赤羽病病毒核衣壳蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

以纯化的重组赤羽病病毒核衣壳蛋白作为诊断抗原，建立了检测牛血清特异性核衣壳蛋白抗体的间接ELISA方法，初步组装成便于现地使用的试剂盒。经对试验条件进行优化，确定最佳抗原包被量为每孔1μg（100μL），样品稀释度为1：100，兔抗牛IgG辣根过氧化物酶标记抗体稀释度为1：8000。经特异性试验和重复性试验证明该方法特异性高、重复性好。应用初步研制的间接ELISA试剂盒和微量中和试验法分别对云南省的89份、内蒙古的100份牛血清样本进行了检测，以中和试验为参照，经统计学处理，得出检测临界值分别为0．411和0．303，2种方法的符合率分别为72．7％（56／77）和91．4％（85／93）。试剂盒在37℃保存3d，对敏感性无明显影响。     

猪链球菌2型生物被膜的生物学特性研究

通过细胞培养板法研究了猪链球菌2型生物被膜的生物学特性。结果显示:大部分猪链球菌均具有不同程度形成生物被膜的能力,其中3株(3/15)形成能力较强;猪链球菌生物被膜的成熟约需60 h,培养基中葡萄糖浓度是影响生物被膜形成的重要因素;生物被膜中的多糖含量显著高于浮游菌;氨苄青霉素钠和阿莫西林对这3株猪链球菌生物被膜的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)均高于游离菌约2 500倍;扫描电镜观察发现,生物被膜内猪链球菌彼此黏连,形成致密的三维立体结构。对猪链球菌生物被膜生物学特性的研究为进一步揭示生物被膜的形成机制、耐药机理,以及清除生物被膜等提供理论依据。     

利用PCR方法检测锦鲤疱疹病毒3个主要靶基因

为建立锦鲤疱疹病毒(KHV)多靶基因PCR检测方法,本实验将KHV接种鲤鱼鳍条细胞,收获病变细胞悬液,提取DNA,根据GenBank中登录的KHV基因序列及出入境检验检疫行业标准推荐的基因(ORF7),设计合成3对特异性引物,针对胸苷激酶基因(TK)、聚合酶基因(Sph)和ORF7基因进行PCR检测.通过优化后的反应体系进行特异性、敏感性试验和样品检测.结果表明:3对引物能够分别特异性扩增出409bp、292 bp和484bp片段;敏感性试验表明对TK基因检测的敏感性高于Sph和ORF7基因,其最低检测量为1.9×106copies/μL;采用优化的3个PCR方法对8个有临床症状的样品进行检测,其中3份样品的3个基因PCR扩增结果均为阳性.因此,本研究选取的3个基因均可用于KHV的检测及确证实验.     

PRRSV缺失变异毒株JL/07/SW株的分离鉴定及序列分析

分离并鉴定了1株猪繁殖与呼吸综合征病毒,经病毒生物学特性测定、血清学试验、病毒基因鉴定,确定为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒,将其命名为JL/07/SW株.根据猪繁殖与呼吸综合征病毒VR-2332株及变异毒株的核苷酸序列,设计合成了针对NSP2变异序列、N基因以及GP5基因的引物,扩增出正确的序列,经测定的序列比对后,发现该毒株为美洲型变异毒株,NSP2上缺失了30个氨基酸,而GP5和M基因相对保守.     

猪结合珠蛋白基因的克隆、原核表达及单克隆抗体制备

本研究的目的在于利用重组猪结合珠蛋白(Haptoglobin,Hp)制备特异性单克隆抗体.以梅山猪肝脏总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增猪hp基因,将其克隆到原核表达栽体pGEX-KG和pET-32a上,转化至E.coli BL21中,IPTG诱导下高效表达重组GST-Hp和HIS-Hp蛋白.用纯化的重组GST-Hp免疫BALB/c小鼠,用纯化的HIS-Hp作为包被抗原进行间接ELISA检测,通过淋巴细胞杂交瘤技术筛选阳性细胞株,制备单克隆抗体.结果表明筛选到2株高效分泌抗猪Hp单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为3B4和3C8.Western-blot和间接ELISA检测均表明制备的单克隆抗体具有良好的特异性.     

ICR小鼠Mxl基因的克隆及组织表达

为了对ICR小鼠的Mxl基因序列特征进行比较分析,揭示该基因的组织特异性表达规律,用干扰素诱导剂poly(I)/(C)诱导小鼠腹腔巨噬细胞,应用RT-PCR技术克隆小鼠Mxl基因全长编码区序列,并用半定量RT-PCR方法研究该基因在组织中的特异性表达规律.结果显示,从雌性ICR小鼠腹腔巨噬细胞中克隆的Mxl基因的CDS...     

胚泡着床前后母胎免疫调节的研究概况

母体容纳携带一半异体抗原的胎儿而成功妊娠,涉及母胎之间复杂的免疫调节,其中胚泡着床起着至关重要的作用,本文从着床期间激素、细胞因子以及一些免疫分子的角度,对近年来胚泡着床前后母胎界面免疫调节的研究情况进行了概述。     

猪骨调素基因多态性对产仔性状的影响

本文研究了骨调素基因对苏钟猪和二花脸猪繁殖性能的影响.93头母猪660多窝产仔数记录被用来分析骨调素基因型与总产仔数和产活仔数的关系.结果表明,二花脸猪经产总产仔数基因型158/142和170/152、168/140之间差异显著(P<0.05),产活仔数基因型158/142和170/152之间差异显著(P<0.05).苏钟猪头胎产活仔数基因型164/168和140/152、142/168、152/170之间差异显著(P<0.05),经产总产仔数基因型152/170和130/142之间差异显著(P<0.05).     

不同稻秸基质处理对高羊茅无土草皮成坪天数及坪用价值的影响

 运用五因素二次正交旋转组合设计法,研究不同处理稻秸基质（处理Ⅰ：稻秸＋ 猪粪便＋ 秸秆腐熟剂;处理Ⅱ：稻秸＋猪粪便;处理Ⅲ：稻秸＋ 尿素＋ 秸秆腐熟剂;处理Ⅳ：稻秸＋ 尿素）和不同基质厚度（１０,１５,２０,２５ 和３０ｍｍ）对草皮成坪天数的影响。结果表明,对成坪天数影响最大的是处理Ⅰ基质,其次是基质厚度,再者是处理Ⅲ基质,其他２种基质对成坪天数的影响最小。在坪用价值为限定条件下,得出最优基质组合,其配比为处理Ⅰ 为６００ｇ,处理Ⅱ为６００ｇ,处理Ⅲ 为０ｇ,处理Ⅳ 为６００ｇ,基质厚度为２０ ｍｍ,成坪时间为３６．３３ｄ,坪用价值权重值为１０８．６１。     

高压静电技术二次成熟牛肉效果研究

本试验选取6具肉牛胴体采用配对试验设计,通过带有高压静电(HVEF)装置的冰箱和普通冰箱二次成熟牛外脊部位肉样,研究高压静电二次成熟牛肉对牛肉品质的影响。结果表明,高压静电组较常规处理组肉色鲜红,二次成熟48h、72h、96h肉色值L*均显著高于常规处理组(P<0.05),a*值均显著低于常规处理组(P<0.05);两组在24h、48h、72h、96h测定的pH值差异不显著(P>0.05);失水率较常规处理组牛肉低15.56%,在48h、72h、96h时两组均差异显著(P<0.05);熟肉率较常规处理组提高1.07%,成熟24h、48h、72h、96h四个阶段,两组之间熟肉率差异均不显著(P>0.05);剪切力值较常规处理组低6.24%,在24h时两组差异不显著(P>0.05),48h、72h两组差异极显著(P<0.01),成熟96h两组差异显著(P<0.05)。综上,高压静电对分割后的牛肉在0~4℃条件下二次成熟具有改善作用。