重组质粒pACYC184-hok/sok的构建及稳定性研究

以低拷贝质粒pACYC184为载体,将hok/sok基因插入到载体BamH Ⅰ位点,构建重组质粒pACYC184-hok/sok稳定系统,同时构建hok/sok基因缺失突变重组质粒pACYC184-hok/sok(M).通过对构建的重组菌进行连续传代和对不同代次的重组质粒进行SphⅠ酶切,分析hok/sok基因的引入对宿主细胞生长的影响.结果表明,重组质粒pACYC184-hok/sok在无抗生素筛选压力下连续传代,传至第135代时质粒稳定率仍是100%,且传代前后的质粒SphⅠ酶切图谱没有发生变化,DNA序列测定表明,插入的hok/sok基因没有发生任何突变.突变重组质粒pACYC184-hok/sok(M)传代前后的质粒SphⅠ酶切结果虽没有发生变化,但其相应的重组菌传至第15代,质粒几乎完全丢失.生长曲线的测定结果表明,与舍pACYC184重组菌生长曲线相似,pACYC184-hok/sok重组菌生长较快,而pACYC184-hok/sok(M)重组菌生长缓慢.以上结果表明,含hok/sok稳定系统,其稳定性明显高于无hok/sok稳定系统的质粒pACYC184以及突变质粒pACYC084-hok/sok(M).重组质粒pAqCYC184-hok/sok具有良好的结构稳定性和分离稳定性.     

高效液相色谱荧光检测法同时检测鸡蛋中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺残留

建立了高效液相色谱荧光检测法同时检测鸡蛋中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺残留的方法.鸡蛋经碱性乙酸乙酯提取,饱和正己烷脱脂,氮吹仪吹干浓缩后用流动相溶解.用Lichrospher C1s柱,以乙腈-磷酸二氢钠溶液(0.01 mol/L,含0.005 mol/L十二烷基硫酸钠和0.1％三乙胺)(35:65,v/v)为流动相,在激发波长224 nm、发射波长285 nm处用荧光检测器检测.氟苯尼考在0.01～10.0 mg/L、氟苯尼考胺在0.002 5～2.5 mg/L浓度范围内,本方法线性关系良好,相关系数分别为0.99 97和0.999 8.当添加水平氟苯尼考为15～500μg/kg、氟苯尼考胺为5～500 μg/kg时,该方法平均回收率分别为87.41％～92.29％和89.01％～95.15％,相对标准偏差分别为3.51％～5.36％和4.28％～5.72％;检测限分别为1.5 μg/kg和0.5 μg/kg(S/N=3);定量限分别为5μg/kg和2 μg/kg(S/N=10).该方法简便、快速、灵敏度高,可同时检测鸡蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺的残留.     

Study on Expression Difference of IGFBP-5 Gene in Different Tissues of Kazakh and Yanqi Horses

The study aimed to explore the mRNA expression pattern of insulin-like growth factor binding protein-5 (IGFBP-5) gene in different tissues of Kazakh and Yanqi horses.The expression of IGFBP-5 gene in different tissues of heart,liver,spleen,lung,kidney,small intestine,large intestine,cecum,intercostal muscles,longissimus dorsi muscles,brachialis muscle and gluteus in two horses were detected by Real-time quantitative PCR and compared the mRNA expression in the same tissues of two breeds.The results showed that the expression of IGFBP-5 in longissimus dorsi muscle and brachialis muscle of two breeds were significantly higher than other tissues including heart,liver,spleen,lung,kidney,small intestine,large intestine and cecum (P<0.05),and was the lowest in large intestine.The expression of IGFBP-5 in kidney,small intestine,large intestine,cecum,longissimus dorsi muscle and brachialis muscles of Yanqi horse were higher than in the same part of Kazakh horse,and among those in longissimus dorsi muscle and large intestine of Yanqi horse were extremely significantly higher than in the same part of Kazakh horse (P<0.01),and in small intestine and cecum of Yanqi horse were significantly higher than in the same part of Kazakh horse (P<0.05).The test was for further researching the biological function of IGFBP-5 gene,and it could provide a theoretical basis for genetic improvement of production performance of horse in our country.     

中药添加剂对海南文昌鸡消化酶活性的影响

试验旨在研究中药添加剂对海南文昌鸡消化酶活性的影响。将180只雌性文昌鸡随机分为5组,每组3个重复,每个重复12只鸡。第1组为空白对照组,饲喂基础日粮;第2组为抗生素对照组,在基础日粮中添加600 mg/kg的金霉素;第3、4、5组分别在基础日粮中添加0.1%、0.2%和0.3%的中药添加剂。试验共进行6周。每周称重、计量采食量。第35、56日龄时,每组分别取接近平均体重鸡6只,屠宰后迅速取胰腺和十二指肠内容物速冻,然后制备匀浆以测定胰腺蛋白酶活性和十二指肠内容物淀粉酶活性。结果显示,0.2%中药添加剂能显著提高日增重(P<0.05),0.2%的中药添加剂能够提高胰蛋白酶活力,但差异不显著(P>0.05),0.2%和0.3%的中药添加剂均能够显著提高肠道内容物中淀粉酶活力(P<0.05)。因此,中药添加剂能够提高文昌鸡胰蛋白酶和肠道淀粉酶活力,以0.2%的添加量较适宜。     

中药精液消毒剂的消杀效果及安全性评价研究

为了解新研制的中药精液消毒剂的消毒效果和安全性,本研究开展了体外抑菌杀毒和安全性综合评价实验。体外药效学实验显示:该消毒剂对大肠杆菌高敏,对门氏菌、禽巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌均中敏,4种菌的体外MIC值分别为31.3、62.5、62.5和31.3 mg/mL;消毒剂按1∶400及以上浓度与新城疫病毒互作,可在5 min内对该病毒有100%杀灭率。安全性评价实验显示:该消毒剂的小鼠急性毒性LD50值>5000 mg/Kg,无毒性;对兔子的皮肤和眼睛染毒,无刺激;消毒剂按1∶10浓度及以下,对常温稀释保存的种公鸡精液中精子生存指数影响不大。临床应用实验显示:在冻融条件下,该消毒剂1∶10浓度组的种公鸡精液中精子存活率要显著高于其它试验组(P<0.01);消毒剂按1∶10浓度对种公鸡精液稀释消毒,种蛋受精率和孵化率都有明显提高,但差异不显著(P>0.05)。结果表明:该消毒剂不仅对种公鸡精液中常见病原微生物具有较好的杀灭效果,而且安全无刺激、无毒,对种鸡繁育无不良影响。     

猕猴外周血液中多潜能调控因子Oct4、Nanog和Sox2基因的表达

采用半定量RT-PCR对采自幼体(2岁以内)、亚成体(2～5岁)和成体(5岁以上)猕猴共28份外周血样品进行分析.结果显示,幼体和亚成体猕猴所有外周血样品均转录表达Oct4、Nanog和Sox2基因,大部分成体猕猴外周血样品(8/12)表达Oct4、Nanog和Sox2基因,少数样品仅表达Oct4和Sox2(2/12)或Oct4和Nanog(1/12),1份样品不表达3个基因;同一年龄组内,Sox2表达水平均显著高于Oct4和Nanog(P≤0.05),幼体组Oct4和Nanog的表达水平没有显著性差异(P＞0.05),亚成体组和成体组Oct4的表达水平均显著高于Nanog(P≤0.05);在不同年龄组间,Oct4和Nanog表达水平没有显著性差异(P＞0.05),幼体组Sox2表达水平显著高于成体组(P≤0.05).结果表明,在生理条件下Oct4、Nanog和Sox2基因在不同年龄段猕猴外周血中均转录表达,不同基因表达水平存在一定差异,随年龄增加这些基因表达量有降低的趋势.     

丙泊酚静脉麻醉与安氟醚吸入麻醉在巴马小型猪体外循环中的比较研究

为探讨丙泊酚静脉麻醉与安氟醚吸入麻醉在巴马小型猪体外循环(CPB)中的麻醉效果,本研究选用巴马小型猪10头,平均分成2组,分别进行丙泊酚静脉麻醉和安氟醚吸入麻醉;开胸后进行全血肝素化处理,分别于升主动脉、上腔静脉和下腔静脉插管,连接体外循环机进行CPB;观察并记录麻醉诱导前(T0)、麻醉诱导后(T1)、CPB前即刻(T2)、降温至30 ℃(T3)、阻断主动脉前即刻(T4)、阻断主动脉后4 min(T5)、开始复温即刻(T6)、停CPB即刻(T7)、关胸后即刻(T8)及手术结束拔管后10 min(T9)10个时间点各组试验猪的生命体征、鼻温(NT)、心率(HR)、平均动脉压(MAP)、pH及血氧饱和度(SPO₂)指标。结果2组试验猪于CPB实施前后的基本情况如体重、手术时间和麻醉时间等指标均无显著性差异(P＞0.05);安氟醚组恢复自主呼吸的时间显著短于丙泊酚组(P＜0.05);与T0和T1相比,各组试验猪在CPB进行时其NT、HR和MAP值均显著降低(P＜0.05);但各组间及组内SPO₂和pH差异不显著(P＞0.05)。由此可见,丙泊酚静脉麻醉与安氟醚吸入麻醉均可用于巴马小型猪CPB中的麻醉。选用丙泊酚时,应根据手术过程中试验动物的反应情况适当调整用量;而安氟醚麻醉过程相对平稳,麻醉效果好,术后苏醒快,适合情况复杂且时间较长的手术。     

猪圆环病毒Ⅱ型流行病学新特点及致病机理研究进展

猪圆环病毒是猪圆环病毒病的主要致病因素,该病给养猪业带来很大的经济损失。猪圆环病毒变异较快,是单链DNA病毒中最高的;易感猪主要通过消化道和呼吸道水平传播而感染,猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)人工或自然感染猪的排泄物、鼻腔、口腔和扁桃体拭子和患畜的尿液和粪便中均能检测到PCV2。断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的发病主要与猪体内PCV2含量有关。PCV2特异抗体对猪群的PCV2感染具有保护作用。PCV2诱导猪继发性免疫缺陷,淋巴细胞缺失,影响PCV2感染结果的因素有:病毒、宿主、混合感染和免疫调节等。     

猪繁殖与呼吸综合征母源抗体和免疫抗体的消长规律研究

为制定科学的免疫程序,从根本上控制猪繁殖与呼吸综合征的发生,用ELISA诊断试剂盒分别对母猪、仔猪进行了母源抗体和免疫抗体检测。试验证明母猪在配种前15 d首免,怀孕2个月时二免,在下一次配种前15 d再免,如此按生产周期免疫可以抵抗猪繁殖与呼吸综合征的感染。在母猪产前1个月免疫猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗,所产仔猪母源抗体60日龄时为阴性,故45日龄左右对仔猪进行首免最佳,为确定仔猪首免日龄提供了理论依据。对40日龄仔猪免疫猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗后,仔猪58日龄时抗体S/P平均值最高,到160日龄育肥猪时抗体S/P平均值为阴性,这时不能抵抗猪繁殖与呼吸综合征的感染。对40日龄仔猪肌肉注射2 mL猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗,70日龄同剂量二免,85日龄时抗体S/P值平均值最高,到180日龄育肥猪时抗体S/P平均值仍为阳性,还能抵抗猪繁殖与呼吸综合征的感染,如果作为肉猪可以安全上市;作为后备母猪,在配种前进行免疫即可。非免疫母猪、仔猪对照组抗体均为阴性。通过试验基本上查明了猪繁殖与呼吸综合征母源抗体和免疫抗体的消长规律,为以后制定免疫程序提供了理论依据。     

白鹭大肠埃希菌的分离鉴定与药敏试验

对3份白鹭新鲜粪便进行细菌分离纯化、染色镜检和生化鉴定,并用Kirby-Bauer法对分离细菌用30种抗菌药进行了耐药性试验。结果表明,分离到3株革兰阴性小杆菌为大肠埃希菌,分别编号为E1、E2和E3。3株白鹭大肠埃希菌都对青霉素G、阿莫西林、万古霉素和洁霉素耐药,对常用广谱抗菌药物有2重以上耐药性,但对试验用的氨基苷类抗生素、喹诺酮类药物和复方新诺明高度敏感。