鸡贫血病病毒套式PCR检测方法的建立及应用

鸡贫血病病毒不仅引起鸡的传染性贫血 ,而且也是引起鸡免疫抑制病的主要病原。本研究首次在国内建立了鸡贫血病病毒的套式PCR检测方法。试验证明此方法具有高度的特异性和敏感性 ,以鸡马立克氏病毒、鸡网状内皮组织增生病毒、鸡传染性法氏囊病毒、正常MDCC_MSB1细胞DNA作为模板扩增时均未出现可见带 ,在检测鸡的各种组织病料时均未出现假阳性结果 ,该法比一次性PCR的敏感性高约 1 0 0 0倍 ,能检测到约一个拷贝的鸡贫血病病毒DNA ,而一次性PCR只能检测到3.6× 1 0 3 个拷贝。此方法已成功地应用于临床试验。对于鸡贫血病毒的许多鸡胚分离物和细胞分离物 ,一次性PCR不能扩增出可见电泳条带 ,而套式PCR都能扩增出特异的DNA片段 ,从而说明 ,套式PCR的敏感性大大高于一次性PCR ,可消除一次性PCR产生的假阴性结果     

日粮添加酵母硒对蛋鸡血清生化指标的影响

本试验在蛋鸡日粮中添加不同浓度的酵母硒,测定蛋鸡血清生化指标,旨在探究酵母硒对蛋鸡肝脏功能的影响。结果表明:日粮添加酵母硒对蛋鸡血清谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、总胆红素(Total bilirubin,TBIL)无显著影响;日粮添加酵母硒显著降低了血清总胆固醇(Total cholesterol,TC)含量,其中0.80 mg/kg的酵母硒效果最好,第28天比对照组下降了38.06%。认为日粮添加酵母硒没有对蛋鸡肝脏功能产生不良影响,且有保护心血管的作用。     

鸡贫血病毒荷兰弱毒株基因序列比较研究

用ＣＡ５、ＣＡ６和ＣＡ７、ＣＡ８两对引物对鸡贫血病毒荷兰弱毒株进行ＰＣＲ扩增。将扩增产物１．５ｋｂ和０．８ｋｂ的ＤＮＡ片段分别克隆到ＰＵＣ１１９、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ载体质粒中,并进行核苷酸序列分析。通过与２６Ｐ４毒株进行核苷酸序列比较发现二者有３２个核苷酸的差异。荷兰和２６Ｐ４两毒株间ＶＰＩ蛋白质同源率为９７％,没有发生特异性变化;ＶＰ３蛋白质同源率为９５％,在Ｉ￣３０个氨基酸之间发生了特异性     

兽用白花蛇舌草黄酮注射液澄清工艺研究

为研究兽用白花蛇舌草黄酮注射液的澄清工艺,试验采用石硫法和壳聚糖絮凝法制备兽用白花蛇舌草黄酮注射液,通过定性鉴别、黄酮含量测定及注射液有关物质检查,比较两种工艺的澄清效果。结果表明,用壳聚糖絮凝法制作的白花蛇舌草黄酮注射液含量高,但鞣质、树脂检查不合格;石硫法澄清白花蛇舌草黄酮注射液效果较好。     

金石翁芍散对仔猪大肠杆菌病治疗试验

为了评价金石翁芍散对仔猪大肠杆菌病的临床疗效,设立金石翁芍散高、中、低3个剂量组及药物对照组,通过混饲给药方式治疗仔猪大肠杆菌病,进行临床治疗效果比较。结果表明,金石翁芍散对仔猪大肠杆菌病有较好的治疗效果,高剂量组治愈率为91.6%,总有效率为94.4%;中剂量治愈率为88.9%,总有效率为94.4%;低剂量组治愈率为72.2%,总有效率为77.8%。高剂量组、中剂量组在降低死亡率、提高治愈率等方面均优于恩诺沙星可溶性粉（治愈率为72.2%,总有效率为77.8%）。低剂量组的治疗效果低于高、中剂量组;中、高剂量组死亡率、治愈率和总有效率均无显著性差异。     

一株山羊支原体山羊肺炎亚种的分离鉴定与分子特征

从送检的山羊肺炎肺脏中成功分离到一株支原体，经过3次克隆纯化后进行生化试验、电镜观察、PCR及酶切、基因特征鉴定，结果显示分离物SD3属于山羊支原体山羊肺炎亚种成员。将培养物经气管接种2只山羊可引起1只山羊典型发病，体温升高至41．5℃，IgG和IgM抗体效价明显升高，其中IgG抗体变化与临床表现基本同步。剖检发现肺脏发生严重病变，并从中再次分离到该病原体。     

H1N2亚型猪流感病毒A／Swine／Guangdong／1／06分离鉴定和对猪致病性研究

2006年5月从广东某大型猪场采集具有流感症状保育猪鼻拭子共98份,无菌常规处理猪鼻拭子后接种MDCK细胞,分离到4株流感病毒.用血凝抑制和PCR方法鉴定均为H1N2亚型.挑选其中一株A/Swine/Guangdong/1/06(H1N2),进行全基因组测序,并与GenBank中相关序列进行比较.核苷酸同源性分析表明:A/Swine/Guangdong/1/06(HIN2)与A/Swine/Guangxi/13/06不同基因之间同源性为96.6%～98.1%.以106EID50的剂量,将H1N2病毒鼻腔感染35日龄仔猪,结果表明H1N2亚型流感病毒可以感染猪上呼吸道.但不表现临床症状.本研究结果对于揭示H1N2亚型猪流感流行规律和病毒的致病机理具有一定的意义.     

从江县鲤爆发性死亡病例实验室诊断

2018年10月贵州省从江县某水产养殖专业合作社鲤爆发死亡,本研究对死亡病例进行了流行病学调查、病理学观察、寄生虫学检查、细菌分离鉴定和病毒PCR检测等诊断。结果显示:病鲤病变以鳃丝溃烂、体表出血、肛门红肿和眼球凹陷为主要特征,组织的主要病变是肾小球萎缩出血、肾小囊空腔、鳃丝肿胀粘连及上皮细胞脱落等;细菌分离培养可得到圆形凸起、表面光滑的灰白色菌落,经染色镜检、生理生化鉴定和16S rRNA基因测序分析,鉴定该分离菌为嗜水气单胞菌;PCR检测显示鲤浮肿病毒(Carp edema virus,CEV)为阳性,未检出鲤春病毒血症病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)和鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV);显微镜观察亦未见到寄生虫虫体;分别取分离菌和鲤浮肿病毒阳性病例组织悬液进行人工感染试验,均可引起健康鲤发生死亡。上述结果表明,从江县鲤的死亡是嗜水气单胞菌和鲤浮肿病毒混合感染所致。     

不同处理对西藏牦牛超数排卵的影响研究

本研究选用了埋植CIDR栓法、埋植PRID栓法、PG法以及PMSG+PG法四套方案对西藏41头母牦牛进行了超数排卵试验。试验结果:埋植CIDR法得到的平均卵母细胞数为7.4枚/头,埋植PRID法得到的平均卵母细胞数为6.5枚/头,PG法得到的平均卵母细胞数为4枚/头,PMSG+PG法得到的平均卵母细胞数为4.8枚/头,各组之间差异极显著(P<0.01);而经过卵母细胞成熟培养之后,埋植CIDR法得到的平均可用卵母细胞数为6.2枚/头,埋植PRID法得到的平均可用卵母细胞数也为6.2枚/头,PG法得到的平均可用卵母细胞数为4枚/头,PMSG+PG法得到的平均可用卵母细胞数为4.6枚/头,CIDR+FSH法与PRID+FSH法两组、两次PG法与PMSG+PG法两组差异不显著(P>0.05),但是CIDR+FSH法和PRID+FSH法组与两次PG法和PMSG+PG法组之间差异都极显著(P<0.01);用CIDR法和PRID法进行西藏牦牛超排效果较好,并可获得较多的可用卵母细胞。     

酸化乳对犊牛生长性能和血清免疫指标的影响

本试验旨在研究饲喂酸化乳对犊牛生长性能和血清免疫指标的影响。本试验采用完全随机试验设计,选择3日龄左右、体重(40±5) kg的健康荷斯坦犊牛20头,随机分为2组,即酸化乳组和巴氏杀菌乳组,每组10头。酸化乳组饲喂酸化乳,巴氏杀菌乳组饲喂巴氏杀菌乳,2组均自由采食颗粒料,试验期共180 d,在试验第60天时断奶。每天记录犊牛的采食量,于犊牛生长期的第7、30、60、90、180天分别测量体尺、体重,计算平均日增重,同时采血用于测定血清免疫指标。结果表明:1)酸化乳组乳尿素氮含量极显著高于巴氏杀菌乳组(P<0.01),乳大肠杆菌、总菌数量显著低于巴氏杀菌乳组(P<0.05),乳糖率、乳脂率和乳蛋白率组间差异不显著(P>0.05)。2)第31～50天时,酸化乳组犊牛液体饲料平均日采食量极显著高于巴氏杀菌乳组(P <0.01);第61～90天时,酸化乳组犊牛固体饲料平均日采食量极显著高于巴氏杀菌乳组(P <0.01)。3)第60～180天时,酸化乳组犊牛平均日增重显著高于巴氏杀菌乳组(P <0.05)。第60天时,酸化乳组犊牛体直长、体高和管围均显著高于巴氏杀菌乳组(P<0.05);第90天时,犊牛体直长、体斜长、体高和管围均显著高于巴氏杀菌乳组(P<0.05);第180天时,酸化乳组犊牛体直长、体斜长和体高均极显著高于巴氏杀菌乳组(P<0.01)。4)第60天时,酸化乳组血清免疫球蛋白A(IgA)含量显著高于巴氏杀菌乳组(P<0.05);第90天时,酸化乳组血清免疫球蛋白G(IgG)含量极显著高于巴氏杀菌乳组(P<0.01);第90和180天时,酸化乳组血清免疫球蛋白M(IgM)含量显著高于巴氏杀菌乳组(P<0.05)。第30天时,巴氏杀菌乳组血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量均极显著高于酸化乳组(P<0.01),血清白细胞介素-6(IL-6)含量显著高于酸化乳组(P<0.05);第60天时,巴氏杀菌乳组血清IL-1β含量极显著高于酸化乳组(P<0.01),血清IL-6含量显著高于酸化乳组(P<0.05);第90天时,巴氏杀菌乳组血清IL-1β含量显著高于酸化乳组(P <0. 05)。综上所述,利用甲酸酸化牛乳对牛乳成分影响不大,可抑制牛乳中有害细菌生长,改善适口性,提高犊牛采食量,改善机体免疫力。