出血性大肠杆菌O157eae-stx1/2B融合基因的构建和表达

构建表达eae和stx1／2B的融合基因，克隆eae基因的C端280个氨基酸残基(Int280)基因部分，以正确地阅读框定向插入到含有stx1／2B融合基因的质粒，构建重组质粒，将其转化于BL21(DE3)，用IPTG进行诱导表达，经SDS—PAGE电泳检测，该融合蛋白获得了高效表达。薄层扫描分析表明：目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的50．67％。由于该融合蛋白由eae、stx1B、stx2B等三部分抗原组成，可刺激机体产生针对紧密素和StxB的抗体，在EHEC O157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值。     

牛得喜对奶牛生产性能的影响

实验研究了奶牛日粮中添加牛得喜(SCCNCMl077)对奶牛生产性能的的影响。实验选用了50头奶牛,根据产奶量、泌乳天数和胎次相近的原则分为试验组和对照组。试验结果表明,试验组平均产奶量比对照组提高了1.52kg,差异显著(P<0.05),而试验组乳脂率、乳蛋白率分别下降了0.09%、0.07%,但均差异不显著(P>0.05)。     

猪伪狂犬病病毒SYBR-Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立

根据GenBank中猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的序列(EF552427),设计并合成1对引物.通过常规PCR扩增猪伪狂犬病病毒gE基因,将鉴定正确的gE基因片段克隆入pTG19-T载体中,转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒.以该阳性重组质粒为作为模板建立SYBR-Green Ⅰ荧光定量PCR标准曲线和溶解曲线,并做灵敏性试验、特异性试验和重复性试验.结果表明,标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶解曲线特异,相关系数为0.999 9,最低检测的拷贝教为35.4拷贝/25 μL,比常规PCR高10倍,特异性和重复性较好并能对样品进行定量检测等优点.本研究成功的建立了检测猪伪狂犬病病毒的SYBR-Green Ⅰ荧光定量PCR方法,为该病的早期诊断及定量分析猪伪狂犬病病毒感染程度奠定了基础.     

四川省一些实验动物养殖场SPF大鼠和小鼠肠内容物中金黄色葡萄球菌的检测

调查四川省一些实验动物养殖场的实验动物中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)携带情况,找出传播途径和进化规律,分析其污染原因,为保障实验动物质量提供技术支撑。按照GB/T 14926.14-2001《实验动物金黄色葡萄球菌检测方法》对2011年-2017年四川省部分实验动物中SA进行检测,对分离的SA菌株进行PCR耐药基因mecA检测,并应用金黄色葡萄球菌A蛋白(Staphylococcus protein A,SPA)和脉冲场电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)进行分子分型。结果显示,2011年-2017年共从7家实验动物养殖场采集并完成370只实验动物中SA的检测,共检出SA 31株,总分离率为12.16%,且均从SPF大鼠中分离所得。31株SA的mecA基因均为阴性。SPA可分成5个型别,其中T2360为优势型别,PFGE型别有10个带型。四川省养殖实验动物中仅SPF大鼠携带SA,不同年份检出SA基因型别基本不同,不同养殖场同一年检出的SA具有相同基因型,说明不同养殖场中的SA可能来自同一污染源,应加强SPF大鼠监控,以确保实验动物的质量。     

一例牙鲆淋巴囊肿病例的诊断及病毒MCP基因遗传进化分析

2019年1月,山东省某牙鲆鱼场出现疑似淋巴囊肿病例。患病鱼体表长有灰白色菜花样瘤状物,死亡率超过30%,给养殖场造成了较为严重的经济损失。为确定发病原因,对该鱼场病死鱼进行了病理组织学诊断和病毒检测,并对病毒MCP基因进行了序列测定及遗传变异分析。结果显示：眼观及组织学病变符合淋巴囊肿病的病变特征;所检测到的病毒与选定的参考毒株核苷酸和氨基酸同源性分别为78.7%~99.9%和86.8%~100%。MCP基因遗传进化分析显示,检测到的病毒与LCDV-C、JF00Kuma、JF03Yoshi、JF03GunNeA、JF、LCDV-K1等毒株同属于淋巴囊肿病毒基因II型,且与我国分离株LCDV-C有较高的同源性。经综合诊断,确定该流行病由淋巴囊肿病毒基因II型所致。该研究为该病的综合诊断及流行病学调查提供了新资料,为下一步进行该病毒相关分子生物学研究以及疫苗制备等提供了理论依据。     

生物安全三级实验室生物安全风险点的识别与控制?

BSL-3实验室须经国家生物安全认可和严格的实验活动审批才能开展相应活动,是国家(地区)开展高致病性病原微生物实验活动的重要技术支撑平台。实验室生物安全风险点易发生在样本及菌毒种的接收、传递和保存,动物实验,污水以及固体废弃物处理等环节,而实验室的意外事件(电力故障、火灾、积水等)与生物安保漏洞也会造成重大的生物安全事故。提示应准确地识别风险并通过人员日常监管、标准操作规程、两级屏障设施和个人防护装备等系列措施对生物安全风险点予以严格控制。     

中药抗病毒性疫病作用机制研究进展

病毒性疫病作为一类具有高度传染性的疾病,目前尚缺乏理想的抗病毒药物,而中药因其独特的病毒病防治视角,成为近年来我国学者们研究的热点。研究显示,多种中药及其有效成分对病毒有一定的抑制作用。本文结合病毒性疫病发病机理与近年来抗病毒中药研究成果,对中药的抗病毒机制进行阐述,以期为多方位、多靶点、天然低毒兽医临床抗病毒药物的研发提供帮助。     

Effects of the Ratio of n-6:n-3 Polyunsaturated Fatty Acids in the Maternal Diet on Immunoglobulins, Fatty Acid Composition, and Performance of Lactating Sows and Suckling Piglets under Conditions of Low Maternal Energy Intake

This experiment was conducted to investigate the effects of different ratios of n-6:n-3 polyunsaturated fatty acids (PUFA) in sow diets on the performance of lactating sows and their piglets at low digestible energy intakes.Twenty-one pregnant Landrace sows were assigned to one of three diets from day 108 of gestation until weaning (26 to 29 d),containing n-6∶n-3 PUFA ratios of 3∶1,8∶1 and 11∶1.The effects on sow and litter production traits and on sow body condition were examined.There were no differences among treatments in daily feed intakes or in changes in sow weight and back-fat levels during lactation.Litter size,litter weight at birth and weaning and litter average daily weight gain were also unaffected by treatment.As expected,large differences were observed in n-6 and n-3 fatty acids in the colostrum and plasma of sows and piglets (P ＜ 0.01 ).The ratio of n-6∶n-3 PUFA the diet was positively correlated with those in colostrum,sow plasma and piglet plasma ( R2 =0.55,0.80 and 0.80,respectively).Sow plasma insulin and IGF-I levels at weaning were unaffected by the treatments.Plasma leptin ( P ＜ 0.05) concentrations were increased in sows fed the diet with a n-6∶ n-3 ratio of 8∶1.Immunoglobulin concentrations in colostrum were not altered by dietary treatment.Plasma IgG concentrations at d 14 were highest in piglets from sows fed the 8∶1 ratio of n-6∶n-3.Furthermore,this group had the highest IgA concentrations at day 21 of lactation compared with the other two groups ( P ＜ 0.05 ).In summary,our study demonstrated that at low digestible energy levels,altering the ratio of n-6∶n-3 PUFA in the diets for lactating sows affected immune components and the fatty acid composition of lactating sows and their piglets.Further studies are needed to examine whether higher levels of fat supplementation than those used in the present study ( 1.5％ ) can successfully enhance performance.     

检测流感病毒的商业PCR试剂盒比对验证

利用8种不同流感病毒株及其核酸,结合自然感染组织样品与人工混合样,验证比较了8种商业PCR试剂盒的质量参数。结果表明,3号荧光PCR试剂盒漏检1株外,其他试剂盒均可以检测8种毒株,对其他类似病毒如猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪细小病毒和猪环状病毒核酸等无交叉反应,最高可检测到10-7稀释的目标核酸,重复性与再现性均为理想,在有效期内检测结果没有发生变化。     

贵州省羊口疮病例分子生物学诊断

为了更好地鉴别诊断疑似羊口疮病例,采用PCR技术、分子克隆技术和生物信息技术对毕节地区羊口疮疑似病例进行实验室诊断。结果显示,从疑似病例组织病料中扩增出与预期大小相符的1137bp的B2L基因片断,且该基因核苷酸同源性与GenBank中已发表羊口疮病毒序列间的同源性为97．1％～99．1％。试验结果表明,该病例为羊口疮...