猪源牛病毒性腹泻病毒套式PCR检测方法的建立

根据GenBank中BVDV-1、BVDV-2、CSFV及新出现瘟病毒的基因序列,设计2对特异引物,建立了能鉴别诊断BVDV与CSFV的Nested-PCR检测方法;确定其方法的特异性、敏感性、稳定性。建立的Nested-PCR能从BVDV标准毒株、猪源BVDV毒株中扩增198bp特异性片段,对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒检测结果为阴性。结果表明,该方法具有较好特异性;其敏感性可检测到0.195fg RNA模板量;经重复性试验表明该方法具有良好稳定性。初步应用检测表明,猪BVDV阳性率较高,达36.0%;牛血清及其制品、猪瘟活疫苗BVDV污染严重。本试验建立的Nested-PCR具有敏感、特异和稳定等特点,可用于临床诊断和流行病学调查。     

禽大肠杆菌外膜蛋白基因C(ompC)的序列分析

根据 Gen Bank中人源大肠杆菌 K- 12外膜蛋白基因 C(omp C)的核苷酸序列设计引物 ,应用 PCR方法从禽大肠杆菌 O2 、O78株及它们的融合双价弱毒菌株 O2 ,78(Norr Chlr)中分别扩增得到 omp C基因 ,序列测定及分析比较发现 ,3个菌株的 om p C基因均由 170 2 nt组成 ,核苷酸序列完全相同 ,只有 1个大的开放性阅读框 (ORF) ,长 10 92 bp,编码由 36 3个氨基酸组成的前 Om p C蛋白 ,前 2 1个氨基酸残基组成信号肽 ,成熟的 Omp C蛋白由 342个氨基酸残基组成 ,Mr为 4 0 0 0 0。其氨基酸序列也完全相同。从基因水平上证明了禽大肠杆菌 O2 、O78株及融合双价弱毒菌株 O2 ,78(NorrChlr)存在相同的外膜蛋白 C抗原 ,从而为进一步研究 Omp C蛋白的免疫原性奠定了基础     

高黎贡山野生蔬菜资源调查与开发利用研究

对高黎贡山野生蔬菜资源进行了初步调查,分析了野生蔬菜资源开发利用的意义,提出了开发野生蔬菜资源的初步建议。     

有机氮部分替代无机氮对香料烟产量、产值及品质的影响

为了提高香料烟的产量、产值和品质,采用田间小区试验研究了有机氮部分替代无机氮(取代比例分别为0、25%、50%)对香料烟产值及品质的影响。结果表明,有机氮取代部分无机氮对烤烟的产量、产值、上等烟比例和化学成分协调程度及矿质营养元素含量有很大的影响。其中,产量、产值和上等烟比例以有机氮取代50%无机氮处理最高,分别达到2 212.00kg/hm2、53 362.00元/hm2和70.22%。有机氮部分取代无机氮对香料烟叶片中化学成分、矿质元素的影响比较复杂,不同部位叶片以及不同化学成分的响应不同,但总体表现为有机氮取代无机氮改善了烤烟化学成分的协调程度,促进了有益矿质元素的积累。总之,对浙江省绍兴香料烟烟区来说,在施氮水平为105kg/hm2情况下,有机氮取代50%的无机氮时香料烟的经济产量、产值和烟叶品质较好。     

三合激素诱导黄牛发情效果

2003年～2005年应用三合激素对格尔木周边60头产后乏情黄牛进行诱导发情试验,配种60 d后经直肠检查结果表明,注射两次,发情及配种效果明显.     

BMY牛的选育进展

总结了经历20多年选育的BMY牛所取得的进展,再通过3～5年的努力将完成BMY牛的培育,届时BMY牛将是一个适应我国南方炎热地区的热带肉牛新品种.     

新城疫病毒F、NP、M和HN基因在昆虫细胞内的共表达

为构建杆状病毒转移载体，通过PCR的方法将F48E9株新城疫病毒F基因上的StuⅠ位点和NP基因上的XbaⅠ位点进行突变，扩增出全长的F、NP以及F48E9株新城疫病毒M和HN基因片段，将其克隆到pMD18-T载体，再将F、NP、M和HN基因依次亚克隆到杆状病毒转移载体pAeAB4上，F基因和M基因均在p10启动子的操控之下，NP基因和HN基因构建到两个polyhedrin启动子下游，构建重组杆状病毒转移载体pAeAB4-F-NP-M-HN。pAeAB4-F-NP-M-HN与线性化的杆状病毒DNA共转染昆虫细胞Sf9，获得重组杆状病毒rBae-F-NP-M-HN。重组杆状病毒感染Sf9细胞，72h后收集细胞和培养上清。Western blot分析显示：M、NP、F和HN蛋白在培养上清中得到了共表达，大小与预期结果一致；感染细胞内只检测到了HN蛋白的表达。这表明M、NP、F和HN蛋白在昆虫细胞内共表达可以自我装配成病毒样颗粒，并且以出芽的方式释放到培养基中。该重组杆状病毒的获得为研究新城疫病毒各结构蛋白之间的相互作用和确定病毒粒子出芽的驱动力等方面奠定了基础。     

影响牧草再生性的因素分析

对影响牧草再生性的诸因素进行了分析,阐明了牧草再生性对刈割和放牧利用方式的响应,以及刈割和放牧后牧草体内贮藏的碳水化合物和氮素在再生中的变化规律及作用,为草地的放牧利用和刈割提供了理论和技术依据。     

鲜猪肉病原菌污染研究进展

鲜猪肉病原菌污染是引起食源性中毒因素之一,近年来有愈演愈烈趋势。论文从鲜猪肉病原菌污染种类(革兰阳性菌和革兰阴性菌)、污染来源(内源性和外源性)、检测技术(病原学、免疫学、分子生物学和光谱学)和控制措施(源头环节控制、加工环节控制和流通销售环节控制)等四个方面进行了综述,以期为鲜猪肉的卫生安全保障提供参考。     

环介导等温扩增技术快速检测犬细小病毒方法的建立

旨在建立一种利用环介导等温扩增技术(LAMP)检测犬细小病毒感染的新方法。根据Gen-Bank中犬细小病毒(CPV)VP2基因序列,设计4条LAMP特异性引物,对反应条件、特异性、敏感性、可视化效果和应用效果进行研究。结果显示,在65℃等温条件下、1h内可完成LAMP扩增过程;病毒的最低检出限量为10-2个TCID50/mL;特异性和可视效果良好;对36份临床标本进行检测,阳性检出率为80.5%(29/36),检出率高于普通PCR 72.2%(26/36)。建立的LAMP检测方法,显示了较高的特异性和敏感性,而且兼具高效、快捷、可视化的优势,为临床检测犬细小病毒感染提供了一种快速简便的新方法。