猪RUVBL2真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

RUVBL2(RuvB-like 2)蛋白是进化上高度保守AAA+(ATPases Associated With Diverse Cellular Activities,AAA)家族成员之一,CHO(Chinese Hamster Ovary)细胞被广泛地用于表达重组DNA蛋白。为探究猪睾丸组织的RUVBL2基因是否能够在CHO细胞中表达,本实验以猪睾丸组织的cDNA为模板,PCR扩增RUVBL2目的基因,并将其克隆至pIRES2-EGFP(Mammalian Expression Vectors pIRES2-EGFP)载体上,进一步转化到DH5α中,再进行PCR、酶切及测序鉴定;将重组质粒转染到CHO细胞中,再进行荧光、RT-PCR、Western blot检测。结果显示:PCR、酶切及测序都证实了RUVBL2基因正确地插入到了载体质粒pIRES2-EGFP的多克隆位点;荧光、RT-PCR、Western blot也证实了RUVBL2基因在CHO细胞中的成功表达。本实验成功构建了猪的pIRES2-EGFP-RUVBL2真核表达载体,并证实了猪睾丸组织中的RUVBL2基因能够在CHO细胞中表达。     

北方杂交粳稻恢复系育种研究进展

简要回顾了北方粳型杂交水稻恢复系的研究历史,综述了粳稻恢复系在品质、产量、抗性等方面的研究进展,对当前杂交粳稻恢复系育种存在的问题进行分析,并指出今后恢复系选育的目标及分子育种技术将起到的重要作用。     

乡土树种概念及其简易判定

乡土树种含义明确,尽人皆知,却难于判定。为了提高乡土树种的判定能力,从分析乡土树种概念及其应用价值入手,研究了树种俗名的命名原因、命名方式,认为俗名具有与文献记载相同的记录价值,可以用作乡土树种判定标准,并简略定义乡土树种为土生土长有土名的树种。最后概要介绍,在走访调查俗名的过程中,要注意避免方言差异引起的误听误记。     

天津北大港湿地鸭科鸟类调查

为了解天津北大港湿地的鸭科鸟类种类,2004年11月~2008年3月采用定位观察和线路调查相结合的方法,用计数法和网格计数法取得鸟类种类和数量,并对所得数值采用频率指数估计法,结果为鸭科鸟类8属24种。旅鸟24种,占总种数的100%;冬候鸟4种,占总种数的16.7%;留鸟1种,占总种数的4.2%。古北种13种,占总种数的54.2%;全北型9种,占总种数的37.5%;古北-东洋种2种,占总种数的8.3%。明确豆雁(Anser fabalis)、赤膀鸭(Anas strepera)、绿翅鸭(Anas crecca)、绿头鸭(Anas platyrhynchos)、斑嘴鸭(Anas poe-cilorhyncha)和斑头秋沙鸭(Mergellus albellus)6种为优势种。Shannon-Weiner多样性指数(H′):春季>秋季>冬季>夏季。有国家二级保护鸟类4种。     

林下轮牧放养对优质肉鸡屠体性状及肉品质的影响

试验检测分析了林下轮牧放养模式下岭南黄羽肉鸡的屠体性状、肉品质及脂类代谢相关血液生化指标,结果显示,试验组半净膛率、全净膛率极显著高于对照组(P<0.01),屠宰率、腿比率、肌胃率均优于散养鸡(P>0.05),腹脂率降低12.2%(P>0.05);试验组胸肌肉色亮度值比对照组提高11.2%(P<0.01),红度值、黄度值无显著差异;胸肌蛋白含量比对照组提高2.3%(P<0.01),脂肪含量提高11.1%(P<0.05),水分含量无显著差异(P>0.05);试验组血清TC水平比对照组降低35.9%(P<0.01),TG、LDL-C、HDL-C无显著差异.试验结果表明,林下种植牧草环境下轮牧放养,可显著提高优质肉鸡屠宰性能,改善肌肉品质,调节脂类代谢,值得进一步研究和推广.     

氨气对肉鸡生产性能、血氨和尿酸的影响研究

为探讨氨气对肉鸡生产性能、血氨和尿酸的影响,选择240只1日龄从肉公鸡,随机分成4个处理组,分别饲养在4个独立的、环境可控制的实验舱内.4个环控仓氨气浓度设计如下:0～3周龄分别为0、13、26和52 mg/kg;4～6周龄分别调整为0、20、40和80 mg/kg.结果:氨气对0～3周龄肉鸡的ADG、ADFI、死亡率均无显著影响(P>0.05),但52 mg/kg氨气组可显著降低饲料转化效率(P<0.05);在4～6周龄,80 mg/kg氨气组可显著降低肉鸡的ADG和ADFI(P<0.05).料肉比和死亡率随氨气浓度的提高有上升趋势,但差异不显著.血氨浓度随着环境中氨气浓度的增加而逐渐升高,但氨气浓度对血清尿酸无显著影响(P>0.05).试验显示,肉鸡在0～3周龄舍内氨气浓度应不超过13 mg/kg,在4～6周龄应不超过20 mg/kg.     

靶向PB2基因的特异性siRNA抑制禽流感病毒(AIV)复制

根据siRNA设计原则,设计并合成5对靶向禽流感病毒（AIV）PB2基因的siRNA（PB2374,PB2665．PB2936,PB21031和PB21233）,将其转染MDCK细胞,分别于转染前和转染后感染H5N1禽流感病毒A／Goose／Guang dongl／96株;在转染后24h、48h和72h分别收集上清液;通过血凝试验（HA）和Real-timePCR检测siRNA抑制A1V增殖的效果。血凝试验结果表明：所设计的5对siRNA中,PB2374抑制AIV增殖的效率为68％～71％,PB2963抑制AIV增殖效率为78％～81％;Real-timePCR检测到PB2374转染组PB2基因的转录水平与对照组比较降低3～3．3倍,PB2963转染组PB2基因的转录水平降低3．9～4．2倍。无论siRNA是先于还是迟于AIV感染,这两对siRNA都能明显地抑制AIV的增殖;本研究结果为开发抗AIV治疗制剂和动物机体抗AIV研究奠定了基础。     

金黄色葡萄球菌对奶牛乳腺上皮细胞Wnt/β-catenin信号通路和相关修复因子的影响

采用金黄色葡萄球菌侵袭原代奶牛乳腺上皮细胞,观察该病原菌对乳腺上皮细胞Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白和相关修复因子EGFR、TGF-β3和VEGF基因mRNA表达的影响。金黄色葡萄球菌以MOI=1∶1的比例接种奶牛乳腺上皮细胞,分别作用0,15,30,45,60,120,240 min,采用Western blot法检测乳腺上皮细胞β-catenin、Cyclin D1及c-Myc蛋白表达水平;免疫荧光法检测β-catenin的表达及核易位;荧光定量PCR检测EGFR、TGF-β3和VEGF基因mRNA表达。结果显示,β-catenin蛋白在45,60,120 min表达量升高,与0 min相比差异显著(P<0.05);Cyclin D1蛋白在45,60,120和240 min表达量升高,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01);c-Myc蛋白在15,30,60,120,240 min表达量升高,差异极显著(P<0.01)。修复相关因子EGFR、TGF-β3和VEGF基因mRNA的表达量在30 min均出现极显著升高(P<0.01),且VEGF基因mRNA在45,60,120和240 min均呈现极显著升高(P<0.01),EGFR基因mRNA表达量在30,45和60 min时表达量极显著升高(P<0.01)。结果表明,金黄色葡萄球菌侵袭奶牛乳腺上皮细胞后,诱导Wnt/β-catenin信号通路的转导和修复因子EGFR、TGF-β3和VEGF基因转录,该信号通路和修复因子可能参与金黄色葡萄球菌导致的炎症和细胞损伤的修复过程。     

表达RGD和MEL重组沙门氏菌的构建及其对B16细胞凋亡作用的研究

为研究融合表达肿瘤靶向肽(RGD)和蜂毒肽(MEL)双基因重组减毒沙门氏菌对小鼠黑色素瘤B16细胞的体外抑瘤作用,本实验将RGD-MEL基因片段克隆至pEGFP-N1载体,将重组载体导入减毒沙门氏菌LH430,构建了重组沙门氏菌LH430/pEGFP-RGD-MEL,经PCR技术、质粒双酶切鉴定后采用阳性重组菌株侵染体外培养的小鼠黑色素瘤B16细胞,提取细胞总RNA经反转录后采用PCR检测目的基因RGD-MEL转录情况,western blot检测目的蛋白RGD-MEL以及凋亡蛋白Caspase-3、Bcl2、Bax的表达;流式细胞术检测B16细胞凋亡情况。结果显示:导入RGD-MEL基因的减毒沙门氏菌LH430侵染B16细胞后,目的基因RGD-MEL高效表达;经重组菌株侵染的B16细胞凋亡蛋白Caspase-3、Bcl2、Bax表达水平均显著增高(p<0.05);重组沙门氏菌诱导B16细胞的凋亡作用较PBS组显著增强(p<0.05)。本研究为细胞穿膜肽和细菌联合治疗肿瘤提供实验支持,并为后续动物试验奠定了研究基础。     

利用信息肽诱导和Cre/LoxP系统构建猪链球菌基因缺失株

为建立一种高效的猪链球菌(Streptococcus suis)基因缺失方法,本研究利用信息肽诱导DNA片段转化和Cre/LoxP系统去除抗性基因这两种技术,通过在S.suis 05ZYH33的ssu05_1921基因上、下游片段和壮观霉素抗性基因(spc)片段之间引入LoxP位点,采用信息肽GE9诱导构建的DNA片段转化S.suis并发生重组,经抗性筛选快速获得spc替代ssu05_1921基因的缺失株;进一步引入pSET6s/P_tufA-cre质粒表达Cre重组酶作用于LoxP位点,去除spc基因,产生无痕ssu05_1921基因缺失株,经测序和RT-PCR验证缺失正确。本研究建立的该方法简单、快捷、阳性率高,为构建S.suis基因缺失株、研究S.suis致病机制提供了新的选择。