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建立了一种基于荧光显色的禽呼肠孤病毒(ARV)环介导等温扩增(LAMP)检测方法.该检测方法使用针对ARV的p10基因8个区域的6条LAMP引物,能够在等温(63℃)条件下1h内完成反应,具有良好的敏感性和特异性,最低能够检出102个拷贝的病毒,敏感性比普通PCR高100倍,而对其他病毒检测结果为阴性.在荧光显色中分别应用SYBR Green Ⅰ和钙黄绿素作为显色剂,其结果与琼脂糖凝胶电泳一致.在对80份临床样本的检测中,使用LAMP和PCR检测出阳性样本的数量分别为68份和55份.因此,基于荧光显色的LAMP方法可以应用于ARV的快速检测,具有在科研机构、基层实验室特别是检测现场推广和应用的潜力. 相似文献
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@@进入新世纪以来,伴随SARS、禽流感和猪链球菌病等疫情在全球范围内的传播,对世界各国人民的身体健康构成极大威胁。因此,国家逐步加大对动物疫病的防控,相继颁布了《中华人民共和国动物防疫法》《动物检疫管理办法》等法律法规,使我国动物防疫和检疫工作走上了有法可依、有章可循的规范化、法制化轨道。屠宰检疫是动物检疫工作的重要组成部分,是保证人民群众食肉安全的重要手段。猪肉及猪产品是广大群众餐桌上不可或缺的食品,国家为保证生猪产品质量安全,保障人民身体健康对生猪屠宰实行定点屠宰、集中检疫,从而使重大疫病的发生和流行得到有效控制。 相似文献
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采用RT-PCR扩增出大小409bp猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因(PRRSV N gene),将该基因克隆到表达载体pGEX-KG,构建重组表达载体pGEX-KG-N,转化表达菌株BL21(DM3)诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组N蛋白获得了高效表达,融合蛋白相对分子质量为41 000,并具有良好的免疫学活性。扩大诱导培养,收集菌体,提取包涵体,用GST-Protein Purtification Kit亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳检测纯度达到90%以上,可满足诊断抗原质量要求。用纯化PRRSV重组核衣壳蛋白GST-N为包被抗原,建立检测PRRSV血清的间接ELISA诊断方法,并组装ELISA试剂盒。优化后抗原最适包被质量浓度为2.5mg/L;血清最适稀释度为1∶100;对血清样本检测临界值为0.224;与美国IDEXX公司的HerdChek ELISA试剂盒符合率为92%,特异性为95%,敏感性为90%;与猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪乙型脑炎病毒、猪圆环病毒、猪瘟病毒等常见猪繁殖障碍病标准阳性血清无交叉反应。ELISA试剂盒批内和批间变异系数分别为3.44%~6.34%和5.04%~7.64%。置4℃条件保存12个月,试剂盒稳定性无明显改变。该试剂盒对350份临床疑似血清检出率为88.6%。研制的ELISA试剂盒为PRRSV临床血清抗体检测及流行病学调查提供了技术手段。 相似文献
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我们将日本对虾进行实验室桶养作模拟内陆养殖试验。发现日本对虾可以顺利地养殖到体长5-7厘变,然后短人存活率急剧降低,这一现象与我们海边虾塘养殖所得到的结果极为一致,我们称之为“5-7”现象。 相似文献
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牛皮蝇蛆是危害我国畜牧业发展最为严重的寄生虫病之一。本试验将已感染牛皮蝇蛆的171头肉牛为对象,随机分成5组。将伊维菌素注射液分别以高、中、低三种剂量对不同组别的肉牛进行颈部皮下注射治疗和观察,同时注射等体积生理盐水作为阴性对照组,饲喂虫克星粉剂作为阳性对照组进行对比试验。结果显示,0.2 mg/kg体重(中剂量组)为伊维菌素皮下注射的最佳剂量,对皮蝇蛆的治愈率达97.82%(45/46),而以0.2 mg/kg体重口服虫克星粉剂的对照组治愈率达60.71%(17/28),且统计分析差异显著(P0.05)。试验表明,中等剂量的伊维菌素注射液对牛皮蝇蛆的防治安全可靠且效果显著,为临床治疗肉牛皮蝇蛆提供理论参考。 相似文献