用于构建双价禽流感DNA疫苗的双目的基因表达质粒的构建及鉴定

为探索构建禽流感双价或多价DNA疫苗的可行性,本研究以本实验室前期研制的禽流感DNA疫苗p CAGGopti HA5为基础[其中含有禽流感病毒(AIV)A/Goose/Guang Dong/1/96(H5N1)的HA基因],将增强型绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因作为第二个目的基因,利用双启动子启动、内部核糖体进入位点(IRES)介导以及通过蛋白Linker编码序列连接融合表达两个目的基因的形式,构建了双启动子重组表达质粒pH5-eGFP、IRES介导的重组表达质粒pHIE以及融合表达重组质粒pH6E。并采用脂质体介导将这3种重组质粒分别转染293T细胞,通过间接免疫荧光试验和western blot方法检测HA和eGFP这两种目的蛋白的瞬时表达情况。结果显示,这3种重组质粒均能够正确表达AIV的HA蛋白和eGFP。其中pH5-eGFP表达出两个独立的目的蛋白,而且互相不影响各自的表达和细胞定位;pH6E则以融合形式表达两种目的蛋白,由于HA蛋白具有膜定位信号,所以融合蛋白主要定位于细胞膜上。本研究结果表明,双启动子表达质粒和双目的蛋白融合表达质粒适合用于构建AIV以及其他相关病原的双价DNA疫苗。     

湖羊在西北寒旱地区行为学和生理指标的观测

为了研究西北寒冷干旱气候条件下湖羊的行为和生理指标变化,进而为西北地区湖羊引种提供数据支持和理论依据,本试验选用12只(公、母各半)舍饲周岁湖羊,通过近红外摄像技术研究了不同季节(A因子,A₁夏季,A₂冬季)、性别(B因子,B₁♂,B₂♀)和不同时段(C因子,C₁昼,C₂夜)条件下湖羊的采食、饮水、反刍、卧息等行为。结果表明,季节因子(A因子)对湖羊采食、卧息、反刍等行为均有极显著影响(P<0.01);性别因子(B因子)仅对湖羊采食和卧息行为有显著影响(P<0.05);昼夜因子(C因子)对湖羊的卧息行为有显著影响(P<0.05),对其采食和反刍行为有极显著影响(P<0.01)。季节和性别的交互作用对湖羊采食行为有显著影响(P<0.05),对反刍行为有极显著影响(P<0.01)。其余因子间交互作用对湖羊行为学无显著影响。试验羊体温、心跳、呼吸频率和血常规等生理指标均在正常范围内。以上结果说明湖羊在当地表现出了良好的适应性,在西北地区引种湖羊可行。     

饮茶对镉染毒SD大鼠抗氧化和脂质代谢的影晌

选用体质量均匀的成年雌、雄SD大鼠,并分为对照组、镉染毒组和镉染毒饮茶干扰组。在饲喂基础日粮的基础上,对照组饮用自来水;镉染毒纽饮用含镉（60mg／L）的水;镉染毒饮荼干扰组饮用舍镉（60mg／L）的龙井茶,探讨饮茶对镉毒性的干预效果。结果表明,镉可造成细胞脂质过氧化,细胞抗氧化能力降低,影响细胞正常代谢,并可导致机体血脂升高、动脉硬化的几率增加。饮茶拮抗镉的脂质过氧化损伤,激活了体内的抗氧化防御系统,并可降血脂、预防动脉硬化及调节脂质代谢。     

饲料添加砷制剂对小鼠铁吸收的影响

为探讨饲料中添加砷制剂对小鼠铁吸收的影响,45只小鼠被随机分为3组,各组在基础日粮中分别添加0,40,80mg／kg砷（以洛克沙胂形式）,试验期30d。试验结束后,收取各组粪便和组织器官测定铁含量。结果显示,与对照组相比,40mg／kg砷组铁表观吸收率提高14．57％,80mg／kg砷组铁表观吸收率则降低了14．93％;40mg／kg砷组小鼠肝脏、肾脏、脾脏、小肠和腿肌铁含量显著升高（P〈O．05）,80mg／kg砷组则显著降低（P〈O．05）;但两组分别于停砷后5,7d,组织器官铁恢复正常水平。这表明40mg／kg砷水平可促进铁的吸收,相反80mg／kg砷水平则抑制铁的吸收。     

Establishment of Digital RT-PCR Assay for Detection of Swine Influenza Virus H3N2 Subtype

A new assay for the detection of swine influenza virus (SIV) was developed with a novel nucleic acid probe——Molecular beacon in this study. The specific primers and molecular beacon probes were designed according to the conserved region of H3 and N2 genes of SIV H3N2 subtype. A digital RT-PCR assay was developed for detection of SIV H3N2 subtype. The results showed that SIV H3N2 subtype could be identified simultaneously on this microarry with high sensitivity and reproducibility,which could reach to 10⁶ dilute viruse. The conclusion was that the digital RT-PCR method could analyze quantitatively the RNA templates.On the identification of H3N2 SIV,the digital RT-PCR method was much more scientific than Real-time quantitative PCR method.     

草地早熟禾愈伤组织遗传转化受体系统的建立

以草地早熟禾成熟胚为外植体，并去除部分胚乳，或用浓盐酸处理，选择NB＋2，4-D2mg／L为诱导培养基，NB＋6-BA2mg／L为分化培养基，1／2NB＋IAA0．5mg／L＋NAA0．5mg／L为生根培养基，建立了这些品种的胚性愈伤组织高频诱导与再生系统，确定了G418（40-50mg／L）Hpt（50mg／L）的筛选临界浓度，确定了最佳分化时间，探讨了建立草地早熟禾转化受体系统的必要条件。     

甘草酸的生物学功能、提取工艺及其在单胃动物中的应用

甘草酸是甘草中的重要活性成分,是评定甘草质量的重要指标,具有抗氧化、抗肿瘤、抗病毒等作用。作者主要综述了甘草酸的生物学功能、提取工艺及其在单胃动物中的应用,以期为甘草酸在畜牧业中进一步开发利用提供参考。     

外源性H2S对氯胺酮全麻大鼠主要生理指标的影响

外源性H₂S在诸多方面对中枢神经系统具有保护性作用,本研究通过预试验确定了外源性H₂S的给药时间和剂量,将48只SD大鼠随机均分为4组,分别为对照组（CP组）、低剂量组（LP组,7 μmol/kg NaHS）、中剂量组（MP组,14 μmol/kg NaHS）、高剂量组（GP组,28 μmol/kg NaHS）。在盐酸氯胺酮麻醉前20 min,3个剂量组分别腹腔注射7、14、28 μmol/kg NaHS,观察外源性H₂S对大鼠体温、心率、呼吸频率、血氧饱和度及血压等生理指标的干预效果。试验结果表明,与对照组相比,3个剂量组体温和血氧饱和度浓度均显著升高（P<0.05）,心率和血压均显著降低（P<0.05）,但呼吸频率呈先减慢后加快趋势,且这些变化呈显著的剂量依赖性。     

MTT法检测番鸭外周血淋巴细胞转化功能的研究

为了建立番鸭淋巴细胞转化检测的MTT法 ,筛选细胞浓度、刀豆蛋白ConA浓度和培养时间 3个参数对试验条件进行了研究。结果确定了MTT法检测番鸭淋巴细胞转化能力的最佳培养条件 ,细胞浓度 5× 1 0 6个 /mL在 2 0 μg/mLConA的RMPI 1 640完全培养基 40℃培养 60h。试验表明 ,该方法可用于番鸭体外细胞免疫功能的检测     

中草药免疫增强剂对鸡小肠T淋巴细胞免疫组化研究

为了探讨中草药免疫增强剂的作用机理,采用组织学常规切片技术和免疫组织化学染色的方法对鸡小肠黏膜淋巴组织中T淋巴细胞的数量分布进行了动态观察.将1日龄60只健康公鸡随机分成2组,一组为对照组,另一组为试验组,试验组按1%浓度的中草药免疫增强剂饮水,连续21 d.在第14天、第21天分别取各组鸡小肠,制成组织切片,进行组织学观察.结果显示,试验组鸡小肠的T淋巴细胞数显著高于对照组(P<0.05),表明中草药免疫增强剂对鸡小肠免疫有显著的增强作用.