乳酸菌噬菌体的分离及生物学特性鉴定

为了解乳酸菌噬菌体的生物学特性,并为制定乳酸菌发酵生产过程中噬菌体污染的防控措施提供试验数据和参考,本研究通过斑点试验和双层琼脂平板法,以干酪乳杆菌（L. casei） ATCC 393、戊糖乳杆菌（L. pentosus） KLDS 1.0413、短小乳杆菌（L. brevis） ATCC 367为指示菌从乳制品、泡菜样品中分离乳酸菌噬菌体,通过透射电镜观察噬菌体形态,噬菌体基因组限制性内切酶作用分析其包装机制,并进行宿主范围和一步生长曲线的测定,SDS-PAGE分析噬菌体结构蛋白,对获得的噬菌体进行生物学特性鉴定。结果显示,分离获得3株烈性乳酸菌噬菌体,依次命名为Lc、Lpen和Lbre。电镜结果显示,噬菌体Lc、Lpen均由多面体头部和非收缩性尾部组成,而噬菌体Lbre由多面体头部和收缩性尾部组成。根据形态学分析,Lc和Lpen属于长尾噬菌体科（Siphoviridae）,B1类,Lbre属于肌尾噬菌体科（Myoviridae）,A1类。噬菌体基因组经限制性内切酶作用后,核酸电泳结果显示,噬菌体Lc、Lpen基因组均为异质平末端,其包装机制属满头包装,即pac-型,而Lbre含有黏性末端,其包装机制属于cos-型。宿主范围测定结果显示,噬菌体Lc、Lbre对宿主专一,而Lpen宿主谱较广。一步生长曲线显示,噬菌体Lc、Lpen和Lbre潜伏期分别为60、45和150 min,裂解期分别为45、90和105 min,裂解量分别为47、24和30 PFU/cell。SDS-PAGE分析显示,噬菌体Lc结构蛋白有7个,主要结构蛋白分子质量约为50 ku;噬菌体Lpen和Lbre结构蛋白均有5个,主要结构蛋白分子质量分别约为55和50 ku。综上,本研究分离获得3株乳酸菌烈性噬菌体,并对其主要生物学特性进行鉴定,对了解乳酸菌噬菌体及后续乳酸菌噬菌体污染的防治提供了试验数据和理论依据。     

阿勒泰羊生长速度与主要血液生化指标含量及尾脂Leptin基因表达关系

试验通过研究不同生长速度阿勒泰羊主要血液生化指标含量和尾脂中瘦素（Leptin）基因的表达水平,探讨阿勒泰羊生长速度与脂肪沉积之间的关系。选取300只出生时间相近的阿勒泰羊公羔,正常饲喂至6月龄,记录日增重,取平均日增重排前10%和后10%的公羔各30只,分为生长快速组（HBW）和生长慢速组（LBW）,从生长快速组随机选12只分为抑制生长组（饲喂低能量饲粮以抑制其生长,HBW-75%,n=6）和生长快速对照组（饲喂标准饲粮,HBW-100%,n=6）,生长慢速组随机选12只分为促进生长组（饲喂高能量饲粮以促进生长,LBW-125%,n=6）和生长慢速对照组（饲喂标准饲粮,LBW-100%,n=6）;预饲期7 d,正饲期30 d,试验结束后称重并采集血液,屠宰后采集尾部脂肪。检测血液TG、CK、TSH、T3、T4、S.S、GH、INS、PG、Leptin含量或活性及尾部脂肪Leptin mRNA和蛋白表达量,并观察尾部脂肪细胞形态学变化。结果显示,HBW-100%和LBW-100%组初体重与末体重均差异显著（P<0.05）,HBW-75%和HBW-100%组初体重与末体重均无显著差异（P>0.05）;LBW-100%和LBW-125%组初体重差异显著（P<0.05）,末体重无显著差异（P>0.05）。LBW-100%组的T4、S.S、Leptin、TSH、T3含量显著低于HBW-100%组（P<0.05）;LBW-125%组T3含量显著高于LBW-100%组（P<0.05）;HBW-75%组GH、PG和Leptin含量显著低于HBW-100%组（P<0.05）。LBW-125%组尾部脂肪细胞面积大于LBW-100%组,HBW-75%组小于HBW-100%组（P<0.05）。Leptin mRNA和蛋白表达量检测结果表明,HBW-100%组的Leptin mRNA表达量与LBW-100%组无显著差异（P>0.05）,Leptin蛋白表达量极显著高于LBW-100%组（P<0.01）。LBW-125%组Leptin mRNA和蛋白的表达量均显著高于LBW-100%组（P<0.05）。HBW-75%组Leptin mRNA的表达量极显著低于HBW-100%组（P<0.01）,Leptin蛋白表达量显著低于HBW-100%组（P<0.05）。综上所述,生长快速组与生长慢速组中,Leptin的表达量与体重和体脂有一定关联;在生长慢速组促进生长后体重和体脂显著增加,Leptin的表达量呈上升趋势;在生长快速组抑制生长后体重和体脂减少,Leptin的表达呈下降趋势。改变生长速度对Leptin的表达量会产生影响,从而改变机体的脂肪沉积状况。     

纳米硒对氟化钠诱导小鼠肝组织细胞凋亡的影响

旨在探究纳米硒对氟化钠诱导肝细胞凋亡的影响,40只28日龄昆明小鼠(25 g±2 g)适应性饲养7 d后,随机分为对照组(Control,生理盐水)、氟化钠组(NaF,24 mg·kg-1)、纳米硒组(Nano-Se,1 mg·kg-1)、纳米硒治疗组(NaF+Nano-Se,24 mg·kg-1 NaF+1 mg·k...     

气肿疽梭菌CctA基因的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

研究旨在原核表达气肿疽梭菌细胞毒素A （CctA）基因,用纯化的重组蛋白建立其间接ELISA检测方法,a。利用大肠杆菌密码子的偏爱性优化CctA基因序列,克隆至原核表达载体pET-28a （+）,双酶切鉴定原核表达质粒pET28a-CctA并测序。将重组质粒转入大肠杆菌,经IPTG诱导得到高表达的重组CctA包涵体蛋白。包涵体蛋白变性后经镍（Ni）柱纯化,SDS-PAGE检测其纯化效果。以豚鼠抗气肿疽梭菌抗血清为一抗,用Western blotting方法检测重组CctA蛋白的反应原性。用棋盘滴定法建立间接ELISA检测方法,以复性后的重组CctA蛋白作为检测抗原,摸索抗原包被浓度、封闭液的种类及浓度、抗体的最适稀释度和反应条件等。选用3批气肿疽灭活疫苗免疫豚鼠后采集血清,同时用攻毒和间接ELISA两种方法验证疫苗的免疫效力。质粒双酶切结果显示,得到大小约853 bp的条带,与预期相符,且测序结果正确。SDS-PAGE结果表明,成功表达并纯化大小为35 ku的重组CctA蛋白。Western blotting结果显示,豚鼠抗气肿疽梭菌抗血清与重组CctA蛋白具有良好的反应原性。建立的间接ELISA法的最适条件为：抗原的包被浓度为0.5 μg/mL,于4 ℃包被过夜;封闭液选择10%胎牛血清,37 ℃孵育2 h;二抗的稀释度为1：8 000;室温避光显色10 min后终止反应,测定D_{450 nm}值。当P/N>4.6时,间接ELISA法检测结果与豚鼠攻毒试验结果拟合度较好。本研究成功表达CctA基因并纯化了重组CctA蛋白,建立的以重组CctA蛋白为检测抗原的间接ELISA检测方法,有望成为气肿疽灭活疫苗免疫效果验证的替代方法。     

硒对母猪氧化应激及其后代抗氧化能力的营养调控研究

硒作为的重要微量元素之一,可以通过胎盘和乳组织进行转移.仔猪可以从乳汁中获取硒源,提高硒含量,进而提高仔猪的初生重.同时,硒也能够调节母猪妊娠期间代谢速度,控制妊娠期自由基产生,进而提高胎盘输送营养功能.文章从母猪氧化应激体系角度来解析硒对母猪妊娠期氧化应激的调控机制、硒对哺乳母猪生产性能的调控作用.     

噬菌体制剂对母猪生产性能、免疫指标及粪便微生物的影响

试验旨在研究噬菌体对母猪生产性能、免疫指标和粪便微生物数量的影响.试验选取96头健康长大二元母猪,随机分为4组,每组24头猪.空白对照组母猪饲喂基础日粮,试验组1、试验组2和试验组3分别在基础日粮中加入100、300、500 g/t的沙门氏菌噬菌体、大肠杆菌噬菌体和产气荚膜梭菌噬菌体组成的复合制剂,试验周期为35 d....     

表达猪乳铁蛋白肽重组屎肠球菌对断奶仔猪生长性能的影响及其抗ETEC感染效果研究

本试验以表达猪乳铁蛋白肽的重组屎肠球菌（pNZ8112-PLFcin/Ef）饲喂断奶仔猪,研究其对仔猪生长性能的影响和抗产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC）感染的效果。选取28日龄体重相近的健康断奶仔猪36头,随机分为3组（重组屎肠球菌组、空载体组和培养基组）,每组3个重复,每个重复4头仔猪。重组屎肠球菌组和空载体组分别饲喂添加pNZ8112-PLFcin/Ef （6×10¹² CFU/kg）和pNZ8112/Ef （6×10¹² CFU/kg）的基础日粮,而培养基组饲喂含有相同体积的GM17液体培养基的基础日粮。试验期26 d。结果显示,与培养基组相比,重组屎肠球菌组断奶仔猪的平均日增重极显著提高（P<0.01）;料重比显著降低（P<0.05）;腹泻率明显降低,肠道菌群的均匀度和多样性指数均下降。为进一步探究表达猪乳铁蛋白肽的重组屎肠球菌对断奶仔猪抵抗ETEC感染的保护作用,在连续饲喂21 d后,每个重复中随机挑选1头体况相近的断奶仔猪灌服ETEC。结果发现,与培养基组相比,攻菌后重组屎肠球菌组断奶仔猪血清白细胞介素-2（IL-2）、免疫球蛋白G （IgG）含量、肠黏液中分泌型免疫球蛋白A （sIgA）水平均显著升高（P<0.05）;脾脏指数显著提高（P<0.05）,但胸腺指数、肠段长度及重量则均无显著差异（P>0.05）。综上所述,表达猪乳铁蛋白肽的重组屎肠球菌能够起到促进断奶仔猪生长及抗ETEC感染的保护作用。     

西藏典型草地地上生物量季节变化特征

采用高寒草甸、高寒草原、高寒沼泽化草甸和温性草原4种西藏高原典型草地类型地上生物量定点观测数据,分析其地上生物量季节动态变化特征和生长规律。结果表明,高寒沼泽化草甸地上生物量最高,其中围网草地年均地上生物量达384.45 g·m-2,比无围网草地地上生物量高73%,且是温性草原类草地生物量的6倍,是高寒草甸和高寒草原类草地的12~14倍,与自由放牧相比,围栏禁牧措施可以明显提高草原地上生物量,是改良退化草地最有效的措施之一;温性草原草地生产力大于高寒草甸和高寒草原,城市附近山地草地生物量明显大于远离城市的地区,表明城市化进程降低了天然草地放牧强度,是恢复退化草地生产力的有效途径之一;属半干旱气候类型的西藏高原中部,降水是制约草地植被生长的主要因子;草地地上生物量的绝对增长速率和相对增长速率季节动态均在生物量达到高峰期前为正增长,之后为负增长。区域水热条件差异及其季节性变化导致了不同草地类型或同一类型不同区域的草地最快生长期出现的时间存在一定差别。     

非洲猪瘟病毒VP73蛋白在昆虫细胞中的表达与间接ELISA方法的建立

为了建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)间接酶联免疫吸附试验(iELISA),利用杆状病毒表达载体pFastBac HTA在昆虫细胞Sf9中表达非洲猪瘟病毒的VP73蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测显示重组蛋白大小约65ku,能与ASFV标准阳性血清发生特异性结合。以此重组蛋白作为检测抗原包被酶标板,初步建立了检测ASFV血清抗体的iELISA方法。表达的重组蛋白具有良好的特异性,为制备ASFV免疫血清学诊断检测试剂和疫苗提供了材料。     

肉牛冻精细管无伤害制作技术

本文对日本和牛冻精细管生产过程中的种公牛饲养管理、采精管理、稀释液的配方及其配制过程,稀释过程,冷冻过程进行了详细描述。这项技术使细管冻精的平均活力由的0.3提高到0.4以上,大幅提高了冻精生产质量。