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弓形虫微线体蛋白MIC3基因的克隆及原核表达 总被引:11,自引:1,他引:11
根据编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的全长基因,克隆入pGEX-KG表达载体,转化入E.coli DH5α感受态细胞,经含氨苄青霉素琼脂平板筛选,小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定.然后阳性重组质粒转化入E.coli BL21-CodonPlus,IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定.结果显示,扩增的MIC3基因与GenBank中相应基因序列(AJ132530)的同源性达99.6 %,表达的MIC3融合蛋白表观分子量约为66 ku,且可被兔抗弓形虫免疫血清识别.说明所获得的表达蛋白质具有一定的反应原性,为下一步利用重组蛋白建立弓形虫的诊断方法和研制弓形虫的亚单位疫苗奠定了基础. 相似文献
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为探究祁连山中段不同退化高寒草地土壤细菌群落分布特征,采用Illumina HiSeq PE250高通量测序平台对轻度、中度和重度退化草地土壤细菌群落变化特征进行研究,并对土壤细菌群落与土壤酶活性、土壤理化因子间关系进行分析。结果表明:随着退化程度加剧,植被盖度、高度、地上生物量和多样性指数均明显降低(P<0.05);土壤理化性质和酶活性变化各异且差异显著(P<0.05)。高通量测序共得到257971条有效序列,219017条优质序列和2004个OTUs。细菌群落丰富度指数依次为轻度>中度>重度,多样性指数为轻度>重度>中度,Beta多样性分析表明各样地间差异为轻度>重度>中度。其中,放线菌门(Actinobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、酸杆菌门(Acidobacteria)和变形菌门(Proteobacteria)为3种退化草地土壤的优势菌门,在轻度、中度和重度退化草地土壤中分别占77.25%、84.27%和78.66%;乳球菌属为3种退化草地土壤的优势菌属,在轻度、中度和重度退化草地土壤中分别占14.29%、38.84%和7.39%。冗余分析表明:土壤酶活性和土壤理化性质均对细菌群落的组成具有影响,其中土壤pH是影响土壤细菌群落分布的主要驱动因子。祁连山中段不同退化高寒草地土壤细菌群落的变化主要受土壤理化性质和酶活性的影响。 相似文献
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134.
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为了优化羽毛粉麸皮混合固态发酵条件,在发酵结束后测定固态发酵产率和发酵产物体外消化率,计算可消化物产率,并以此作为衡量指标对发酵条件(羽毛粉比例、缓冲液添加量、缓冲液pH、接种量、NJQ2接种比例、培养基厚度、发酵温度、发酵时间)进行优化。结果表明:最优发酵条件为羽毛粉比例50%,缓冲液添加量100%,缓冲液pH 7.5,接种量10%,NJQ2接种比例60%,培养基厚度1.5 cm,发酵温度37℃,发酵时间7 d。此时的发酵产率为86.2%,体外消化率为60.3%,可消化物产率为52.0%。通过发酵条件的优化,提高了发酵产物的体外消化率,理论上拓宽了羽毛粉的应用范围,具有很大的潜在经济价值。 相似文献
136.
ZHI Chan-ping GUO Xiao-ting YAO Xu GUO Ze-wen WU Sheng-jun YI Ling-xian CHENG Bang-zhao WANG Jun-jun LIU Jian-hua 《中国畜牧兽医》2015,42(12):3351-3357
To determine the drug resistance of E.coli strains from swine and chicken in organic farm,collection of stool specimens was conducted in one organic farm in Conghua city,Guangdong province in 2014,in which 118 E.coli strains were separated,including 55 from chicken and 63 from swine.The sensitivity of the E.coli strains from swine and chicken to 18 kinds of drugs was detected through agar dilution method.Similar properties in drug resistance were observed both in E.coli strains from swine and chicken in the same organic farm.In consideration of the resistance rate,samples were relatively sensitive to ceftazidime,cefquinome,cefoxitin,amikacin,apramycin,gentamicin,neomycin,florfenicol,chloramphenicol,imipenem,ciprofloxacin and olaquindox (chicken 0 to 21.8%;swine 0 to 14.3%).These isolates showed moderate resistance to ampicillin and streptomycin (chicken 29.1% to 38.2%;swine 23.8% to 27.0%).About 56.4% chicken isolates and 47.6% swine isolates showed resistant to more than 3 kinds of drugs.However,severe resistance was observed in trimethoprim-sulphamethoxazole,tetracyclineand and doxycycline (chicken 45.5%,76.4% and 72.7%;swine 50.8%,81.0% and 68.3%).The results also indicated that under organic farming mode,the drug resistance rates of E.coli strains from swine and chicken were relatively low in general.Multi-drug resistance existed but was relatively slight.Although the drug resistance rate to several specific antimicrobials was high,it was still lower than that in conventional farms.Since most studies focused on the drug resistance of the bacteria under conventional farming model,this study filled the blank of the research of drug resistance under organic farming model. 相似文献
137.
138.
Banghe YANG Baoping REN Zuofu XIANG Jingyuan YANG Hui YAO Paul A. GARBER Ming LI 《Integrative zoology》2014,9(5):598-612
The highly polymorphic genes within the major histocompatibility complex (MHC) not only play a major role in immunity resistance, but also seem to provide hints for mate choice in some animal populations. In the present study we investigated MHC‐related mate choice in a small natural population (group size 40–55 individuals) of a polygynous primate, the Sichuan snub‐nosed monkey (Rhinopithecus roxellana). We found that there was no evidence either for MHC‐disassortative mating, or for females to mate with males based on MHC heterozygosity or specific alleles. Nevertheless, of the 11 alleles identified, we found that the frequencies of 2 alleles, Rhro‐DRB2 (P < 0.01) and Rhro‐DRB5 (P < 0.05) were higher in offspring than in their parents. These findings suggest that MHC‐DRB in this population of R. roxellana is unlikely to be associated with mating preferences. Limited female opportunities for mate choice are likely due, in part, to the harem breeding structure present in R. roxellana, and the relatively small number of resident adult males in our study band (N = 4–6). In addition, we suggest that differences in the frequency of particular alleles across generations may be linked to parasite resistance in a fluctuating environment; however, confirmation of this finding requires further study. 相似文献
139.
为原核表达Tml6和Tm18重组蛋白,本研究以自然感染羊源脑多头坳原头节基因组DNA为模板分别扩增Tml6和Tm 18杭原基因全基因片段,测序鉴定后合成其开放阅读框架DNA片段,将基因组序列中的内含子去除并对其稀有密码子进行改造优化,构建重组表达质粒pGEX-Tm 16和pGEX-Tml8.转化大肠杆菌BL21后以IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物并进行纯化.结果显示:在大肠杆菌中表达出带有GST标签的大小约为39.6 ku和39.4 ku的重组蛋白,经谷胱甘肤琼脂糖树脂纯化得到高纯度的可溶性的GST-Tm 16及GST-Tml8重组蛋白,western blot分析表明重组蛋白均能够被兔抗GST单克隆杭体特异性识别. 相似文献
140.
试验旨在研究不同热处理干酒精糟及其可溶物(DDGS)蛋白质化学成分、康奈尔净碳水化合物-蛋白质体系(CNCPS)组分、瘤胃降解特性和小肠消化率与蛋白质分子结构的相关性。采用CNCPS、尼龙袋技术及三步体外法对不同热处理的DDGS营养价值进行评定,利用傅里叶变换红外光谱技术(FTIR)分析蛋白质分子结构的变化,进而探求它们之间的相关关系。结果表明:加热使DDGS瘤胃降解率和小肠消化率降低,使小肠可消化蛋白增加;不同热处理对DDGS蛋白质分子结构均有显著影响(P<0.05);蛋白质分子结构中的酰胺Ⅰ和酰胺Ⅱ带的峰高和峰面积、酰胺Ⅰ带和酰胺Ⅱ带峰高和峰面积的比值与DDGS中蛋白质的营养价值、瘤胃降解参数及小肠消化率存在显著相关关系(P<0.05)。可见,不同热处理对DDGS蛋白质分子结构、营养价值和瘤胃降解特性及小肠消化率均有影响,DDGS中蛋白质分子结构可以有效地估测蛋白质营养特性,并可利用FTIR光谱技术对DDGS营养价值及加热程度进行评定。 相似文献