,分成两个大类,第一个大类可分成四小类,其中第三小类又可以分成六个亚类。这些结果表明我国北方地区现有育成和区试品种的遗传多样性较低,为拓宽花生育种的遗传基础,应从中发掘出有利用价值的品种。     

青花菜绿体春化过程中同工酶变化研究

试验以青花菜早熟品种"清风103"为试材,对青花菜绿体春化过程中植株中春化相关的酶进行研究。结果表明,青花菜植株在低温春化处理过程中,NR、EST和α-淀粉酶及ASP的活性都呈增加趋势。对EST、α-淀粉酶和POD同工酶分析发现,经过低温春化处理后既有新谱带的产生,也有谱带的消失,产生或消失的谱带可能与青花菜春化有关。     

湖北省花生平衡施肥技术研究I.土壤主要养分限制因子

采用土壤养分状况系统研究法分析了湖北省花生主产区的土壤主要养分含量,并在田间试验下进行了验证.结果表明,湖北省花生主产区土壤普遍缺氯,部分地区缺磷,大面积缺钾和硼.平衡施肥能够明显提高花生产量,但不同地区花生对各元素的敏感程度有所不同,应该在测土基础上合理施肥.     

旱地新型土壤供氮力指标——氯仿熏蒸浸提氮

模拟旱地条件进行盆栽试验,尝试用氯仿熏蒸-浸提法测定土壤供氮力。分析了熏蒸前后各种形态氮素含量的变化,并对黑麦草吸氮量与农田土壤熏蒸-浸提氮进行了相关性分析。结果表明:各种施肥处理以及不同土地利用方式下氯仿熏蒸-浸提氮与黑麦草吸氮量有明显的相关性,氯仿熏蒸浸提的硝态氮和有机氮与吸氮量均呈极显著相关,相关系数分别为0.938和0.942。氯仿熏蒸浸提全氮能全面可靠地反映土壤的供氮力,表明氯仿熏蒸浸提氮是一个良好的土壤供氮力指标,它可以用于估计农田土壤的供氮力。氯仿熏蒸浸提法测定土壤有效氮适于包括碱性土壤和水田土壤在内的各种类型土壤。     

辣木油的抗氧化稳定性研究

研究温度、光照时间对辣木油抗氧化稳定性的影响,以此选择合理的保存方式。用石油醚浸出法制成辣木油试样,以过氧化值(POV)为试验指标,采用Sehaal烘箱法和室内自然光照射法进行试验,测定不同温度和不同受热、光照时间下的POV值并计算氧化诱导时间。结果表明:不同受热时间下测得的POV值之间的差异性不显著,而不同光照时间的POV值则具有显著性差异,说明辣木油对温度比较稳定,但对光照则相反,光照时间越长抗氧化的稳定性就越差,光照氧化诱导时间仅为3.5 d。提示了辣木油应在20℃左右保存并特别注意避光,在此条件下的货架期可达304 d。      

基于相似原理的轴流式灭火风机气动性能回归模型的建立

利用最小二乘法原理对T40-2A轴流风机的气动性能实测试验数据进行了二次曲线拟合,得出了风压-风量和功率-风量之间的回归曲线方程,并运用回归分析原理对拟合曲线的回归效果进行了显著性检验,建立了该风机的无因次性能回归曲线模型,为实现该系列轴流风机在轴流式风力灭火机中的应用打下了良好的理论基础。     

银杏叶总内酯超声提取工艺优化

以初冬银杏叶为试验材料,考察超声浸提时间、乙醇浓度、水浴温度、浸提次数对银杏叶总内酯浸提的影响,并对试验结果进行验证.结果表明,初冬银杏叶总内酯超声提取的最佳工艺为:料液比1:20,55℃水浴中45%的乙醇超声浸提20 min,浸提1次,浸提液中总内酯含量达10.86 mg/g.验证性试验结果表明,此工艺稳定,仪器精密度良好、回收率高、省时、节能,可以为工厂化浸提初冬银杏叶总内酯提供一定的技术参考.     

螺旋藻多糖调节小鼠免疫功能的作用

为研究螺旋藻多糖对小鼠免疫功能的调节作用,将螺旋藻多糖分别以低剂量6.7 ms/kg(推荐的人体每日摄入量)、中剂量67.0 ms/kg和高剂量134.0 mg/kg连续饲喂受试小鼠15 d后,对小鼠进行免疫调节试验.结果表明:螺旋藻多糖在134.0 mg/kg剂量时,可明显增强二硝基氟苯(DNFB)所致的小鼠迟发性超敏反应(P<0.05);中、高剂量组小鼠的胸腺指数、高剂量组小鼠血清的半数溶血值(HC_(50))及小鼠的单核-巨噬细胞吞噬指数明显高于对照组(P<0.05),且有明显的剂量.反应关系.根据保健食品免疫调节作用评价标准,螺旋藻多糖具有免疫调节作用.     

重金属污染胁迫对杂交狼尾草生理生化特性的影响

为了探讨杂交狼尾草(Pennisetum americanum×P.purpureum)的耐重金属性,用杂交狼尾草为试验材料,就不同程度重金属污染胁迫对其叶片中叶绿体色素、可溶性蛋白质、丙二醛(MDA)质量浓度,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)活性以及叶膜电解质相对渗透率的影响进行了研究.结果表明,随着重金属胁迫的加重,杂交狼尾草叶片中的叶绿体色素、可溶性蛋白质质量浓度呈下降趋势,MDA质量浓度和叶膜电解质相对渗透率呈上升趋势,SOD、CAT和POD活性呈先上升后下降趋