基于实时荧光定量PCR技术的猪伪狂犬病活疫苗含毒量评价

为定量分析贵州省临床用猪伪狂犬病(pseudorabies,PR)活疫苗中病毒含量,根据GenBank中公布的伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gB基因序列(登录号:M17321.1)设计1对特异性引物,建立实时荧光定量PCR方法,并对来自6个不同厂家的猪伪狂犬病活疫苗进行含毒量分析。结果显示,试验成功建立了可用于PRV检测的实时荧光定量PCR方法,标准曲线中标准品各稀释度质粒拷贝数与Ct值呈良好的线性关系,标准曲线方程为:Y=-0.97X+33.66(R^2=0.999),该方法最低检测病毒含量为3.19×10~1拷贝/μL,敏感性高且具有良好的重复性和特异性。应用所建立的实时荧光定量PCR方法对贵州省临床用6个厂家生产的猪伪狂犬病活疫苗的病毒含量进行检测,结果显示,6种市售猪伪狂犬病活疫苗(A～F)中病毒含量分别为1.67×10~7、4.83×10~5、2.64×10~6、4.27×10~7、3.39×10~6和3.68×10~5拷贝/μL,来自不同厂家的疫苗病毒含毒量存在明显差异,最大差异可达116倍,其中来自A、D厂家的两种猪伪狂犬病活疫苗具有较高的含毒量。本试验所建立的实时荧光定量PCR方法可用于猪伪狂犬病活疫苗病毒含量的快速检测和评价,对猪伪狂犬病活疫苗的质控和临床用疫苗选择具有一定的指导意义。     

三代测序技术及其应用研究进展

通过DNA测序不仅可以更好地认识生命的本质,了解生物的差异性、进化及发展史,而且为重组DNA的研究提供了方向,在疾病诊断及基因分型方面具有非常重要的实用价值。首先从发现DNA是遗传物质开始,简要回顾了第一、二和三代测序技术的整个发展历程,以及各自的优缺点和主要测序技术或平台;其次,重点介绍了由PacBio公司开发的第三代测序典型技术--单分子实时测序技术（SMRT）和ONT纳米孔测序技术的原理、方法和技术流程,并总结了第三代测序技术的应用领域,包括基因组重测序、do novo测序、转录组研究、甲基化检测、与疾病相关的结构变异检测,以及流行病学中病毒准种分析等应用;再次,比较了三代测序技术在转录组测序和表观遗传学研究中的技术优势,第三代测序技术在基因组重复区域或结构变异等研究领域具有非常明显的优势,对多种疾病的研究意义重大,已成为未来重要的精准诊断工具,此外,凭借对重要经济物种遗传信息的解析,育种工作者通过建立基因与性状的关联,对持有优良性状基因的个体进行人工选育,大大缩短了育种年限;最后,对第三代测序技术在医疗、农业、环境等领域的应用前景进行了展望。     

Study on Genetic Diversity and System Evolution of mtDNA D-Loop Region in Xianglushan Chicken

This study was aimed to analyze the genetic diversity and phylogenetic evolution in Xianglushan chicken.The full-length sequences of mitochondrial DNA D-Loop (mtDNA D-Loop) region of 121 Xianglushan chickens were analyzed by PCR amplification combined with bidirectional sequencing,and the composition,variation and maternal origin of mtDNA D-Loop region were discussed.The results showed that the total length of mtDNA D-Loop region in Xianglushan chicken was 1 231-1 233 bp.The contents of A,T,C and G were 26.62%,33.55%,26.49% and 13.34%,respectively.The content of T was the highest,the content of G was the lowest,and the content of A+T was significantly higher than that of G+C,it indicated that region might have certain base hobbies.Analysis of 121 full-length sequences were found to coexist in 11 haplotypes and 26 mutation sites,of which 2 were single polymorphic information sites,24 were simple information sites,4 bases were inserted and 2 bases were missing.The genetic diversity analysis results showed that the haplotype diversity was 0.814,the nucleotide diversity was 0.00447,the average nucleic acid difference was 5.494,which indicated that the genetic diversity of Xianglushan chicken was relatively rich,the effect of preservation was better,which had a certain breeding space.Tajima's D was 0.39378 and the test results were not significant (P>0.10),in line with neutral mutations.The cluster analysis results showed that Xianglushan chicken and Gallus gallus gathered as one,indicating that Xianglushan chicken originated from Gallus gallus, and there were 4 branches inside the branch,indicating that Xianglushan chicken had many matrilineal origins.The results could provide some reference data for the protection and exploitation of pheasant germplasm resources in Xianglushan chicken.     

肉牛TMR日粮粒度和饲料消化率分析

[目的]分析肉牛场不同牛群全混合日粮(TMR)的粒度和饲料消化率。[方法]在固原市瑞科丰农牧科技有限公司选取西门塔尔牛犊牛、母牛、育肥牛各120头作为试验牛群,对照组和试验组各60头,试验组日粮中添加酵母培养物AYC-X6,对照组未添加。[结果]结果表明,断奶犊牛和育肥牛TMR日粮粒度第2层比例最高分别为51.60%,52.9%。母牛第1,2,3层比例基本相同,在20.30%～21.85%之间。犊牛日粮中添加酵母培养物AYC-X6后第1,2层筛上物合计35%,比例下降,说明犊牛消化程度增加,消化率提高。育肥牛日粮第1,2层筛上物合计分别为64%,48%,分别比对照组降低8%,24%。[结论]肉牛TMR日粮粒度越大,粗饲料越长,过瘤胃速度越慢;育肥前期粗饲料长度为2.5 cm,育肥后期粗饲料长度3.5 cm。断奶犊牛和育肥牛日粮中添加酵母培养物AYC-X6提高了饲料消化率。     

低温胁迫对结缕草抗氧化酶活性和脂肪酸含量的影响

为探讨不同纬度来源结缕草（Zoysia Willd）对低温的响应,本研究以两份结缕草种质LT-40（高纬度）和LT-22（低纬度）为材料,分析了适温（30℃/25℃）、亚适温（18℃/12℃）、冷害（8℃/2℃）和冻害（2℃/-4℃）4种温度对叶片电导率（Electrolyte leakage,EL）、叶绿素和丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量、抗氧化酶活性、叶片脂肪酸含量及不饱和指数的影响。结果表明,随着温度的降低,EL增大,叶片中叶绿素含量降低、MDA含量升高,且在LT-22中变化更大;叶片超氧化物歧化酶、过氧化物酶、过氧化氢酶活性均随着温度的下降而逐渐升高,且在LT-40中表现更为显著;低温下叶片中棕榈酸含量呈下降趋势,而硬脂酸含量只在LT-40叶片中显著下降,棕榈油酸和油酸含量在LT-40叶片中显著低于对照,而亚麻酸含量在LT-40叶片中却显著高于对照,不饱和指数在LT-40叶片中显著高于对照。高纬度来源的结缕草在低温胁迫下具有较高的抗氧化能力和较好的质膜稳定性,因而其耐寒性更好。     

几种生物药剂对葡萄白粉病防治效果初报

葡萄白粉病( Uncinula necator )是造成云南葡萄减产品质降低的主要病害之一,特别是在金沙江干热河谷早熟葡萄产区,白粉病的流行会使葡萄减产30%,严重减产50%。通过田间试验对几种药剂对葡萄白粉病防效进行比较,从而选出防效较好的药剂。第1次药后7d,新高脂膜粉剂防治效果最高,达42.92%。第2、3、4次药后,15%三唑酮防治效果最高,分别达到51.50%、57.86%、51.81%,其余生物药剂防治效果都未达到50%,存在显著性差异。     

啤酒糟制备低聚木糖功能饲料添加剂酶解条件优化

为提高啤酒糟的饲用价值,开发啤酒糟功能性饲料添加剂,对啤酒糟采用碳酸钠和双氧水进行预处理,采用单因素试验和响应面分析法,对啤酒糟制备低聚木糖饲料添加剂的酶解条件进行了研究。结果表明:当初始pH5.5,木聚糖酶201 U/g,纤维素酶248 U/g,酶解温度48℃,酶解时间3 h时,啤酒糟中低聚木糖含量为23.8673 mg/g。     

犬副流感病毒D121004株的分离鉴定及其F基因遗传进化分析

为了给犬副流感病毒(CPIV)疫苗研制提供支持,无菌采集有呼吸道症状病死犬的脑和肺脏样品,处理后接种Marc-145细胞,通过RT-PCR、红细胞吸附试验,对盲传3代的细胞培养液进行鉴定,成功分离到1株CPIV。该病毒能使Marc-145细胞出现细胞病变,且具有吸附鸡红细胞的能力,将其命名为CPIV-D121004株。对该毒株的F糖蛋白全基因进行克隆及核苷酸同源性分析并构建遗传进化树,发现分离株的F基因较为保守,未出现大的遗传变异。今后需要对分离株的免疫原性进行研究,以探究其作为候选疫苗株的潜力。     

奶牛早期妊娠诊断技术的研究进展

高效准确的早期妊娠诊断,可以缩短母牛的产犊间隔,从而达到提高母牛繁殖效率的目的。家畜早期妊娠诊断方法的研究具有悠久的历史,从原始的外部观察法到目前应用最广泛且最直接的直肠检查法,再到后期发展起来的超声波检查法以及近年来研究比较多的易于商业化的间接检测法。本文对在生产中具有实际应用效果且具有一定发展前景的早期妊娠诊断技术应用现状进行了综述。     

绵羊肺炎支原体恒温热隔绝式PCR方法的建立

为建立绵羊肺炎支原体(Mo)感染疾病的现场便捷化诊断方法,本研究选择Mo高度保守区域tuf基因设计合成一对特异性引物和探针,建立了恒温热隔绝式PCR(iiPCR)方法并对其特异性、灵敏性进行评价。结果显示,建立的iiPCR方法仅对Mo的典型菌株和其临床分离菌株的DNA呈阳性结果,具有较强的特异性;对Mo基因组DNA的检出下限为24fg/μL,具有较高的敏感性。利用该方法检测临床样品,结果显示该方法可以从临床采集的羊鼻拭子及支气管拭子中检测出MoDNA,对扩增产物的测序表明检测结果具有较高的准确性。本研究建立的iiPCR方法为Mo的检测及其感染疾病的诊断提供了快速、便捷的技术手段。