PCR检测猪输血传播病毒Ⅱ型方法的建立及其应用

根据GenBank中猪源输血传播病毒Ⅱ型（Swine torque teno virus genogroupⅡ,TTVⅡ）基因序列设计并合成了1对特异性引物,扩增468bp目的片段。将PCR扩增产物测序,结果与GenBank中猪TTVⅡ型基因序列同源性为95%。利用该方法对猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪链球菌、猪多杀性巴氏杆、猪霍乱沙门菌和大肠杆菌等病原核酸进行扩增,均无条带出现,表明该方法具有较高的特异性。该方法的灵敏性试验表明,最低能检测到10.2pg核酸。利用所建立的PCR方法检测来自我国华南地区192份临床样品,阳性率为21.4%（41/192）。     

猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗诱导小鼠免疫保护效果的观察

重组表达猪传染性胸膜肺炎放线杆菌6种主要毒力因子基因:apxⅠ、apxⅡ、apxⅢ、apxⅣ、apfa和omp,以重组蛋白rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rOMP组合免疫小鼠作为试验I组,重组蛋白rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢr、OMPr、ApxⅣ和rApfa组合免疫小鼠作为试验Ⅱ组,PBS为对照组,分3次免疫小鼠,采用背部皮下多点注射,每次间隔2周,免疫剂量为0.2 mL/只,3免后1周分别以APP1型菌Shope 4074株(5×109cfu)和APP2型菌S1536株(5×1010cfu)进行攻毒试验。通过小鼠保护率与抗体效价的相关性研究、肺部病理变化及肺脏细菌的分布情况等指标进行综合评价。结果显示,试验Ⅰ组4种重组蛋白特异性抗体水平显著高于其他两组(P<0.05),对APP1型菌攻毒的保护率(9/10)明显高于试验Ⅱ组(5/10)和对照组(0/8),小鼠的免疫保护率与抗体效价之间存在显著正相关;且该组对APP2型菌攻毒的保护作用(无肺脏损伤)也明显优于其它两组(典型肺部损伤)。间接免疫荧光试验表明试验Ⅰ组对肺脏细菌的清除效果也明显优于其他两组。本试验揭示试验Ⅰ组对不同血清型APP攻击能够提供很好的交叉保护作用,从而为猪传染性胸膜肺炎新型疫苗的研制提供参考。     

非洲猪瘟的生物媒介

非洲猪瘟(ASF)存在多种传播途径,但其生物媒介--钝缘蜱是ASF病毒在疫源地传播、长期保存甚至发生变异的关键因素,也是ASF在很多地区和国家久控不绝的重要原因.为此作者将从钝缘蜱的生物学特性和生态学特性、与ASF的相互关系、该类蜱的防控及其在中国的分布现状等角度进行论述,为非洲猪瘟的有效防控奠定基础.     

抗菌肽Thanatin转基因小鼠建立的初步研究

人工合成抗菌肽Thanatin基因的3条片段,利用重叠延伸PCR扩增技术得到完整的Thanatin基因,通过分子克隆方法构建出pIRES2-EGFP-Thanatin重组表达载体。然后与脂质体混合,采用睾丸打点注射将新构建的抗菌肽基因注入小鼠睾丸内,共注射公鼠5只。6周后与雌鼠交配,对新生仔鼠进行断尾,提取尾尖基因组DNA,利用PCR和Southern印迹方法对其进行检测。结果显示,得到的52只新生仔鼠中PCR检测阳性率为38.46%,Southern印迹检测阳性率为30.77%;在活体荧光成像系统下转基因小鼠呈现绿色荧光表达。通过睾丸注射法使Thanatin基因在小鼠的基因组中得到整合,为进一步研究抗菌肽的作用机理、培育抗病动物品种以及通过建立转基因动物生物反应器进行抗菌肽的大量生产奠定了基础。     

猪繁殖和呼吸综合征油乳剂灭活苗的研制

使用猪场自行分离的PRRSV,进行细胞转瓶培养,收获病毒液后灭活,乳化制成油乳苗,各项指标检测均合格,并且免疫试验效果较好.     

猪链球菌2型安徽分离株毒力基因cps2J、mrp、epf、sly的检测及其序列分析

为了解19株猪链球菌2型(S.suis 2)安徽分离株的毒力基因型及毒力基因变异情况,通过PCR扩增S.suis 2毒力基因cps2J、mrp、epf和sly,对这4种毒力基因的扩增片段进行序列测定,并与国内外其他分离株的基因序列进行比较.结果显示,cps2J、mrp、epf和sly基因在19株S.suis 2中的检出率分别为100％、68.4％、68.4％、78.9％;19个受试菌株共分为7个毒力基因型,其中cps2J+/mrp+/epf+/sly+占57.9％,为优势基因型;S.suis 2安徽分离株4种毒力基因的检测序列之间及其与国内其他地区S.suis 2分离株的相应序列同源性均在99.1％以上,与国外S.suis 2分离株的相应序列同源性在87.8％～100％之间;19株cps2J+菌株中有1株菌cps2J基因序列有变异,13株mrp十菌株中有6株菌mrp基因序列发生变异,检测的epf和sly基因序列没有变异.表明cps2J +/mrp+ /epf+/sly+是S.suis 2安徽分离株优势毒力基因型,检测的S.suis 2安徽分离株cps2J、epf和sly基因部分序列较保守,mrp基因部分序列存在较大的变异.     

一株新城疫病毒弱毒株的分离鉴定

于１９９６年８月从长春地区－－养鸡场分离到一株新城疫病毒,该毒株经过鸡胚传代培养,病毒形态学观察,血凝谱测定、鸡胚平均致死时间试验、鸡脑内致病指数试验、脉致病指数试验及１入毒试验等生物学特性结果表明该新城商株为弱毒株。     

应用PCR诊断隐孢子虫病

应用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ）建立了一种诊断人及牛等哺乳动物隐孢子虫病的方法。试验采用甘油漂浮 Ｇ３ 耐酸漏斗过滤法纯化隐孢子虫卵囊,以液氮冻融法制备模板 Ｄ Ｎ Ａ,根据隐孢子虫 １８ Ｓｒ Ｒ Ｎ Ａ 序列设计 Ｐ Ｃ Ｒ 引物建立其诊断方法。该方法特异性强,可检出鼠隐孢子虫（ Ｃｒｙｐｔｏｓｐ ｏｒｉｄｉｕｍ ｍ ｕｒｉｓ）和小球隐孢子虫（ Ｃ．ｐａｒｖｕｍ ）卵囊;敏感性高,每克粪便可检出 ４００ 个卵囊。初步应用结果表明,所建立的 Ｐ Ｃ Ｒ 方法适合于人、牛等哺乳动物隐孢子虫病的临床诊断和流行病学调查。     

赤羽病病毒核衣壳蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

以纯化的重组赤羽病病毒核衣壳蛋白作为诊断抗原，建立了检测牛血清特异性核衣壳蛋白抗体的间接ELISA方法，初步组装成便于现地使用的试剂盒。经对试验条件进行优化，确定最佳抗原包被量为每孔1μg（100μL），样品稀释度为1：100，兔抗牛IgG辣根过氧化物酶标记抗体稀释度为1：8000。经特异性试验和重复性试验证明该方法特异性高、重复性好。应用初步研制的间接ELISA试剂盒和微量中和试验法分别对云南省的89份、内蒙古的100份牛血清样本进行了检测，以中和试验为参照，经统计学处理，得出检测临界值分别为0．411和0．303，2种方法的符合率分别为72．7％（56／77）和91．4％（85／93）。试剂盒在37℃保存3d，对敏感性无明显影响。     

猪链球菌2型对家兔的试验感染及其病理学观察

利用猪链球菌2型四川分离强毒菌株458#,通过腹腔注射接种日本大耳白家兔,观察其临床症状和病理学变化。结果表明,猪链球菌2型强毒株458#可引起家兔发病或死亡,并能从发病家兔的组织样品中分离到所接种毒株。感染家兔的特征性组织病理学变化表现为典型的弥漫性血管内凝血和微血栓形成。猪链球菌2型感染家兔动物模型的建立,对于评价猪链球菌2型的毒力,探索其发病机制具有重要的意义。