基于LC-MS代谢组学的植物乳杆菌发酵黄芪的代谢产物分析

试验旨在利用色谱-质谱联用（liquid chromatograph-mass spectrometer,LC-MS）代谢组学技术分析植物乳杆菌发酵黄芪的代谢产物,并探索其互作发酵机制。分别采取植物乳杆菌发酵黄芪（FT组）和未发酵黄芪固态粉末（CT组）,经样本前处理、LC-MS分析、生物学信息分析等探寻差异代谢物并分析代谢通路。结果显示,总离子流图峰图重现性良好,发酵黄芪主要代谢物共鉴定出183种代谢成分,正离子和负离子模式样品间关系PCA图均能良好区分。火山图分析表明,FT和CT组间的代谢物变化具有差异性,正离子模式上调的1 416个代谢物富集到83个代谢途径;下调的935个代谢物富集到83个代谢途径;负离子模式上调的1 040个代谢物富集到52个代谢途径,下调的809个代谢物富集到45个代谢途径。发酵黄芪差异代谢产物酸类、脂类、酮类等氨基酸显著增加,烯类等氨基酸显著下调,其中上调代谢物15个,下调代谢物2个,关键代谢产物主要为α-硫酸二乙酯、2-甲基柠檬酸、3-异丙烯基-6-氧代庚酸等,涉及到丙酮酸代谢、丙酸代谢、半乳糖代谢等途径。本研究结果为发酵黄芪的代谢产物、发酵互作机制和临床应用提供理论依据。     

高分子复配材料对不同形态氮素溶出特性的影响

[目的]该研究为新型肥料的开发研究提供参考。[方法]以砂子为介质,通过淋溶试验,研究高分子复配材料对不同形态氮素溶出特性的影响。[结果]自制控失肥料氮素溶出平缓稳定,与普通肥料相比,高分子复配材料可以减少40%铵态氮、50%硝态氮、23%尿素氮、50%复合肥全氮的流失。肥料中各形态的氮素累积溶出率随时间的变化可以用线性方程y=a+bt、一元二次抛物线方程y=a+bt+ct2和一级动力学方程y=a(1-e-kt)表征,以一级动力学方程y=a(1-e-kt)拟合效果最好,一元二次抛物线方程y=a+bt+ct2次之。[结论]在普通化肥中按一定比例加入高分子复配材料可以控制肥料营养元素的渗透流失。     

猪流感病毒H1N1、H1N2和H3N2亚型多重RT-PCR诊断方法的建立

对我国分离到的猪流感病毒和GenBank数据库中已有的猪流感病毒H1N1、H1N2和H3N2亚型毒株的HA、NA基因核苷酸序列进行分析,分别选出各个病毒亚型HA和NA基因中高度保守且特异的核苷酸区域,设计扩增猪流感病毒H1和H3、N1和N2亚型的2套多重PCR特异性引物,建立了猪流感H1N1、H1N2和H3N2亚型病毒多重RT-PCR诊断方法。采用该方法对H1N1、H1N2、H3N2亚型猪流感病毒标准参考株进行RT-PCR检测,结果均呈阳性,对扩增得到的片段进行序列测定和BLAST比较,表明为目的基因片段。其它几种常见猪病病毒和其它亚型猪流感病毒的RT-PCR扩增结果都呈阴性。对107EID50/0.1mL病毒进行稀释,提取RNA进行敏感性试验,RT-PCR最少可检测到102EID50的病毒量核酸。对40份阳性临床样品的检测结果是H1N1、H1N2和H3N2亚型分别为16份、1份和20份,其它3份样品同时含有H1N1和H3N2亚型猪流感病毒,和鸡胚分离病毒结果100%一致。试验证明建立的猪流感病毒H1N1、H1N2和H3N2亚型多重RT-PCR诊断方法是一种特异敏感的诊断方法,可用于临床样品的早期快速诊断和分型。     

包被植物乳杆菌和屎肠球菌对肉鸡生长性能、免疫和抗氧化功能以及肠道菌群的影响

本试验旨在研究双层包被植物乳杆菌和屎肠球菌对肉鸡生长性能、免疫和抗氧化功能以及肠道菌群的影响。选取144只体重相近、健康的1日龄爱拔益加(AA)肉公鸡,随机分为4个组,每组6个重复,每个重复6只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮基础上添加1 g/kg包被植物乳杆菌(活菌数为1.0×1010CFU/g)(ELP组)、1 g/kg包被屎肠球菌(活菌数为1.0×1010CFU/g)(EEF组)和1 g/kg包被植物乳杆菌+1 g/kg包被屎肠球菌(ELE组)的饲粮。试验期42 d。结果表明：1)与对照组相比,试验组肉鸡1～21日龄末重和平均日增重(ADG)显著提高(P<0.05),其中ELP组末重和ADG比对照组分别提高了12.77%和13.86%。2)21日龄,与对照组相比,ELE组肉鸡血清免疫球蛋白G和免疫球蛋白A(IgA)含量显著提高(P<0.05),EEF组血清IgA和免疫球蛋白M含量显著提高(P<0.05);21和42日龄,与对照组相比,试验组肉鸡血清肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-2和白细胞介素-6含量显著降低(P<0.05),血清白细胞介素-...     

我国发现由甘薯褪绿矮化病毒和甘薯羽状斑驳病毒协生共侵染引起的甘薯病毒病害

甘薯病毒病害(Sweet potato virus disease,SPVD)是由毛形病毒属(Crinivirus)的甘薯褪绿矮化病毒(Sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)和马铃薯Y病毒属(Potyvirus)的甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)协生共侵染甘薯引起的病毒病害[1].     

新疆奎屯河流域地下水资源开发引起的生态环境问题及对策

简要介绍了奎屯河流域水文地质条件及"三水"转化特征,分析了地下水资源开发利用现状,进而对不合理开发利用地下水,引发的一系列生态环境负效应,如:区域地下水位下降,植被退化,土地沙化,土地盐渍化等进行了剖析。针对存在的问题,提出了奎屯河流域地下水资源合理开发利用对策及维持地下水位的生态意义。     

贵州主栽草莓品种的离体快繁技术

对4个贵州主栽草莓品种离体快繁体系进行了研究。结果表明，在MS附加0．5mg／LBA与0．2mg／LIBA的培养基中4个品种的茎尖外植体萌发率均在80％以上；增殖培养以MS培养基附加0．5～1．0mg／LBA和0～0．1mg／LNAA效果最佳，千禧获得的增殖系数大于其它3个品种；在1／2MS中，组培苗的生根率在95％以上，千禧和章姬平均生根数大于红颊和丰香，平均根长差异不大；生根苗经驯化移栽后成活率均在92％以上．     

雌激素受体在鸡与鹌鹑属间杂交早期胚胎中的差异表达及其作用

旨在研究雌激素受体（ER）与鸡-鹌鹑属间杂交早期胚胎发育、性别分化的关系。人工授精获得鸡（♂）-鹌鹑（♀）杂交种蛋，按照鸡的孵化标准同批入孵，连续采集早期活胚（2．75、3．00、3．25、3．50、3．75、4．00、4．25、4．50、4．75、5．00d），采用RT—PCR法，用Wpkci和β-actin引物进行多重PCR，鉴定早期胚胎性别；之后选取各时间点雌、雄胚胎各4枚，以β-actin为内标，测定ER mRNA相对表达丰度。雌、雄胚胎ER mRNA的发育性变化趋势基本一致，2．75～3．00d表达水平均较高；3．25d雄性表达水平显著降低（P〈0．05），雌性则极显著降低（P〈0．01）；3．50d雌、雄表达水平又回复至较高水平；3．75d二者均极显著降低（P〈0．01），此后一直维持在较低水平。不同日龄间比较，2．75～3．50d雌性ER表达高于雄性，差异极显著（P〈0．01）。杂交胚胎性分化时间大致开始于胚胎发育的第2．75～3．50d，性分化期ER的异常表达可能与胚胎死亡、杂种不育有关，这一结论有待于进一步研究发育同期鸡、鹌鹑胚胎ER的表达及其功能后证实。     

致仔猪过敏性大豆抗原蛋白β-conglycinin单克隆抗体的制备与鉴定

研究以人工合成的对应于β-conglycinin分子α'亚基上的一段抗原表位肽(RPQHPER,78-84α')作为半抗原,与载体蛋白(OVA)交联后,作为免疫原制备了致仔猪过敏性大豆抗原蛋白β-conglycinin的单克隆抗体(Mab 6G4),并应用酶联免疫吸附等方法进行鉴定。结果表明,制备的单抗Mab 6G4属于IgG1;该抗体能与大豆β-conglycinin特异性结合,IC50为4.7 ng/mL,并对β-conglycinin表现出较强的亲和力,亲和常数达6.9×109 L/mol。因此,制备的单克隆抗体Mab 6G4为分析大豆制品中β-conglycinin的含量及探讨β-conglycinin对仔猪的致敏机理提供了一个潜在的分析工具。     

RNAi抑制PrP表达载体的构建及其在PrP功能研究中的初步应用

本文旨在构建有效抑制朊蛋白（Prion protein，PrP）表达的重组质粒，并以此为工具控制PrP表达，从而探讨PrP对细胞SOD活性的影响。设计并化学合成1对含有发夹结构的寡核苷酸片段（shPrP），退火后与表达载体pG-super（Hairpin siRNA expressing vector）定向连接，构建重组质粒pG-super-shPrP。对重组子进行PCR鉴定，测序正确后，脂质体法转染C6细胞，采用实时荧光定量RT-PCR检测PrP mRNA的表达水平，以验证pG-super-shPrP的抑制效率；结果表明：重组质粒pG-super-shPrP构建成功，且显著降低C6细胞PrP mRNA表达（P〈0．05），抑制效率为34．2％。利用pG-super、pG-super-shPrP分别转染C6细胞，并检测细胞SOD总活性及SOD表达水平，探讨PrP对细胞SOD活性的影响及其作用机制，结果表明PrP促进细胞SOD的活性（P〈0．01），但对细胞SOD的表达量无影响，即PrP对SOD活性的促进作用与SOD1的表达量无关。本研究在成功构建了PrP的RNA干扰表达质粒的基础上，利用此质粒，在细胞水平上揭示了PrP对细胞SOD活性的促进作用。