基于重组猪囊虫18 ku抗原的间接ELISA方法的建立

利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从猪囊尾蚴中克隆到18 ku蛋白基因,将扩增产物与pGEM-T Easy载体连接后测序分析.将目的基因亚克隆至表达载体,构建重组质粒pGEX-CE18,经转化大肠杆菌BL21 (DE3)后诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot分析表达产物.表达的目的蛋白纯化后作抗原建立检测猪囊虫抗体的重组蛋白间接ELISA方法.结果表明,18 ku蛋白基因在大肠杆菌中成功表达,表达产物约为35 ku的融合蛋白,并能被猪囊虫感染血清识别.经薄层扫描分析,表达量占菌体蛋白总量的28%.与商品化ELISA试剂盒平行检测178份阳性血清样品,二者的符合率为98.83%,说明建立的重组蛋白ELISA方法可用于猪囊虫病的诊断.     

猪白介素-4重组表达质粒在小鼠体内的组织分布及环境释放安全性

为了探讨pcDNA3.1/IL-4重组表达质粒作为疫苗佐剂进入临床应用的生物安全性,本试验就pcDNA3.1/IL-4重组表达质粒在小鼠体内的组织分布和环境释放安全性进行了研究.将pcDNA3.1/IL-4重组表达质粒经肌肉途径免疫BALB/c小鼠,免疫后不同时间剖杀动物并摘取各种组织,抽提基因组DNA.利用PCR技术分析其在组织内的分布及与细胞基因组发生整合的可能性,同时检测了免疫动物现场环境,以监测pcDNA3.1/IL-4重组表达质粒上的猪IL-4基因、CMV启动子基因和抗性基因是否在环境细菌中发生转移和扩散.结果表明,免疫后1 d在3/3小鼠各组织中仅注射部位肌肉存在重组表达质粒,免疫后5 d仅有1/3小鼠于注射部位肌肉中存在重组表达质粒,免疫后15 d所有小鼠的各组织中无重组表达质粒存在;未发现pcDNA3.1/IL-4重组表达质粒整合到宿主细胞基因组和转化到环境其他细菌中.因此,认为pcDNA3.1/IL-4重组表达质粒对动物和环境是安全的.     

奈曼旗沙地32年来的沙漠化进程浅析

选取位于科尔沁沙地腹地的奈曼旗为研究对象,分析了研究区1977到2009年沙漠化进程情况.研究结果表明：沙地面积从1977年开始呈上升趋势,1989年后有所减少.研究发现年降水量和耕地面积的变化对沙地面积的影响较大,退耕还林还草和禁牧政策的提出对沙漠化防治起到了积极作用.     

安徽省农村剩余劳动力转化出路分析

本文从安徽农村剩余劳动力资源状况入手，提出了农村剩余劳动力的转化是全省就业战略的核心观点，认为现阶段须采取城乡综合就业战略，并提出一些具有可行性的措施。     

鸡球虫苗(LCV-2号)安全性和免疫效果研究

在实验条件下,研究了鸡球虫苗LCV-2号对笼养鸡的安全性和免疫保护效果。试验设空白对照组、攻虫对照组、免疫1组(1个免疫剂量)、免疫2组(2个免疫剂量)和免疫3组(0.5个免疫剂量),共5个试验组,每组10只鸡。试验结果表明:①空白对照组、攻虫对照组和三个免疫组的相对增重率依次为100%、84.0%、96.9%、91.0%和91.0%;②攻虫后第8 d,每组剖检2只鸡,肠道病变记分5个组依次为0、4、1、3和4分。③免疫期间,免疫1、2和3组的每克粪便卵囊数(OPG)平均值依次为4.2×10~3个、9.2×10~3个和5.4×10~3个;攻虫期间,攻虫对照组5.117×10~5个、免疫1、2和3组依次为0.797×10~5个、0.522×10~5个和1.171×10~5个。④攻虫后各组死亡率依次为0、75%、25%、25%和50%。⑤抗球虫指数(ACI),5个组依次为200.0、88.0、166.9、148.5和120.0。总的来看,免疫鸡群对大剂量卵囊攻击有较强的抵抗力,其中免疫1组结果良好,免疫2组和3组结果尚不理想,因此,LCV-2免疫1组的剂量(1头份卵囊/只)为优选剂量。     

猪囊尾蚴dUTPase的同源建模及分析

通过SWISS-MODEL服务器对猪囊尾蚴dUTPase（Cysticercus cellulosae dUTPase，CYdUT-Pase）进行同源建模，用SPDBV和DSViewer对模型进行修饰，模型经WHATIF服务器进行质量评估。对已知dUTPase的晶体结构分析后，推测CYdUTPase属于同源三聚体，通过SymmDock服务器进行CYdUTPase三聚物的分子对接，并与人dUTPase3D结构叠合。结果表明，建立的CYdUTPase3D模型是成功的，具有良好的真实性，CYdUTPase三级结构的预测为此酶的结构功能研究和新型抗囊虫药物的开发奠定了基础。     

口蹄疫病毒非结构蛋白2C基因主要表位区的表达及活性检测

根据测定的口蹄疫病毒（FMDV）2C基因序列,设计了一对特异性的表达引物,用于扩增2C基因5′-端174bp和3′-端279 bp连接片段,该区含有较丰富的B细胞表位编码序列。扩增片段通过NcoⅠ和SalⅠ酶切位点插入表达载体pET-30a。序列测定表明,目的基因片段连接正确,按正确的读码框插入表达载体中。重组表达质粒转化BL21（DE3）pLys,经IPTG诱导表达目的蛋白。表达产物经SDS-PAGE和Western Blotting检测表明,2C基因主要表位区成功地在大肠杆菌表达,表达产物为约23 ku的融合蛋白,能够与FMDV感染动物血清发生特异性反应,而不与健康和灭活疫苗免疫动物血清反应。该研究为建立鉴别FMDV自然感染动物和灭活疫苗免疫动物的酶联免疫转印（EITB）方法提供了所需的材料。     

口蹄疫病毒受体牛源β1亚基基因的分子特征

从口蹄疫病毒试验感染康复牛肺组织中克隆了β1亚基基因,并对其核苷酸和推导氨基酸序列进行了比较分析.结果显示,牛β1亚基基因的编码区含有2 397个核苷酸,编码798个氨基酸,含有10个潜在的糖基化位点,其中信号肽由20个氨基酸组成,胞外域由708个氨基酸组成,跨膜区由29个氨基酸组成,胞浆域由41个氨基酸组成.与GenBank中的牛β1基因的同源性达99.5%,从起始密码子开始共有12个碱基发生了变化,引起第217、247、268、281、321、691、709位的氨基酸改变,分别由F、S、W、V、H、Y、V变为S、P、R、G、Y、C、G.牛β1基因与猪、猩猩、猫、犬、人、小鼠和鸡的β1基因核苷酸序列同源性分别为93.8%、89.3%、91.6%、90.2%、89.6%、85.4%、75.6%,推导氨基酸序列同源性分别为98.2%、93.7%、97.5%、96.7%、94.2%、93.2%、84.1%.牛与猪β1亚基同源性最高.     

长管道效应对大高度作业平台调平性能的影响

【目的】为改善高空作业平台的调平性能,研究长管道效应对调平性能的影响.【方法】通过建立长管道模型,分析了影响调平性能的管道参数,并结合长管道作用下的调平系统仿真模型,分别研究管道材质、长度、直径及布管方式对调平性能的影响规律.【结果】硬管材质能够较软管材质使系统响应时间缩短0.4~0.6s;管道长度由1m增加至40m可使系统响应时间由0.05s延长至0.3s,压力损失由0.6bar增大至24.8bar;管道直径由5mm增大至20mm,使调平稳定时间由1.1s延长至2.2s,压力损失由69.9bar减小至1.7bar;阀前布管较阀后布管加快系统响应时间约0.2s,但易引起压力冲击.【结论】长管道效应对高空作业平台调平性能的影响显著,长管道参数化分析形成调平系统的优化布置及参数选择原则,对高空作业平台的调平性能改善提供了参考.     

猪带绦虫新基因SLC10的研究

【目的】克隆和表达猪囊尾蚴SLC10基因,明确其组织分布,为寻找猪囊虫病的新型疫苗或诊断候选基因奠定基础。【方法】以绦虫保守的反式剪接引导序列为基础,通过RT-PCR从猪囊尾蚴中克隆出来的一个未知基因,将其在大肠杆菌中表达,用亲和层析纯化的重组蛋白作为包被抗原进行ELISA检测和免疫组织化学试验。【结果】将新基因命名为SLC10,其ORF为507 bp,编码18.2 kD的蛋白,基因组全长1 107 bp,由两个外显子和一个内含子组成。ELISA结果显示70份囊尾蚴阴性血清和75份囊尾蚴阳性血清都不与重组蛋白发生反应,免疫组织化学实验表明SLC10天然蛋白主要分布在除猪囊尾蚴头节以外的囊壁内部。【结论】SLC10蛋白为非分泌型结构蛋白,与诱导宿主产生抵抗囊尾蚴感染的体液免疫应答无关。