滑液支原体WVU1853株热不稳定延伸因子的表达及黏附特性分析

旨在探究滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)热不稳定延伸因子(elongation factor thermo unstable,EF-Tu)的黏附特性.参照GenBank中MS WVU1853株EF-Tu序列,设计引物对Tu-F/Tu-R,利用PCR扩增获得MS EF-Tu基因后,将其克隆入pE...     

副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5的B细胞抗原表位鉴定

副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5能诱导机体产生免疫保护反应,同时可以用于特异性的血清学诊断,本试验选取P5蛋白进行抗原表位鉴定。首先通过PCR扩增P5F1（1～204aa）,P5F2（170～296aa）及P5F3（280～371aa）3个片段,PCR产物分别定向克隆到表达载体pET32a（＋）中表达纯化。根据ELISA和Western blotting结果确定P5F3片段（280—371aa）是OmpP5的免疫优势决定区。为了进-步对该免疫优势决定区进行抗原表住鉴定,设计了-套11个部分重叠的短肽,这些短肽覆盖全部280～371aa片段。每-个短肽合成1对寡核苷酸链,退火后插入表达载体pGEX-6p-1,与GST进行融合表达。用HPS阳性血清进行ELISA和Western blotting扫描,鉴定出其表位位于”。TGNTCDAVKGRKALIT351。通过序列分析证实该抗原表位在不同的HPS菌株中高度保守。本试验确定了位于HPSOmpP5上的-个抗原表位,为建立-种方便、快捷、适用于现地大规模样品检测的鉴别诊断方法奠定了基础,同时也为HPS新型亚单位疫苗的研制,以及研究病原茵感染和机体免疫过程中P5蛋白与宿主体内相应分子之间的相互作用提供了有用信息。     

昆明犬胎儿成纤维细胞系的建立及生物学特性分析

本研究旨在探索和建立昆明犬胎儿成纤维细胞体外分离、培养的技术方法并观察其生物学特性.试验利用剖腹手术法获得发育30 d的昆明犬胎儿12个,性别鉴定结果为7公5母.公、母胎儿体尺和体重分别为:体长1.90 cm±0.14 cm和2.00 cm±0.05 cm,体宽0.90 cm±0.13 cm和0.90 cm±0.15 cm;体重0.68 g±0.17 g和0.66 g±0.06 g,差异均不显著(P>0.05).以昆明犬胎儿组织为材料,采用胶原酶消化法和细胞冷冻保存技术建立了昆明犬胎儿成纤维细胞系,并对所构建的细胞系进行生物学特性研究.结果表明,分离的胎儿成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态,生长曲线呈S型,倍增时间约为36 h;冻存前和复苏后的存活率分别为96.1%和94.6%;染色体核型分析显示2n=78(XY),并在体外培养多代后仍能保持正常核型.本研究建立的昆明犬胎儿成纤维细胞系可在体外快速贴壁生长、增殖,进行稳定培养,这不仅使昆明犬遗传资源在细胞水平得以保存,且所获成纤维细胞能作为相关研究中所需细胞的来源.     

禽流感血清抗体与卵黄抗体消长规律比较研究

应用禽流感病毒二价（H5、H9）油乳剂灭活疫苗免疫160日龄非免疫蛋鸡，免疫接种后分别于第0、7、14、21、28、35 d采集相应的鸡蛋和血清，采用血凝抑制(HI)试验监测血清及卵黄中H5、H9抗体的消长规律，结果表明：H5、H9血清抗体于免疫后7 d时开始产生，14 d时到中等水平，21 d时达到最高值，一直维持到35 d之后；而H5、H9卵黄抗体与血清抗体水平相比相对滞后7 d左右；卵黄抗体与血清抗体在28 d时均达到高峰值并一直维持到35 d之后，28 d后血清和卵黄抗体达到相同水平。本研究为临床上以禽流感卵黄抗体检测替代血清抗体检测及以后禽流感高免卵黄抗体的研究提供了依据和数据。     

不同播种方式对岷山红三叶草产量的影响

通过在海拔2 450 m的岷县南部高寒阴湿地区进行岷山红三叶Trifolium pratense cv.Minshan干草丰产栽培试验,得到以下结论：条播为岷山红三叶进行干草生产的最佳播种方式,行距以20 cm最为理想,该行距下生长速度快,而且产草量最高。播种当年A组（行距20 cm）鲜草产量比对照组(撒播)高出4 987.5 kg/hm2,是对照组的1.27倍,差异极显著（P＜0.01）;A组鲜草产量比B组（行距40 cm）高101 kg/hm2,差异显著（P<0.05）。生长第2年,A组鲜草产量均高于对照组和B组,是对照组的1.16倍,差异极显著（P＜0.01）,是B组的1.02倍,差异显著（P＜0.05）。不同播种方式对岷山红三叶鲜干比无影响。     

鸭疫里默氏杆菌GroEL蛋白的原核表达和单克隆抗体制备

本试验旨在研制鸭疫里默氏杆菌GroEL蛋白的单克隆抗体。将鸭疫里默氏杆菌WJ4菌株的groEL基因进行原核表达,重组蛋白经过纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠。经过3次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,用间接ELISA筛选阳性细胞株并进行3次亚克隆后制备小鼠腹水单克隆抗体。共获得2株稳定分泌鸭疫里默氏杆菌GroEL单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1G2B6和1G2F10。2株单克隆抗体均为IgG1亚类。腹水单克隆抗体ELISA效价达到1:102 400。Western blot检测结果表明2株单克隆抗体均能与鸭疫里默氏杆菌血清1、2和10型菌株发生特异性结合,而与禽致病性大肠杆菌、沙门氏菌和禽巴氏杆菌菌株无反应性。本研究成功制备了稳定性好、特异性强的鸭疫里默氏杆菌GroEL单克隆抗体,为进一步研制基于抗体检测鸭疫里默氏杆菌抗原的试剂盒奠定了基础。     

饲粮添加大豆磷脂对产蛋鸡生产性能和鸡蛋磷脂含量的影响

本试验旨在研究饲粮中添加大豆磷脂(SL)对产蛋鸡生产性能和鸡蛋磷脂含量的影响.选用360只22周龄健康产蛋鸡,随机分为5个处理,每个处理6个重复,每个重复12只鸡.5种试验饲粮中分别添加0、0.5%、1.0%、2.0%和4.0%的SL.试验期4周.试验结果表明:1)0.5%SL组平均蛋重最大(P>0.05),1.0%SL组平均日采食量最低(P>0.05),1.0%和2.0%SL组的料蛋比较低(P>0.05),均显著低于对照组(P<0.05),产蛋率以0.5%组最高(P>0.05),即饲粮中添加0.5%～2.0%的SL可改善产蛋鸡的生产性能;2)饲粮添加SL可以降低鸡蛋蛋黄水分含量(约1.7个百分点)(P>0.05)、1.0%、2.0%和4.0%SL组的蛋黄粗脂肪含量显著高于对照组(P<0.05);1.0%、2.0%和4.0%SL组全蛋中总磷脂显著高于对照组(P<0.05),1.0%和2.0%SL组蛋黄中总磷脂含量显著高于对照组(P<0.05),同时蛋黄胆固醇含量略有增加(P>0.05);1.0%、2.0%和4.0%SL组蛋黄和全蛋中磷脂酰胆碱(PC)含量显著高于对照组(P<0.05);2.0%SL组磷脂酰乙醇胺(PE)最高,但各组间差异不显著(P>0.05);PC/PE随饲粮SL添加量的增加而线性升高,0.5%、1.0%和2.0%SL组均显著高于对照组(P<0.05),4.0%SL组显著高于其他组(P<0.05).结果提示,饲粮添加一定水平的SL可改善产蛋鸡的生产性能,提高鸡蛋中总磷脂和PC含量.     

猴源环孢子虫巢式PCR检测方法的建立

环孢子虫是一类可引起人和动物腹泻的重要寄生性原虫。为建立猴源环孢子虫的巢式PCR检测方法,根据该环孢子虫18S rDNA基因序列,设计一对保守引物N18SA/N18SS和一对特异性引物CYJS/CYJA,通过阳性质粒摸索该检测方法的最佳反应条件,进行特异性和敏感性试验,并应用该方法对87份猴粪样本进行了临床检测。结果显示该巢式PCR能特异性地扩增出猴源环孢子虫目的片段,与微小隐孢子虫、阿米巴原虫等8种DNA无交叉反应,最低能检测0.2 fg的阳性质粒DNA,对临床样本的检出率比传统方法(饱和蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法)提高2.3%~3.4%。可见,该巢式PCR方法具有较高的特异性和敏感性,对于环孢子虫病的诊断和分子流行病学调查具有重要的应用价值。     

兔粪堆肥技术初步研究

试验旨在研究兔粪堆肥过程中的参数变化,为规模化兔场兔粪堆肥处理提供技术储备。以兔粪和稻草为原料进行室内堆肥,设置兔粪-稻草组、兔粪-稻草翻堆组和兔粪组,在为期55d的堆肥过程中,测定了各堆体温度、水分、酸碱度(pH)、总有机碳(TOC)、总氮(TN)、总磷(TP)、总钾(TK)、大肠杆菌和种子发芽指数(GI)随时间的变化。结果表明:在堆肥过程中,各组高温期温度均能维持5 d以上,能达到了粪便无害化卫生标准的要求,兔粪-稻草翻堆组高温阶段持续时间最长;各组有机质相对含量总体呈上升趋势,堆肥结束时,有机质均稳定在35%以上;TP和TK总体呈上升趋势;高温期时大肠杆菌数均为0,但随着温度的降低,又出现了少量的大肠杆菌;种子发芽指数总体呈上升趋势,堆肥37d后均能达到腐熟标准。由此可见,生产中对兔粪进行处理,既可以单独利用兔粪进行堆肥,也可以采用兔粪和稻草按7.4∶1的比例进行混合堆肥。     

鸡骨型白血病免疫琼扩与放射摄片诊断的比较

为了探索特异性免疫学诊断方法对鸡骨型白血病(OP)的检测效果。用双盲法分批采样同时进行羽髓琼脂扩散试验和胫骨X线摄片检查对比,共检834只鸡(433羽属天然自发OP鸡群,401羽属人工诱发实验鸡群)。结果羽髓琼扩试验的OP阳性检出率为3．48％(29／834：)。阳性病理符合率为75．86％(22／29)。阳性误诊(假阳性)率24．13％(7／29),阴性误诊(假阴性)率36．15％(291／805)。而X线摄片检查的OP阳性检出率为38．37％(320／834)。X线阳性完全可获病理组织学证实,不存在假阳性或假阴性。把禽白血病羽髓琼扩试验试用于检测鸡骨型白血病尚属初次报道,其阳性检出率低而误诊率高,尚不宜作OP检测手段。放射摄片诊断的阳性检出率高而误诊率低,可快速诊断,故适用于OP检疫。