实时荧光定量PCR对瘤胃纤维分解菌定量方法的构建

试验构建了白色瘤胃球菌、黄色瘤胃球菌及产琥珀酸丝状杆菌等3种瘤胃纤维分解菌实时荧光绝对定量PCR的标准品及标准曲线,以用于纤维分解菌的定量测定。提取瘤胃微生物总DNA,以各菌特异性引物进行PCR扩增,回收纯化PCR产物,与pMD18-T Vector连接并转化到大肠杆菌。用氨苄青霉素培养基筛选阳性重组质粒,提取含目的片段质粒DNA,通过PCR及测序鉴定重组质粒。根据OD值确定浓度,将梯度稀释的质粒作为模板,进行荧光定量PCR反应做出标准曲线。结果表明:所构建的3条标准曲线具有很高的相关性(R2>0.999),并获得了高扩增效率产物(白色瘤胃球菌为101%、黄色瘤胃球菌为98.0%、产琥珀酸丝状杆菌为97.7%),说明成功构建了瘤胃纤维分解菌实时绝对定量PCR的标准品和标准曲线,为定量研究瘤胃纤维分解菌奠定基础。     

青土湖水面形成区土壤颗粒组成与化学特性变化

青土湖输水作为石羊河流域治理的一项关键措施,对保护湖区水资源和生态环境具有重要意义。在距青土湖水面边缘东南方向0-450 m的10个样点中分3层取0-60 cm土样,测定土壤粒径的质量百分比与全氮、全磷、全钾和电导率,分析青土湖水面形成后土壤颗粒组成与化学特性变化。结果表明, 随着离水面边缘距离的增加,土壤颗粒与化学特性呈有规律的增减变化,土壤粘粉粒组成与其全磷、全钾之间存在正线性相关。青土湖水面形成加剧了距水面边缘0-150 m处的土壤理化性质变化;土壤细粒及养分出现富集,分别在距水面边缘100-150 m和300 m处达到最大值。因此,土壤养分与土壤细物质的良好相关性表明,土壤粘粉粒变化可作为反映该区域土壤性状变化和评价衡量水面形成后土壤恢复程度的定量指标之一。     

丁酸梭菌对慢性肾衰竭犬肠道菌群及血清小分子尿毒素含量的影响

本试验旨在研究丁酸梭菌对慢性肾衰竭(CRF)犬肠道菌群及血清小分子尿毒素含量的影响。选取20条2岁左右的雄性贵宾犬,随机分成4组:假手术对照组(CL组)、模型组(MD组)、低剂量丁酸梭菌组(LCB组)和高剂量丁酸梭菌组(HCB组),每组5只。CL组只做腹腔打开手术,其余3组肾动脉结扎制作CRF模型。造模成功后,LCB组和HCB组分别按每天0.5、1.0 g/kg BW的剂量灌喂丁酸梭菌,进行为期4周的干预。检测血清和粪便尿素氮(UN)、肌酐(Cr)和硫酸吲哚酚(IS)含量,并对肠道菌群16S rDNA进行高通量测序。结果表明:1)试验结束时(第4周),LCB组和HCB组的血清UN、Cr和IS含量极显著低于MD组(P<0.01),但极显著高于CL组(P<0.01);与LCB组比较,HCB组的血清UN、IS含量显著降低(P<0.05),血清Cr含量极显著降低(P<0.01)。试验结束时,HCB组的粪便UN、Cr含量均显著低于MD组(P<0.05),CL组的粪便UN、Cr含量均显著低于MD组、LCB组和HCB组(P<0.05)。2)饲喂丁酸梭菌均降低CRF犬肠道菌群的α多样性,HCB组的Chao1指数、Shannon指数显著低于MD组(P<0.05)。主坐标分析(PCoA)结果显示4组样本间发生明显聚类。3)在门水平上,MD组的肠道放线菌门(Actinobacteria)和变形菌门(Proteobacteria)的相对丰度显著高于CL组(P<0.05),LCB组和HCB组的肠道Actinobacteria、Proteobacteria的相对丰度均显著低于MD组(P<0.05);在属水平上,饲喂丁酸梭菌可降低CRF犬肠道变形杆菌属(Proteus)、埃希氏菌属(Esche-richia)、肠杆菌属(Enterobacter)、普氏菌属(Prevotella)、放线菌属(Actinomyces)和涅斯捷连科氏菌属(Nesterenkonia)的相对丰度。LEfSe分析发现,CRF犬肠道菌群有19个具有差异的生物标志物,主要集中于Actinobacteria、Proteobacteria,饲喂丁酸梭菌可减少CRF犬生物标志物的差异。4)Spearman相关性分析显示,血清UN、Cr和IS含量与Enterobacter、Proteus和Escherichia相对丰度存在较强的正相关关系,与乳杆菌属(Lactobacillus)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)相对丰度存在较强的负相关关系。由此可见,CRF犬肠道菌群紊乱与血清小分子尿毒素含量之间存在相关性,丁酸梭菌可通过调节CRF犬肠道菌群结构,促进血清小分子尿毒素的清除,以每天1.0 g/kg BW添加量为宜。     

有机硒和维生素E对寿隐杂交鸡抗热应激性能的影响

通过向日粮中添加不同水平有机硒(0,0.15mg/kg)和维生素E(10,30,100IU/kg),测定热应激不同阶段试验鸡肝脏、肾脏及血清中丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果表明,日粮中添加有机硒和维生素E可明显降低肝脏、肾脏及血清中MDA的含量(P<0.05),提高GSH-Px活性,增强机体的抗氧化能力,提高试验鸡的抗热应激性能。     

双肌性状形成的分子机理及其研究进展

肌肉生成是一个复杂的正负调控过程,双肌品种以其特有的饲料报酬高、瘦肉率高’、生长快在近几年来逐步受到育种专家的重视。研究表明,肌肉生长抑制素(mysatatin,MSTN)缺失或突变会导致肌肉过度生长或肥大,即双肌现象;双肌性状受常染色体上一对等位基因控制,存在主基因效应。现从肌肉生长机理入手,分别从不同家畜双肌现象阐明该性状的分子机理及其应用前景。     

结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6、CFP10基因的克隆、鉴定及其原核表达

以人型结核分枝杆菌 H37RV株基因组 DNA为模板 ,应用 PCR法对 ESAT- 6和 CFP10基因进行扩增 ,产物经纯化后与载体 PMD18- T连接、转化及酶切鉴定 ,亚克隆到原核表达载体 PGEX- 6 P- 1,构建原核重组表达质粒 ,转化入大肠杆菌 BL2 1中 ,以 1mmol/L IPTG诱导 ,进行 SDS- PAGE电泳。结果表明 ,ESAT- 6和 CFP10基因表达的融合蛋白相对分子质量分别为 32 0 0 0和 36 0 0 0 ,与实测相符。重组结核杆菌分泌蛋白 ESAT- 6和 CFP10的成功表达为结核病诊断及重组疫苗的构建打下了基础     

二丁酰环腺苷酸的合成与性质研究

以ATP为原料采用化学方法合成了dbcAMP及其钠盐 ,并对其理化性质和吸收特性进行了研究。经质谱分析 ,其结构为C18H2 3 N5O8PNa ,分子量为 4 90 .0 ;经紫外光谱测定其含量为 96 .0 % ,产品的得率为 85 .6 %。dbcAMP钠盐为白色粉末 ,可溶于水与乙醇 ,对热和酸碱比较稳定。经饲料添加和皮下注射dbcAMP检测其经消化道和皮下吸收的性能。通过测定饲喂和皮下注射dbcAMP后 0 .5h、1～ 96h不同时间内血液dbcAMP的浓度表明 ,饲料添加在 3h内达到最大浓度 84 .75pmol/mL ,皮下注射在 2h内达到最大浓度 92 .96pmol/mL ,之后血液中dbcAMP的浓度逐渐下降 ,在 96h达到较低水平。     

用套式PCR方法对几种猪用冻干疫苗的PCV2检测

参照Genbank已发表的猪圆环病毒2型的基因序列,取其比较保守的基因片段ORF2,利用引物设计软件Oli-go5.0设计两对PCV2型特异的引物,其中第一对引物扩增跨度为ORF2全基因片段,长度为702 bp,第二对引物扩增ORF2中间的一个小片段,跨度大小为494 bp.首先用第一对引物扩增阳性DNA,阳性DNA的浓度从10-1稀释到10-11,然后以第一次PCR产物为模板,用第二对引物进行PCR,发现这种套式PCR的方法比用普通PCR灵敏度提高102倍.同这种套式PCR方法对广东省市场上出售的几种猪用弱毒疫苗进行猪圆环病毒2型检测,结果发现这几种疫苗全部为阴性,本实验说明目前广东市场上出售的弱毒疫苗在制作过程中没有受到PCV2的污染,解除了广大猪场主的顾虑.     

狂犬病毒中和抗体检测试验中病毒回归试验的重要性

狂犬病毒中和试验的病毒回归试验表明,病毒攻毒液的实际剂量与理论剂量不完全一致.建议在新版<中华人民共和国兽用生物制品质量标准>中增加对病毒攻毒实际剂量范围的规定,以使结果的判定更为合理.     

鸭大肠杆菌的药物敏感性试验

采用纸片扩散法测定了14株鸭大肠杆菌对10种抗菌药物的敏感性,结果鸭大肠杆菌对头孢唑啉、头孢噻肟、丁胺卡那霉素最为敏感,敏感率均为100%;其次为庆大霉素,敏感率为78.6%;对其他抗菌药物均产生不同程度的耐药性,耐药性最为严重的是四环素、复方新诺明及多西环素,耐药率分别为92.9%、85.7%、78.6%,对阿莫西林、氯霉素、环丙沙星的耐药率分别为57.1%、50.0%、64.3%;78.6%的菌株对10种抗菌药物表现为多重耐药性.耐阿莫西林菌株经碘-淀粉测定法测定均为产β-内酰胺酶菌株,阿莫西林对它们的最小抑菌浓度范围为256～ 1 024 mg/L.