J亚群禽白血病SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种能够快速、灵敏和特异地检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,本研究以ALV-J原型病毒株HPRS-103的pol基因3′端与gp85编码基因之间的保守区域(5 258 bp～5 802 bp)为检测目的片段,构建重组质粒并作为靶基因,通过对其浓度、引物浓度和退火温度的优化,建立了ALV-J SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法.结果显示该方法的最低检测限度为2.36×102拷贝/μL,比普通PCR高100倍;与其他禽源病毒无交叉反应;批内和批间变异系数均小于5％.表明本研究建立的方法具有良好的特异性、稳定性和灵敏性.采用该方法对100只临床病鸡进行检测,ALV的检出率为44％.随机选择10只感染阳性鸡,检测病毒基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中的分布与表达水平,结果表明ALV-J在各主要脏器中均有分布,但以肾脏中的病毒表达量最高.     

不同离子含量饮水对杂交肉鸡生产性能的影响

本试验目的在于不同离子含量饮水与肉鸡生产性能的关系进行研究.试验采用180只1日龄的杂交肉鸡(艾维茵×罗曼),依据离子含量分为6个处理,每个处理5个重复,每个重复6只鸡.试验测定了肉鸡的增重、采食量和饲料转化率,分析14、28和42日龄肉鸡血清中相关离子的含量,测定了每周粪便的水分含量.结果表明:不同离子含量的饮水对肉鸡增重、采食量和饲料转化率均具有显著的影响(P＜0.01),血清离子含量随饮水中离子含量变化而变化,高镁和高硫酸根离子处理组肉鸡粪便中的水分含量显著提高(P＜0.01).提示饮水中离子的绝对含量与电解质平衡是上述效应的两个方面.     

基施硒钴配合肥对苜蓿生产性能的影响

经过2006-2008年为期3年在硒钴缺乏的河南省郑州市黄河滩区苜蓿(Medicago sativa L.)草地上基施硒钴配合肥料,研究对其生产性能的影响,以期改善苜蓿生长环境和提高苜蓿产量和品质。结果表明,硒钴配合基施均能够显著提高现蕾到开花期苜蓿叶面积指数和净光合能力(P<0.05),提高苜蓿单位叶面积生产干物质的速率,有利于苜蓿的花前青干草生产;在4种硒钴配施肥中,以硒量570 g/hm²、钴量762 g/hm²配施效果最显著,2年内牧草平均增产8.0%(P<0.05),种子的千粒重提高了12.5%(P<0.01),耕作层地下生物量提高了4.6%。     

一起自然保护区岩羊皮肤病的诊断

对自然保护区3只患皮肤病岩羊进行临床检查、病原分离鉴定、血细胞常规测定和病理解剖学观察,确诊为岩羊患疥螨病致死。     

实时荧光定量PCR构建朊病相关细胞因子标准品质粒和标准曲线

为能够用实时荧光定量PCR检测PrP106-126作用的鼠巨噬细胞细胞因子的表达水平,构建目的基因IL-1β、TNF-α、IL-6和内参基因β-actin的标准品质粒和标准曲线。根据GenBank中鼠基因编码区保守序列,设计特异性引物;细胞经PrP106-126作用后,提取总RNA。经反转录、PCR扩增、纯化、连接和转化后,提取质粒并测序鉴定,获得IL-1β、TNFα-、IL-6和β-actin质粒;将质粒梯度稀释,进行荧光定量PCR,获得标准曲线及回归方程。结果显示,产物溶解曲线峰值单一,引物特异性高;标准曲线相关系数r2=0.999,表明线性关系好,成功构建了目的基因和内参基因的标准品质粒和标准曲线。     

高效液相色谱-串联质谱法检测猪尿中四种β-受体激动剂残留的研究

建立了猪尿中克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和西马特罗残留检测的高效液相色谱-串联质谱方法(HPLC-MS/MS).液相色谱条件为色谱柱为XBridge C18柱(150 mm×2.1 mm,5 μm);流动相为0.1%甲酸甲醇溶液 0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱;柱温为30 ℃;流速为0.2 mL/min;进样量为20 μL.质谱条件为电喷雾离子源(ESI ),多反应监测(MRM)方式进行采集;同位素内标法定量.结果表明,四种β-受体激动剂在1～50 ng/mL浓度范围内呈现良好的线性关系,相关指数R2均大于0.998;方法检测限为0.3 ng/mL,定量限为0.5 ng/mL;从0.5、1和2 ng/mL 3个添加浓度检测结果可以看出,方法平均回收率为86.6%～110%,批内RSD为1.1%～8.4%,批间RSD为2.0%～6.2%.     

不同植物油对奶牛瘤胃液、血浆中脂肪酸及乳脂中共轭亚油酸组成的影响

为改善牛奶脂肪酸构成,提高乳脂中CLA含量,研究瘤胃液、血浆和乳脂中脂肪酸的代谢规律,探寻提高乳品质的合适途径,本试验以3头装有永久性瘤胃瘘管的经产荷斯坦奶牛为试验动物,采用3×3拉丁方设计,研究向日粮中添加不同植物油(即葵花油、亚麻油、菜籽油,3种日粮的粗脂肪含量基本相同)对奶牛瘤胃液、血浆中脂肪酸及乳脂中CLA的影响。结果表明:(1)日粮中添加3种不同植物油,葵花油组、亚麻油组乳脂中的CLA比例均显著高于菜籽油组(P<0.05),且以葵花油组最高;乳脂中PUFA的比例则是亚麻油组显著高于菜籽油组(P<0.05);(2)3组间血浆中C14∶0、C16∶0、C18∶0的比例差异不显著(P>0.05),菜籽油组C18∶1的比例显著高于亚麻油组和葵花油组(P<0.05),而后两组差异不显著(P>0.05),亚麻油组和葵花油组t11-C18∶1的比例与菜籽油组间差异均达到显著水平(P<0.05),亚麻油组和菜籽油组中C18∶2的比例差异显著(P<0.05);(3)采食添加不同植物油日粮后,瘤胃液中各种脂肪酸动态变化的平均值差异不显著(P>0.05)。总的趋势是随着时间的延长,饱和脂肪酸含量逐渐增加,而不饱和脂肪酸含量逐渐减少。瘤胃液中CLA的比例不同时间点均较低。由本研究可知,在优化奶牛乳脂肪酸构成提高CLA含量方面,以葵花油效果最好。     

四个紫花苜蓿品种对秋冬低温条件的生理适应性

通过测定4个紫花苜蓿品种根部游离脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白质、过氧化物酶(POD)的含量,研究了不同紫花苜蓿品种对低温的生理适应能力.结果表明:在不同时期,阿尔冈金苜蓿的可溶性糖、游离脯氨酸、可溶性蛋白质、过氧化物酶(POD)活性都明显高于其它品种,抗寒能力较高;品种牧歌401和驯鹿居中,三得利根部中的积累比其它品种低,三得利抗寒能力较弱.     

靶向PB2基因的特异性siRNA抑制禽流感病毒(AIV)复制

根据siRNA设计原则,设计并合成5对靶向禽流感病毒（AIV）PB2基因的siRNA（PB2374,PB2665．PB2936,PB21031和PB21233）,将其转染MDCK细胞,分别于转染前和转染后感染H5N1禽流感病毒A／Goose／Guang dongl／96株;在转染后24h、48h和72h分别收集上清液;通过血凝试验（HA）和Real-timePCR检测siRNA抑制A1V增殖的效果。血凝试验结果表明：所设计的5对siRNA中,PB2374抑制AIV增殖的效率为68％～71％,PB2963抑制AIV增殖效率为78％～81％;Real-timePCR检测到PB2374转染组PB2基因的转录水平与对照组比较降低3～3．3倍,PB2963转染组PB2基因的转录水平降低3．9～4．2倍。无论siRNA是先于还是迟于AIV感染,这两对siRNA都能明显地抑制AIV的增殖;本研究结果为开发抗AIV治疗制剂和动物机体抗AIV研究奠定了基础。     

表达新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒的筛选

将转移载体P11SF和PN11SF分别与282E4株鸡痘病毒（282E4 strain fowlpox virus，282E4FPV）和大空斑株鸡疽病毒（large plaque strain fowlpox virus，LP FPV）共转染鸡胚成纤维细胞，通过蓝斑筛选，得到4株重组鸡痘病毒rFPV282E4-SFA、rFPVLP，-SFA、rFPV282E4-SFB和rFPVLP-SFB，通过PCR和间接免疫荧光鉴定均为阳性，另外将各重组病毒分别传20代，测其遗传稳定性，结果显示均具有良好的稳定性。对SPF鸡进行免疫效力试验，攻毒后均100％保护，而对于商品鸡，保护率分别为64％、60％、52％和88％。