小鼠Wip1基因的表达及其对受精能力的影响

本研究旨在探讨Wip1基因的表达及其对精子受精能力的影响,为阐明Wip1基因对雄性繁殖的影响提供新的着眼点。选取相同饲养环境、同一遗传背景的8周龄左右的野生型雄鼠,利用实时荧光定量PCR技术检测Wip1基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑组织及雄性生殖器官中的表达情况,利用免疫荧光技术检测Wip1蛋白在睾丸组织及精子细胞中的分布情况。以Wip1敲除型雄鼠为试验组,野生型雄鼠为对照组,利用ELISA试剂盒检测两组小鼠血清中睾酮水平;通过体外受精试验比较两组的2-细胞率及囊胚率。结果显示,Wip1基因mRNA在野生型雄鼠各组织中广泛表达,且在雄性生殖器官中表达量较高,其中睾丸中表达量最高,附睾体、附睾头、附睾尾次之;Wip1蛋白主要定位于睾丸组织中的长形精子细胞及附睾成熟精子细胞的头部。ELISA检测结果发现,与野生型雄鼠相比,Wip1敲除型雄鼠血清内睾酮含量极显著下降（P<0.01）。体外受精结果表明,Wip1敲除后2-细胞率及囊胚率均极显著下降（P<0.01）。结果表明,Wip1基因敲除能够引起雄性小鼠受精能力降低,这可能与Wip1基因在精子发生过程中发挥作用相关。     

基于GIS的中国苜蓿资源分布和生产力分析

针对目前我国苜蓿种植缺乏合理的规划和布局、盲目引种等问题,于2006年初对全国苜蓿种植县开展了的问卷调查,对目前苜蓿资源情况进行了全面了解,并利用地理信息系统（GIS）对其空间分布和生产力状况进行了详细分析。研究表明,截止到2005年全国16个省区的614个苜蓿分布旗县的苜蓿累计保留面积达254.77万hm2,占全国人工草地面积的50.8%;并按照面积数据分布情况将其划分为5级（小于333hm^2、333～3333hm^2、3333～10000hm^2、10000～33333hm^2、33333～74313hm^2）,各级分别占苜蓿总面积的0.83%、14.49%、28.84%、42.45%、13.62%;苜蓿平均干草单产为10150kg/hm^2,占总面积的46%;根据数据分布情况将干草产量数据划分为5级（小于3000kg/hm^2、3000～7500kg/hm^2、7500～12000kg/hm^2、12000～18000kg/hm^2、18000～31005kg/hm^2）,各级分别占总面积的14.32%、21.31%、46.75%、14.86%、0.83%;全国苜蓿种子田面积17.29万hm^2,种子平均单产为325.13kg/hm^2。     

用RAPD标记研究7个猪种间的亲缘关系

试验利用随机扩增多态ＤＮＡ技术对互助猪、荣昌猪、甘肃白猪、长白猪、约克夏猪、杜洛克猪、汉普猪共７个品种的ＤＮＡ池进行了多态型研究,分析了各品种间的亲缘关系。结果显示：甘肃白猪虽然是由国外品种和地方品种培育而成,但其亲缘关系更接近于中国猪品种;约克夏猪与其它欧洲猪种亲缘关系较远,这可能与约克夏猪在培养过程中亲本遗传背景较为复杂有关。     

适应无血清培养的HEK293细胞系的培育

为培育适合腺病毒增殖的无血清培养细胞系,本研究采用培养液渐进替换的方法获得了一株适应无血清培养的HEK293细胞(293SF),经检测293SF细胞具有稳定的支持腺病毒增殖与表达外源蛋白的能力;平均病变时间为97 h,比HEK293细胞缩短12.9%;毒价达到107.48TCID50/mL,比HEK293细胞提高43.3%;并且稳定性良好,连续传16代后293SF细胞状态与易感性未发生变化。该细胞系为腺病毒的无血清培养奠定基础。     

粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)培养细胞对家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)的吞噬过程观察

观察微孢子虫在非天然宿主细胞系的生物行为过程,有助于探究微孢子虫的侵染特异性机制。选用鳞翅目昆虫粉纹夜蛾(Trichoplusia ni,Tn)细胞系为材料,接种家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)孢子后观察其吞噬过程。结果发现:经氢氧化钾发芽预处理的Nb孢子虽然可以在Tn培养细胞液中发芽,但未见发芽孢子的孢原质进入Tn培养细胞;在接种Nb孢子浓度为2.0×105mL-1以上时,观察到孢子通过内吞作用进入了Tn培养细胞,但未见孢子的增殖;随着时间的延长和进入Tn培养细胞的Nb孢子的增加,可引起Tn培养细胞的超微结构变化,并导致细胞的裂解。以上结果说明,虽未见Nb以发芽形式感染Tn培养细胞,但Nb能够被吞噬进入Tn培养细胞并破坏其结构。     

用RAPD标记分析高羊茅的遗传多样性

采用RAPD分子标记技术对从国外引进的15个高羊茅品种的遗传多样性进行了研究。从60个随机引物中筛选出12个有效引物,它们共扩增出85条DNA带,其中59条为多态性带,占69.41%,平均每个引物扩增出多态性带4.92条;利用NTSYS-PC软件计算出的不同品种间Jaccard遗传相似系数(GS)变化范围较大,为0.373~0.932;根据得到的遗传相似性矩阵进行非加权组法(UPGMA)聚类分析,建立高羊茅品种的分子系统树状图;以相似系数0.68为标准,可将所有品种分为3类,品种翠丽和贝克各自聚为一类,其余13个品种聚成一类。     

间接ELISA检测猪伪狂犬病血清抗体

用猪肾传代细胞IBRS－2增殖猪伪狂犬病病毒（PRV）鄂A株，病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、聚乙二醇（Mr20000）浓缩后作为包被抗原。用纯化的猪血清IgG免疫家兔，HRP村记撮的兔抗猪IgG，制备出高效价的酶标抗体，酶标抗体工作浓度为1：50000；经各种条件的选择，建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的间接ELISA。所建立的间接ELISA抗原包被浓度为39.2mg/L，血清最佳稀释度为1：20，与猪细小病毒、猪、O型口蹄疫、猪衣原体标准阳性血清呈阴性反应，与标准阴性血清和临床未感染PRV的猪血清呈阴性反应；与猪伪狂犬病标准阳性血清、免疫猪血清和临床发病猪血清呈明显的阳性反应；与美国进口的PRV抗体检测ELISA诊断试剂盒检测结果比较，45份猪血清的阴、阳性检出符合率均为100％。表明建立的间接ELISA具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点，可用于猪伪狂犬病血清抗体的定性和定量检测。     

伪狂犬病毒在潜伏感染猪体内的组织分布

潜伏感染是猪伪狂犬病防治和净化工作中的重要障碍之一。本研究用伪狂犬病毒（PRV）gG-/LacZ＋标记毒株感染经过PRV灭活疫苗免疫的PRV阴性仔猪,建立了猪伪狂犬病毒潜伏感染动物模型,再用地塞米松激活PRV在猪体内的潜伏感染。运用免疫组织化学SABC染色法研究了PRV在潜伏感染猪和潜伏感染激活猪体内部分组织的分布情况。结果显示,阳性细胞主要分布在神经系统的大脑、小脑、脑干、三叉神经和视神经以及非神经系统的扁桃体、肺和肾等部位。阳性细胞数量随着攻毒后时间的发展呈现减少的趋势,而注射地塞米松后,阳性细胞数量在上述组织中显著增加。     

基于首轮内检测数据的成品油管道内腐蚀分析及对策

为了做好在役成品油管道内腐蚀的监测和防控,通过进一步挖掘首轮内检测数据的价值,提出了分析思路:通过差异分析水线区域内的内腐蚀绝对深度的离散情况,结合内腐蚀与焊缝、弯头等管道附件的相对位置以及管道工艺运行情况等数据信息,半定量定位内腐蚀敏感区。以某成品油管道为例,对两条管段内的腐蚀情况进行分析,发现管内的腐蚀集聚是由于管道施工建设期产生的内腐蚀逐渐发展形成的。定位了以管节为基本单元的腐蚀敏感管段,建议将管道内检测数据作为工程建设质量评估的关键数据,新建管道尽早开展以实施内检测为目标的管道清管作业,增加清管频次,尽快将管内铁锈清除干净,随后开展常规清管作业,从而有效减缓内腐蚀的发展。(图2,表4,参20)     

肠致病性大肠杆菌DPO-PCR快速检测方法的建立

为建立肠致病性大肠杆菌(EPEC)的快速检测方法,本研究以EPEC bfp A基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸引物(DPO),建立了EPEC的DPO-PCR快速检测方法。结果显示,退火温度在45℃~65℃范围内均能够高效地扩增出目的基因,表明DPO引物对退火温度不敏感。该方法对其他菌株的扩增结果均为阴性,特异性强;其灵敏度为97 cfu/m L。利用该方法和国标法分别对采集的230份临床样品进行检测,均共计检出5份EPEC阳性样品,两者符合率为100%。本研究建立的DPO-PCR方法设计简单、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性,为快速准确检测EPEC提供新的检测手段。