东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库的构建

本项研究的目的是构建东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库,为筛选东方田鼠抗血吸虫病抗性相关基因奠定基础.用TRIzol试剂提取东方田鼠肝脏总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA.在双链cDNA末端加上EcoRⅠ/HindⅢ定向接头并用EcoRⅠ和Hind Ⅲ酶切,使其两端分别带EcoRⅠ和HindⅢ粘性末端.用Mini Column纯化、收集300 bp以上的双链cDNA片段,再连接于带有EcoRⅠ和HindⅢ末端的T7 Select 10-3b载体,经体外包装后,以BLT5403为受体菌构建T7噬菌体展示cDNA文库.经测定,库容量为1.3×107 PFU/mL,扩增后文库滴度为1.8×1011 PFU/mL.对从原始文库中随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为91.7%,阳性克隆片段大小分布在200 bp～1 000 bp,其中有95.5%的插入片段大于300 bp.用日本血吸虫童虫可溶性抗原对文库进行了初筛,得到了21个ESTs,将这些阳性噬菌体克隆和血吸虫童虫共培养,其中大部分克隆诱导的童虫死亡率比阴性噬菌体对照高出2%～13%.     

复方青黛散对丝状支原体PG株的体外抑菌试验和临床应用效果

山羊传染性胸膜肺炎由丝状支原体PG株引起,主要发生在3岁以下的山羊,是一种以高热,咳嗽及肺脏和胸膜发生浆液性、纤维蛋白性炎症为主要特征的呼吸道疾病.目前,该病呈地方性流行,由于缺乏完善的疫病检疫和预防措施,从疫区引种导致该病在国内外广泛发生,对养羊业造成严重危害.为了研究复方青黛散对山羊传染性胸膜肺炎病原的体外抑菌试验和临床应用效果特进行了此试验,现报道如下.     

中药复方制剂对生长肥育猪生长性能及血清免疫球蛋白的影响

本试验将60头75～80日龄、体重45 kg左右的杜长大杂种生长肥育猪随机分为3组,每组20头,对照组猪饲喂基础饲粮,试验1组猪饲喂基础饲粮 1%中药制剂,试验2组猪饲喂基础饲粮 2%中药制剂,试验期60 d.结果表明,与对照组相比,中药复方制剂能显著提高猪的生长性能,并能提高肥育猪血清IgG、IgA、IgM的水平,从而增强了生长肥育猪的自身免疫力.     

柞蚕微孢子虫胶体金免疫层析检测法

利用柞蚕微孢子虫孢子液直接免疫家兔获得柞蚕微孢子虫多克隆抗体后,分别采用双抗夹心法和竞争法制作胶体金免疫层析试纸条,建立能简便、快捷、准确诊断柞蚕微粒子病的柞蚕微孢子虫胶体金免疫层析检测法。双抗夹心法和竞争法分别是将柞蚕微孢子虫多克隆抗体与25 nm和17 nm的胶体金颗粒结合并固定在金标垫上,然后均将羊抗兔二抗包被在硝酸纤维素膜上作为质控点(C),但是2种方法制作的胶体金免疫层析试纸条的反应模式不同:前者是以柞蚕微孢子虫多克隆抗体作为检测点(T),而后者以柞蚕微孢子虫孢壁蛋白作为检测点(T)。2种方法制作的胶体金免疫层析试纸条的检测时间均为10 min,检测灵敏度为0.8×107个/mL,与柞蚕血淋巴无交叉反应,特异性强,操作简单,其中,以双抗夹心法制作的试纸条显色更清晰,结果更可靠,更具实用价值。     

不同毒力猪繁殖与呼吸综合征病毒对仔猪肺和外周免疫器官损伤的研究

为研究不同毒力的PRRSV对仔猪肺脏和外周免疫器官损伤的差异,本实验分别采用PRRSV变异株(HuN4株)和PRRSV经典株(CH-1a株)感染35日龄健康的断奶仔猪,并在感染后0 d、3 d、7 d、10 d和14 d各迫杀3头,检测肺、颌下淋巴结、肠系淋巴结、腹股沟淋巴结、扁桃体和脾脏的病毒载量及病理变化情况,同时检测血清中抗PRRSV的抗体水平。结果表明:感染后3 d肺脏及各免疫器官可检测到病毒,HuN4感染组病毒载量比CH-1a感染组病毒载量高1 000倍;HuN4感染组病毒载量峰值出现在感染后10 d,而CH-1a感染组维持着较低水平的病毒载量。组织病理学检测显示HuN4感染组淋巴结内淋巴细胞显著减少,呈空泡状;CH-1a感染组淋巴结内淋巴细胞轻度减少,呈星隙状。本实验表明HuN4株比CH-1a株对肺和外周免疫器官造成更严重的损伤。     

miR-200a对奶山羊乳腺上皮细胞乳脂合成相关基因mRNA表达的影响

旨在构建pAd-pri-miR-200a重组腺病毒,使其在奶山羊乳腺上皮细胞中稳定表达miR-200a,研究miR-200a对乳脂合成相关基因mRNA表达的影响。以西农萨能羊DNA为模板扩增pri-miR-200a。采用Ad-Easy系统构建重组腺病毒载体pAd-pri-miR-200a,并于HEK 293细胞株中进行病毒的包装、扩繁。TCI50法测定病毒滴度。qRT-PCR检测miR-200a及16个乳脂合成相关基因mRNA表达水平。序列分析结果显示,pri-miR-200a包括pre-miR-200a86bp和侧翼序列共297bp。酶切结果证实pAd-pri-miR-200a构建成功。Ad-pri-miR-200a滴度达8×109 PFU.mL-1。实时定量结果表明,Ad-pri-miR-200a(MOI为200)感染奶山羊乳腺上皮细胞72h,miR-200a的表达量较对照高出2.4倍。同时miR-200a的过表达引起10个基因mRNA表达量下调,6个基因mRNA表达量上调。其中脂肪酸从头合成相关基因FASN、脂滴生成相关基因TIP47及脂肪酸运输相关基因FABP4降幅较大,分别下降了0.47、0.89及0.65倍。而TAG生成相关基因DGAT1和脂解相关基因HSL较对照分别增加了0.52和1.49倍。本研究获得的重组腺病毒Ad-pri-miR-200a能在山羊乳腺上皮细胞中稳定表达miR-200a,同时miR-200a过表达影响乳脂合成相关基因mRNA表达水平。     

江苏省推行兽药GSP的体会与思考

回顾总结了江苏省兽药GSP试点工作的主要做法,阐述了制定江苏省关于实施<兽药经营质量管理规范>细则的几点考虑,以及贯彻实施<兽药经营质量管理规范>的基本思路,供参考借鉴.     

藏族的草原游牧文化(Ⅱ)——藏区的草原和生产文化

青藏高原是全球海拔最高的自然地域单元,由于地势高耸、气候寒冷而被称之为“地球第三极”.它是南亚、东南亚众水发源地,哺育了中华黄河、长江流域文明和印度河流域文明.至当代,它仍然对中华民族乃至南亚、东南亚人民的生存和发展有着决定性影响.草原分为高寒草原、高寒草甸、荒漠草原、高寒灌丛等.在各类草地类型中,以高寒草原与草甸草地...     

欧拉羊在甘南半农半牧区与山谷型藏羊的适应性对比

从甘南州玛曲县河曲马场引进欧拉羊种公羊30只,投放到卓尼县的半农办牧区进行放牧,观察欧拉羊的行为表现、生长发育、生理生化指标、繁殖性能、发病与死亡情况,结果各项指标正常,适应性良好,充分发挥了种公羊的生产性能,且具有杂交改良山谷型藏羊的优势,引种获得成功。