基于dnaJ基因的弧菌PCR检测方法

[目的]建立一种能扩增dnaJ基因全长的PCR检测方法,为弧菌的快速筛查及种类鉴定提供技术支持.[方法]以弧菌dnaJ基因为靶基因,在其首尾的保守区域设计一对简并引物,经优化退火温度和引物浓度,建立能扩增弧菌接近全长dnaJ基因的PCR检测方法,并通过特异性试验、灵敏度试验和临床应用评价等验证其适用性.[结果]优化后的PCR反应体系50.0 μL:2×F8 FastLong PCR MasterMix 25.0 μL,上、下游引物(20 μmol/L)各2.0 μL,DNA模板5.0 μL,灭菌水补足至50.0 μL.扩增程序:94℃预变性3 min;94℃ 10 s,55℃ 15 s,72℃ 15 s,进行35个循环;最后72℃延伸5 min.该PCR检测方法对副溶血弧菌、哈氏弧菌、创伤弧菌、河流弧菌、溶藻弧菌、拟态弧菌、霍乱弧菌和栖黑海弧菌等8种弧菌属细菌具有很强的特异性,对弧菌的最低检出限为102CFU/mL.应用建立的PCR检测方法对51株分离自海水样品的弧菌和32株分离自对虾样品的弧菌进行检测,结果显示全部为阳性,其中,海水样品中包括有副溶血弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌、河流弧菌、哈氏弧菌和栖黑海弧菌,对虾样品中包括副溶血弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌、河流弧菌和哈氏弧菌;经测序及同源性比对分析发现,种间菌株的dnaJ基因序列相似度为79.5%~92.8%,种内菌株间的dnaJ基因序列相似度为98.2%~99.9%.[结论]基于dnaJ基因建立的弧菌PCR检测方法能扩增出弧菌接近全长dnaJ基因,具有快速便捷、灵敏准确、适应性好等优点,结合测序技术,可为弧菌快速筛查及种类鉴定提供更全面和更准确的技术手段.     

种植密度和施氮量对有机烟叶农艺性状及产质量的影响

为探索有机烟叶生产的合理施氮量和密度,于2009年在凤冈县进化镇进行了不同密度及施氮量对有机烟叶产质量的影响试验。结果表明:1)不同密度及施氮量对有机烟叶大田生育期影响不明显。2)施氮量82.5kg/hm2、种植密度18 000株/hm2能获得最大的产值和产量,且田间长势、上等烟率、上中等烟率、橘黄烟率和内在化学成分协调性较好。3)综合表现最好的是施氮量82.5kg/hm2、种植密度18 000株/hm2的处理,其次是施氮量67.5kg/hm2、种植密度18 000株/hm2的处理。     

杜仲提取物对三黄鸡生产性能和胴体品质的影响

为探明杜仲提取物在肉鸡日粮中的适宜添加量,选用1日龄健康三黄鸡150只,随机分为5组,每组3个重复,分别饲喂5种不同日粮,第5组为空白对照组,第1,2,3,4组为试验组,在基础日粮中分别添加1500,2000,2500g／t的杜仲提取物或50mg／kg的黄霉素（效价为8％）．试验分两个阶段饲养（0-4周龄和5～10周龄）．试鸡自由采食和饮水．结果表明,日粮中添加杜仲提取物能显著提高三黄鸡平均日增重,提高饲料转化率,改善三黄鸡胴体品质,且能明显提高胸肌率．建议在肉鸡日粮中添加2000-2500g／t的杜仲提取物．     

企业最优资本结构研究

资本结构是指企业各种长期资金筹集来源的构成及其比例关系,资本结构是财务管理和实践中的一个极其重要的问题,也是企业筹资决策的核心问题。本文分析了影响企业最优资本结构的因素,提出了确定最优资本结构的方法,并对优化企业资本结构提出了对策。     

木瓜属植物果实中有效成分含量测定

对74份木瓜属种质资源果实的绿原酸、齐墩果酸、熊果酸和总黄酮等有效成分含量进行了测定,结果表明:光皮木瓜中未检测到绿原酸,齐墩果酸和熊果酸含量分别为0.106～0.108 mg/g、0.694～0.840mg/g,总黄酮含量为16.135～28.182 mg/g;日本木瓜绿原酸含量为0.117～1.694 mg/g,齐墩果酸和熊果酸含量分别为0.441～0.911 mg/g、0.366～0.487 mg/g,总黄酮含量为16.424～19.804 mg/g;皱皮木瓜绿原酸含量为0.096～2.746 mg/g,齐墩果酸和熊果酸含量分别为0.360～1.836 mg/g、0.110～1.604 mg/g,总黄酮含量为6.661～40.839 mg/g;毛叶木瓜绿原酸含量为0.297～4.017 mg/g,齐墩果酸和熊果酸含量分别为0.311～1.520 mg/g、0.031～1.345 mg/g,总黄酮含量为8.428～39.517 mg/g。     

桐粕中醇溶性毒素分离纯化及其性质

为了开拓植物蛋白质饲料资源 ,对桐粕中的醇溶性毒素进行了探讨 .桐籽去油后经有机溶剂提取得到醇溶性毒素 ,再经苯 +正己烷 (3∶ 2 ) ,苯 +乙酸乙酯 (3∶ 2 ) ,苯 +乙酸乙酯 (1∶ 1) ,苯 +乙酸乙酯 (1∶ 3)等 4种洗脱剂能分离出 TN1,TN2 ,TN 3等 3种毒素 ,其 Rf分别是 :0 .0 90 ,0 .30 1,0 .494(展开剂为 :苯 +正己烷 (3∶ 2 ) ) .其中醇溶性毒素和 TN3对试验鱼有明显的毒性 ;2 4h L D50 分别为 :0 .192 ,2 .75 4μg/m L ,48h L D50 分别为 :2 .495 ,0 .187μg/m L .TN1为浅黄色不结晶物 ,UVλMeohmax nm (E1 %1 cm) :2 10 (93.0 2 ) ,2 5 0 (4 9.0 5 ) ,2 90 (73.2 6 ) ,其旋光度为 0°;TN2为白色不结晶物 ,UVλMeohmax nm (E1 %1 cm) :2 10 (6 6 .36 ) ,2 5 0 (2 7.0 7) ,2 80 (6 2 .2 7) ,其旋光度为 49.10°;TN 3为白色不结晶物 ,U VλMeohmax nm(E1 %1 cm) :2 10 (72 .6 9) ,2 5 0 (31.92 ) ,2 90 (4 9.38) ,其旋光度为 6 7.43°.     

高产杂交玉米品种金玉306的选育

金玉306是贵州省旱粮研究所2000年以自交系106作母本,自交系T32作父本杂交选育的高产品种。2001～2005年经所内比较试验、区域试验及生产试验,结果表明抗病性强、适应性广、高产、稳产、商品性好。2006年经贵州省品种委员会审定,定名为金玉306。     

生防菌剂灭线灵防治烟草根结线虫研究

根结线虫病是西南地区烟草重要病害之一,发生危害与植烟土壤中线虫含量,土壤湿度密切相关,利用生防菌剂灭线灵防治烟草根结线虫病,重病区每株施用量2.5 g,轻病区1.5～2 g,施用方法以移栽前拌营养土塘施为优,防效在61 %左右.     

青梅主要病虫害的发生及防治

近年来随着广东青梅种植规模扩大和商品化生产深入,病虫害问题逐渐突出。通过对青梅果园病虫害的调查研究以及防治试验,初步掌握了广东省青梅主要病虫害的发生与流行规律,并总结出有效的防治技术,为青梅种植业的健康发展提供参考。