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61.
猪瘟兔化弱毒疫苗株TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用 总被引:1,自引:0,他引:1
为建立一种快速鉴定猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的方法,本研究根据GenBank中登录的HCLV株基因组序列,在Erns基因序列区内设计一对引物和一条TaqMan探针,建立了检测HCLV的荧光定量RT-PCR(FQRT-PCR)方法。该方法检测的灵敏度可达3.84拷贝/μL;而对猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、牛病毒性腹泻病毒基因组扩增结果均为阴性。实验组批内变异系数为1.05%~1.84%,批间变异系数为3.70%~5.43%。通过对32批HCLV半成品抗原和9批成品疫苗,分别用经典的兔检法测定兔体感染量(RID)和新建立的FQRT-PCR方法进行检测比较,两者有较好的相关性。结果表明,该方法具有快速、敏感、特异性强、稳定性好等优点,对HCLV生产配制及成品检验具有指导作用。 相似文献
62.
枯草杆菌的淀粉酶基因在大肠杆菌中的表达 总被引:2,自引:1,他引:2
根据枯草杆菌(Bacillus subtilis)基因文库中的淀粉酶基因的碱基序列,设计引物。以枯草杆菌菌体DNA为模板,利用PCR扩增出分子量大约为2.3 kb的淀粉酶基因片段。借助于核酸内切酶和连接酶把该基因植入到pHMSXD1质粒中,构建pHMSXD2质粒载体。通过高压电击处理把载体植入到大肠杆菌(JM10)中并成功表达。该株大肠杆菌在酶基因表达后,其淀粉酶活力达到1.037 6 U/mL(LB培养液)和1.361 0 U/mL(矿物元素培养液),分别比原始的枯草杆菌的淀粉酶活力提高了46倍和286倍。 相似文献
63.
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67.
犬瘟热病毒DNA疫苗接种犬的免疫保护 总被引:2,自引:0,他引:2
用犬瘟热病毒(CDV)囊膜糖蛋白基因(H、F)和核蛋白基因(N)重组质粒DNA和聚乙烯胺(PEI)混合后肌注10只3月龄CDV抗体阴性毕格犬,间隔30 d,共免疫3次,另选择5只犬作为阴性对照.免疫3次后,采用CDV攻毒.对照组呈现出犬瘟热的典型症状和组织病理损害,攻毒3周内,有2只犬衰竭死亡,1只犬症状明显,攻毒第18天外周血淋巴细胞中病毒RNA检测为阳性.DNA疫苗免疫组除出现一过性的体温升高外,未出现明显症状,攻毒后第18天外周血淋巴细胞CDV检测仍为阴性.DNA疫苗免疫后血清ELlSA抗体和病毒中和抗体测定显示,首免后机体激发的ELISA抗体滴度很低(101.25±0.615),二免后开始缓慢升高(101.69±0.285),再次免疫后达到102.051±0.214;中和抗体也呈现以上规律,三免后血清中和抗体为101.75±0.190,攻毒后血清ELISA抗体和中和抗体滴度迅速升高(103.02±0.202和102.41±0.245).试验表明CDV基因免疫对CDV的感染具有较好的保护作用,并能清除进入机体内的病毒.CDV基因免疫只激发较低水平的体液免疫,中和抗体在攻毒前达不到临界保护线(102),但对CDV攻击能产生较好的保护,推测其免疫效力可能源于细胞免疫和记忆性B淋巴细胞. 相似文献
68.
Qian ZHANG Mo LI Yuan YIN Shiyong GE Danjie LI Ibrahim M. AHMAD Ghulam NABI Yanfeng SUN Xu LUO Dongming LI 《Integrative zoology》2023,18(5):891-905
Human commensal species take advantage of anthropogenic conditions that are less likely to be challenged by the selective pressures of natural environments. Their morphological and physiological phenotypes can therefore dissociate from habitat characteristics. Understanding how these species adjust their morphological and physiological traits across latitudinal gradients is fundamental to uncovering the eco-physiological strategies underlying coping mechanisms. Here, we studied morphological traits in breeding Eurasian tree sparrows (ETSs; Passer montanus) among low-latitude (Yunnan and Hunan) and middle-latitude (Hebei) localities in China. We then compared body mass; lengths of bill, tarsometatarsus, wing, total body, and tail feather; and baseline and capture stress-induced levels of plasma corticosterone (CORT) and the metabolites including glucose (Glu), total triglyceride (TG), free fatty acid (FFA), total protein, and uric acid (UA). None of the measured morphological parameters varied with latitude except in the Hunan population, which demonstrated longer bills than those in other populations. Stress-induced CORT levels significantly exceeded baseline levels and decreased with increasing latitude, but total integrated CORT levels did not vary with latitude. Capture stress-induced significantly increased Glu levels and decreased TG levels, independent of site. However, the Hunan population had significantly higher baseline CORT, baseline and stress-induced FFA levels, but lower UA levels, which differed from other populations. Our results suggest that rather than morphological adjustments, physiological adjustments are mainly involved in coping mechanisms for middle-latitude adaptation in ETSs. It is worth investigating whether other avian species also exhibit such dissociation from external morphological designs while depending on physiological adjustments. 相似文献
69.
本试验旨在探讨β-羟丁酸(BHBA)对体外原代培养犊牛肝细胞凋亡的影响以及p38MAPK在其中的调控作用。选择培养72h的肝细胞,添加不同浓度的BHBA(0、0.6、1.2、2.4mmol/L),培养9h,每个浓度3个重复。另外选取细胞,p38MAPK抑制剂SB203580(10pmol/L)预处理1h后,添加BHBA,使其终浓度为2.4retool/L;PI/An—nexinV—FITC双染,运用荧光显微镜观察肝细胞凋亡情况;ELISA法检测p38的活性;实时荧光定量PCR方法检测p38、Caspase-3、Caspase9、bcl2基因的mRNA表达水平。结果表明,与对照组相比,1.2和2.4mmol/I—BHBA组的肝细胞凋亡明显增加;p38酶活性明显升高;p38、caspase-3和caspase-9基因mRNA表达水平均显著增加(P〈0.01)。bcl2基因mRNA表达水平显著降低(P〈0.05);添加p38抑制剂后,caspase-3和caspase-9基因mRNA表达水平显著降低(P〈0.01),bcl-2基因mRNA表达水平显著增加(P〈O.05)。高浓度的BHBA可以诱导体外原代培养犊牛肝细胞凋亡,p38在BHBA诱导的细胞凋亡中发挥重要作用。 相似文献
70.
昌潍白猪内分泌腺的生长发育规律 总被引:1,自引:0,他引:1
系统研究了1~8月龄昌潍白猪(192头)内分泌腺的性状指标,并由此得出了其内分泌腺的生长发育规律及其与体重变化的回归方程.结果表明,肾上腺在1~3、5~6月龄生长速度最快(P<0.01);甲状腺在1~8月龄有2个生长高峰期,即4月龄和6月龄;胸腺的生长高峰期集中于3~4月龄(P<0.01),颈部胸腺在1~3月龄生长速度显著快于胸部胸腺,胸部胸腺左侧生长发育明显快于右侧;脑垂体在2~6月龄生长速度较快.肾上腺、甲状腺、胸腺、脑垂体随体重变化的回归方程分别是y=0.019 9x+0.801 6(r=0.975 9,P<0.01);y=0.163 4x+1.286 8(r=0.976 1,P<0.01);y=1.760 8x+26.995 0(r=0.946 2,P<0.01);y=0.002 4x+0.062 0(r=0.908 3,P<0.01). 相似文献