A型流感病毒分型基因芯片在流感病毒各亚型监测中的应用

为验证自行研制的A型流感病毒分型基因芯片方法在实际中的应用效果,了解A型流感病毒各亚型在我国不同地区和不同宿主中的分布情况,对我国20个地区、不同宿主源(鸡、鸭、鹌鹑、鸽子、猪、人等)拭子和组织样品共16 852份进行了检测。利用自行研制的A型流感病毒分型基因芯片方法,对样品进行RNA提取、多重不对称RT-PCR扩增、芯片杂交、洗涤和扫描分析;同时将基因芯片检测阳性的样品,用普通RT-PCR扩增后进行序列测定。结果显示:利用该方法检出阳性样品2 582份,总检出率为15.32%(2 582/16 852),共检测到H1N1、H2N9、H3N2、H4N6、H5N1、H7N1、H7N9、H9N2、H10N5、H16N3等10个亚型,且均与阳性样品测序结果一致。结果表明,该方法可准确检测不同地区、不同宿主中的A型流感病毒不同亚型。同时,该方法能在同一张芯片上准确鉴定A型流感病毒的多种亚型,解决了其他常规方法无法检测已发现和可能发生变异的所有亚型的棘手问题,从而为A型流感诊断和分子流行病学监测提供了一种新技术。     

谷子杂交种与常规种光合和叶绿素荧光特性的比较

为了明确杂交谷的光合优势是否是其产量高于常规谷的一大主因,本研究于2013年对常规谷晋谷21号和杂交谷张杂谷5号的光合和叶绿素荧光特性进行比较。采用完全随机设计,每个品种种植5个小区,在拔节期和灌浆期分别测定各项光合指标。结果表明,在拔节期,张杂谷5号的净光合速率、PSⅡ实际光化学量子产量显著高于晋谷21号;但在灌浆期,张杂谷5号和晋谷21号之间的总叶绿素含量、净光合速率、蒸腾速率、气孔导度、胞间CO2浓度、PSⅡ实际光化学量子产量、光化学淬灭参数和非光化学淬灭参数都存在显著差异。总体杂交谷在拔节期和灌浆期的光合性能高于常规谷。     

蚕豆抗绿豆象种质资源的鉴定

仓储型害虫绿豆象对蚕豆的安全储藏和品质经常造成重大损失,严重制约着我国蚕豆产业的发展。选育和利用抗虫品种是防治绿豆象最为安全、有效的途径。在室温条件下,对500份蚕豆资源进行连续两年的绿豆象饱和侵染处理,以期筛选出有利用价值的抗绿豆象种质资源,为蚕豆抗虫性种质创新利用提供依据。筛选结果显示,来源于春播区和秋播区的蚕豆资源,每粒蚕豆虫孔数分别为0.92±0.59、1.05±0.42,差异显著(P0.05);粒色为青绿色(绿色、青绿、乳白)和深色(紫色、黑色、褐色等)的蚕豆资源,每粒虫孔数分别为1.30±0.62、0.85±0.43,差异显著(P0.05)。利用Structure软件和Popgen、MEGA软件分别对500份材料的抗虫性进行群体结构分析和聚类分析,可分为5个与地理分布相关的亚群。同时筛选出H0048、H0092、H0094、H001455、H001471、H001787共6份高抗绿豆象的蚕豆资源。     

设置创新创业教育专业——破解创新创业教育改革困境的范式转换

培养创新人才是不同发展阶段、不同形态社会对教育的基本诉求。通过对我国部属农林高校创新创业教育改革实施方案文本分析可知,在开展创新创业教育改革发展目标方面高度认同,在组织机构设置方面高度重视,在选择举措方面高度完备。同时存在目标定位无特色又高度雷同,相关部门间协同育人机制缺失以及对发力点缺乏明晰的判断等问题。推进范式转换,设置创新创业教育专业、建立创新创业教育监督执行机构成为当下破解创新创业教育改革困境的重要选择。     

四家动物园观赏肉食动物消化道寄生虫感染情况调查

为了解哈尔滨北方森林动物园、佳木斯水源山公园、齐齐哈尔龙沙动植物园和鸡西动物园观赏肉食动物寄生蠕虫的感染情况,于2015年3~6月采用饱和盐水漂浮法和水洗沉淀法对四家动物园的5科94只观赏肉食动物的粪便进行了虫卵检查,结果有18只动物检出虫卵,阳性率为19.2%(18/94),蛔虫卵为常见虫种。本调查为四家动物园肉食动物消化道寄生虫病防治提供了科学依据。     

微酸性电解水对家蚕黑胸败血芽孢杆菌的杀灭效果及机制研究

微酸性电解水作为一种安全、高效、广谱的新型消毒剂,具有制备简单、成本低、使用后无残留、对人体无毒无害等优点.研究微酸性电解水对家蚕黑胸败血芽孢杆菌的杀灭效果及其杀菌机制,为其在蚕桑生产中的应用奠定基础.体外抑菌试验结果表明,有效氯质量浓度为40 mg/L、pH5.5、氧化还原电位(ORP)为1100 mV的微酸性电解水处理5 min即可全部杀灭家蚕黑胸败血芽孢杆菌.生物学试验结果表明,该电解水对家蚕黑胸败血芽孢杆菌处理5 min后,家蚕黑胸败血芽孢杆菌的灭活率达到90％;处理15 min时,灭活率为100％.经微酸性电解水处理后,家蚕黑胸败血芽孢杆菌的外部形态发生改变,菌体膨胀、逐渐伸长,之后出现孔洞,最后菌体破裂、死亡;胞外电导率、可溶性蛋白含量和可溶性糖含量逐渐增加;菌体DNA发生降解.试验结果表明微酸性电解水主要通过破坏家蚕黑胸败血芽孢杆菌细胞外部形态,改变细胞膜通透性,导致细胞内容物外渗,DNA结构受到破坏,达到杀菌目的 .     

猪急性腹泻综合征冠状病毒SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为建立快速、灵敏且特异的检测猪急性腹泻综合征冠状病毒（swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV）检测方法,本试验扩增SADS-CoV N基因保守区域将其克隆至pMD18-T载体。所构建的重组质粒pMD18-T-SADS-qN作为阳性质粒标准品,以其为模板建立一种SYBR Green荧光定量PCR检测方法。结果显示,所建立方法在3.31×10¹~3.31×10⁷拷贝·μL^-1模板量时,呈良好的线性关系,相关系数（R²）为0.997,斜率为-3.318。该方法特异性检测SADS-CoV;而猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）和猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）检测结果均为阴性。所构建的标准品检测灵敏度下限可以达到3.31×10¹拷贝·μL^-1,组内和组间变异系数均小于1%,表明其具有良好的灵敏性和重复性。用该方法检测SADS-CoV感染IPI-2I和IPEC-J2细胞后不同时间点和不同接毒剂量的复制情况,结果显示,SADS-CoV感染细胞后2 h病毒含量较低,在12~36 h病毒含量迅速增长,36 h后增长速度减缓且病毒含量维持在较高水平。分别用0、0.1、1 MOI SADS-CoV感染细胞结果显示病毒的mRAN转录水平呈现剂量依赖性增加,当MOI为1时,IPI-2I和IPEC-J2细胞病毒含量分别为10^6.7、10^5.3拷贝·mL^-1。进一步利用所建立的方法对经口服攻毒SADS-CoV仔猪的临床样本进行检测,结果发现病毒在空肠回肠含量较高,表明病毒主要定殖于空肠和回肠。综上表明,本研究建立SYBR Green荧光定量PCR检测方法能灵敏特异地检测SADS-CoV,为SADS-CoV的诊断和病毒相关基础研究提供可靠的检测手段。     

口蹄疫病毒VP1基因密码子偏好性分析

VP1蛋白是口蹄疫病毒(FMDV)的主要结构蛋白,可诱导机体产生中和抗体以及激发保护性免疫应答。为探究VP1基因密码子偏好性,筛选出其最佳体外表达系统,使用Visual Gene Developer、CodonW、GraphPad Prism等软件,对VP1基因进行密码子偏好性分析,同时将VP1基因密码子使用频率与大肠杆菌、毕赤酵母、昆虫杆状病毒和哺乳动物细胞表达系统作了比较。结果显示,VP1基因的CAI为0.21,ENC为55.43,GC3S为65.26%,表明该基因密码子使用偏好较弱并且密码子偏好以G/C碱基结尾。结合VP1基因与各表达系统密码子使用频率比值,发现其与昆虫杆状病毒表达系统频率比值差异最小且CAI最大,因此推断昆虫杆状病毒表达系统是FMDV VP1基因最适体外表达系统。本研究为FMDV亚单位疫苗研制等提供了技术基础。     

Phylogenetic analysis of Myanmar indigenous chickens using mitochondrial D-loop sequence reveals their characteristics as a genetic resource

Myanmar indigenous chickens play important roles in food, entertainment, and farm business for the people of Myanmar. In this study, complete mitochondrial D-loop sequences (1232 bp) were analyzed using 176 chickens, including three indigenous breeds, two fighting cock populations, and three indigenous populations to elucidate genetic diversity and accomplish a phylogenetic analysis of Myanmar indigenous chickens. The average haplotype and nucleotide diversities were 0.948 ± 0.009 and 0.00814 ± 0.00024, respectively, exhibiting high genetic diversity of Myanmar indigenous chickens. Sixty-four haplotypes were classified as seven haplogroups, with the majority being haplogroup F. The breeds and populations except Inbinwa had multiple maternal haplogroups, suggesting that they experienced no recent purifying selection and bottleneck events. All breeds and populations examined shared haplogroup F. When 232 sequences belonging to haplogroup F (79 from Myanmar and 153 deposited sequences from other Asian countries/region) were analyzed together, the highest genetic diversity was observed in Myanmar indigenous chickens. Furthermore, Myanmar indigenous chickens and red junglefowls were observed in the center of the star-like median-joining network of 37 F-haplotypes, suggesting that Myanmar is one of the origins of haplogroup F. These findings revealed the unique genetic characteristic of Myanmar indigenous chickens as important genetic resources.