新城疫病毒ClassⅠ强毒株磷蛋白在细胞中的表达与定位

根据Class Ⅰ新城疫病毒分离株9a5b编码序列设计特异性引物扩增P蛋白基因,原核表达后利用纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,经二次亚克隆后筛选到4株针对P蛋白的单克隆抗体,利用所得单抗进行P蛋白在细胞内定位分析,NDV 9a5b株按5 M.O.I感染量接种DF1单层细胞,当PI=4 h时,P蛋白呈点状弥散分布于细胞浆内;PI=6~8 h时,P蛋白聚集于细胞核周围;PI=12 h时,P蛋白呈单极化聚集于细胞核一侧;而PI=16 h后开始形成合胞体,P蛋白在单个细胞中仍呈现单极分布;当PI=48 h时,细胞核已发生碎裂,荧光强度有所减弱。本研究为深入开展P蛋白在病毒增殖以及细胞周期中的作用机制研究奠定了基础。     

高效液相色谱法检测泰乐菌素在肉鸡组织中的残留

将肉鸡的肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织制成匀浆,用乙腈、石油醚和二氯甲烷萃取、净化后,用乙腈定容。以乙腈－ 甲醇－ ０．００５ ｍ ｏｌ／ Ｌ磷酸二氢铵溶液（６０∶３０∶１０）为流动相,用高效液相色谱检测。本法对溶解于乙腈中的泰乐菌素的最低检测限为 ０．０５ ｍ ｇ／ Ｌ,在肉鸡各种组织中的最低检测限为 ０．１０ ｍ ｇ／ Ｌ。标准曲线的线性范围为 ０．１０～６．４０ ｍ ｇ／ Ｌ。泰乐菌素质量浓度为 ０．１０、０．８０、６．４０ ｍ ｇ／ Ｌ 时的批间变异系数分别为（２．３±０．２）％ 、（１．９±１．３）％ 、（２．６±０．９）％ 。０．２０、０．４０、０．８０ ｍ ｇ／ Ｌ 的泰乐菌素在以上 ４ 种组织的回收率均符合残留检测的要求。结果表明,本法是一种灵敏、精密、可靠的检测肉鸡组织中泰乐菌素残留的分析方法。     

利用BSA法发掘野生大豆种子硬实性相关QTL

【目的】野生大豆的硬实性是大豆遗传改良利用中的重要限制因素。利用BSA法发掘与大豆种子硬实性相关的QTL,为野生大豆在大豆遗传改良中的合理利用奠定基础。【方法】利用栽培大豆中黄39与野生大豆NY27-38杂交构建F₂和F₇分离群体,从每个单株选取整齐一致的种子,取30粒种子置于铺有一层滤纸的培养皿中,加入30 mL蒸馏水,25℃培养箱中暗处理4 h,设3次重复,分别统计每个培养皿中正常吸胀和硬实种子数。在F₂群体中,选取22个正常吸胀单株（吸胀率＞90%）和16个硬实单株（吸胀率＜10%）;在F₇群体中,选取20个完全吸胀单株（吸胀率=100%）和20个完全硬实单株（吸胀率=0%）,单株DNA等量混合,分别构建2个吸胀和2个硬实DNA池。利用259对在亲本间有多态性的SSR标记对吸胀和硬实DNA池进行检测,筛选在吸胀和硬实DNA池间表现多态性的SSR标记;用192个SSR标记检测F₇分离群体,构建遗传图谱,利用复合区间作图法定位大豆硬实相关QTL。【结果】利用F₂个体构建的吸胀和硬实DNA池,在第2染色体16.3 Mb区间和第6染色体23.4 Mb区间分别检测到10个和8个在两池间有差异的SSR标记。利用这些标记检测F₂群体,将第2染色体的QTL定位于Satt274与Sat_198间的276.0 kb区间,该区间包括已克隆的大豆硬实基因GmHs1-1,解释17.2%的表型变异。第6染色体的QTL位于标记BARCSOYSSR_06_0993与BARCSOYSSR_06_1068间,可解释17.8%的表型变异。利用F₇株系构建的吸胀和硬实DNA池,在第2（27.4 Mb区间）、6（27.8 Mb 区间）和3染色体（18.2 Mb区间）分别检测到11个、9个和4个在两池间有多态性的SSR标记。利用F₇群体构建包括192个SSR标记、覆盖2 390.2 cM的遗传图谱,共检测到3个硬实相关QTL,其中第2染色体定位到的QTL位于标记Satt274与Sat_198间,可解释23.3%的遗传变异。第6染色体定位到的QTL位于标记Sat_402与Satt557之间,可解释20.4%的表型变异。在第3染色体标记Sat_266与Sat_236间发现一个可以解释4.9%表型变异的QTL,与BSA法检测的结果相符。【结论】利用BSA法可以检测到传统遗传作图定位的所有与硬实性相关的QTL,证明BSA法发掘大豆种子硬实性主要QTL的高效性。     

高效液相色谱法测定猪血浆及组织中喹赛多及其脱二氧代谢物

建立了测定猪血浆及肝脏、肾脏、肌肉等组织中的喹赛多及其代谢物脱二氧喹赛多的高效液相色谱(HPLC)法.血浆样用甲醇沉淀蛋白后离心取上清液进样测定.组织样先用乙腈匀浆,用正己烷脱脂后作HPLC检测.色谱柱为ODS C18柱;流动相血浆样测定为乙腈水(2080),组织样测定为甲醇水(4258),流速为1.0 mL/min;紫外检测波长305 nm.药物工作液质量浓度范围为0.005～0.500 mg/L时,血浆样品及组织样品测定条件下药物质量浓度与响应值均具良好线性关系,相关系数＞0.999.血浆中药物质量浓度为0.02、0.10、0.50 mg/L时,喹赛多及脱二氧喹赛多的回收率均大于70%,组织中药物含量为0.05、0.20、1.00μg/g时,肌肉样品的回收率均大于70%,肝脏、肾脏样品则为50%～80%.本试验条件下,喹赛多及其脱二氧代谢物的最低检出质量浓度,血浆样品分别为0.01、0.02mg/L,组织样品2种检测物均为0.025μg/g.测定了工作液3种质量浓度0.01、0.05、0.25 mg/L的仪器精密度,日内相对偏差＜8.0%,日间相对偏差＜17.0%.     

法氏囊活性肽在大肠杆菌中的克隆与表达

法氏囊活性肽（Bursin,BS)作为一种免疫增强剂，临床应用广泛，为了大量制备BS，按大肠杆菌惯用密码子合成BS基因。并用色氨酸将5个BS基因串联，克隆于质粒pU57的SmaI位点，经测序证明序列正确后，以PCR扩增，克隆于表达载体pBV220的EcoRI,HinDⅢ位点，温敏诱导表达，其表达水平占全菌总蛋白的13.4%。     

蓖麻良种筛选研究初报

根据产量、出籽率、百粒重、出仁率、含油率等指标,对参试的37个蓖麻(Riciuns communis)优良单株进行综合评定。结果显示:22#株形高大、主穗位适中、果穗长,第二年平均产量达4 282.5 kg/hm2,其出籽率、百粒重、出仁率、含油率等综合经济指标分别为68.4%、38.5g、76.9%、51.0%,分别是对照119.5%、131.8%、104.8%、106.5%。对病虫害具有较强的抗性。     

不同原料好氧堆肥过程中碳转化特征及腐殖质组分的变化

为探讨不同畜禽粪便（牛粪和羊粪）为主料,添加不同作物秸秆（玉米秸秆和小麦秸秆）为辅料在堆肥过程中的碳转化特征及腐殖质组分的变化规律,采用条垛式好氧堆肥研究了不同原料组合（T1：牛粪+玉米秸秆;T2：牛粪+小麦秸秆;T3：羊粪+玉米秸秆;T4：羊粪+小麦秸秆）在堆肥过程中总有机碳（TOC）、可溶性有机碳（DOC）和腐殖酸含量的碳转化特征以及胡敏酸（HA）和富里酸（FA）的含量变化规律。结果表明：所有处理的TOC含量随堆肥过程的推进而下降,至堆肥结束时T1~T4处理的TOC含量分别下降了22.1%、21.5%、23.6、23.7%;DOC含量也随堆肥过程的推进而降低,至堆肥第15天时降低至最低,T1~T4处理分别降低至6.57、5.47、4.73 g·kg^-1和4.93 g·kg^-1,但不同处理的变化规律明显不同：以牛粪为主料的T1和T2处理在第10天以前几乎无变化,而以羊粪为主料的T3和T4处理从一开始就迅速下降至最低值,至堆肥第15天时T1~T4处理的降幅分别为32.4%、36.5%、51.8%和39.3%;总腐殖酸(THA)含量的增加始于堆肥的第10天,第15天时达到最高值,最高值分别为25.5%、22.5%、29.8%和30.0%,整个堆肥过程中T3和T4处理显著高于T1和T2处理（P＜0.05）。随堆肥过程的推进,游离腐殖酸(FHA)含量逐渐降低,堆肥结束时降幅为7.6%~18.0%; HA含量逐渐增加,至堆肥结束时增幅为65.4%~197.8%,堆肥过程提高了胡敏酸态碳。T3和T4处理的FHA和HA含量在整个堆肥过程中始终高于牛粪组合T1和T2处理。FA含量随堆肥进程推进逐渐下降,至堆肥结束时降幅为44.9%~54.9%。羊粪中较高含量的纤维素、半纤维素和HA可能是堆肥产品中THA和HA含量较高的主要原因,在以牛粪为主料的堆肥配料中适当加入羊粪可以提高堆肥产品的腐殖酸含量和胡敏酸态碳。     

鹿哈胶囊中总氮量测定方法研究

采用《中国药典》氮测定法测定鹿哈胶囊中总氮量,以总氮量作为制剂中的质量控制指标。鹿哈胶囊总氮量在24.98mg~29.89mg显良好的线性关系,平均回收率98.26%,RSD 1.06%。该方法适于鹿哈胶囊的总氮含量测定。     

不同佐剂制备的H9N2亚型禽流感(SS株)灭活疫苗的免疫效果和安全性评价

利用8种不同佐剂制备了16种H9N2亚型禽流感(SS株)灭活疫苗,对疫苗的物理性状、安全性、免疫效力及疫苗吸收情况进行检验,结果表明:疫苗外观、剂型、黏度均符合国家标准,物理性状稳定;接种SPF鸡后3周,16种疫苗HI抗体效价均超过11log2;剖检显示,大多数疫苗残留较少.     

隐孢子虫感染动物模型研究进展

隐孢子虫病可致人和多种动物的腹泻等症状,是一种人兽共患原虫病,给人类生命安全带来严重威胁,也给畜牧业带来巨大的损失。建立隐孢子虫的感染动物模型对研究隐孢子虫致病机理、免疫及筛选有效的治疗药物等均具有重要意义。文章就隐孢子虫卵囊的分离与纯化、试验用动物的选择、动物模型的建立方法及影响因素等研究做一综述,介绍了隐孢子虫感染动物模型的研究现状,并对该技术的发展前景进行了分析展望。