重组质粒pACYC184-hok/sok的构建及稳定性研究

以低拷贝质粒pACYC184为载体,将hok/sok基因插入到载体BamH Ⅰ位点,构建重组质粒pACYC184-hok/sok稳定系统,同时构建hok/sok基因缺失突变重组质粒pACYC184-hok/sok(M).通过对构建的重组菌进行连续传代和对不同代次的重组质粒进行SphⅠ酶切,分析hok/sok基因的引入对宿主细胞生长的影响.结果表明,重组质粒pACYC184-hok/sok在无抗生素筛选压力下连续传代,传至第135代时质粒稳定率仍是100%,且传代前后的质粒SphⅠ酶切图谱没有发生变化,DNA序列测定表明,插入的hok/sok基因没有发生任何突变.突变重组质粒pACYC184-hok/sok(M)传代前后的质粒SphⅠ酶切结果虽没有发生变化,但其相应的重组菌传至第15代,质粒几乎完全丢失.生长曲线的测定结果表明,与舍pACYC184重组菌生长曲线相似,pACYC184-hok/sok重组菌生长较快,而pACYC184-hok/sok(M)重组菌生长缓慢.以上结果表明,含hok/sok稳定系统,其稳定性明显高于无hok/sok稳定系统的质粒pACYC184以及突变质粒pACYC084-hok/sok(M).重组质粒pAqCYC184-hok/sok具有良好的结构稳定性和分离稳定性.     

Bad基因在黄体期绵羊生殖器官中表达的比较研究

以黄体期小尾寒羊和萨福克羊为研究对象,采用免疫组织化学技术,针对Bad基因在母羊生殖器官卵巢,输卵管和子宫中的表达与定位进行初步研究,在卵巢中Bad基因均在多数黄体细胞中表达;在输卵管宫管结合部、峡部和壶腹部的分泌细胞Bad基因均有不同程度的表达,未发现纤毛细胞Bad阳性细胞;子宫内膜腺体小泡表达Bad阳性,子宫内膜子叶、基质的阳性细胞数极少,阳性细胞呈轻度着色,显弱阳性.利用计算机图像分析技术测量小尾寒羊和萨福克羊Bad基因表达的阳性细胞率和平均光密度,Bad基因在这两种绵羊组织中的表达规律大体相似,也存在一些明显的差异:萨福克羊的黄体细胞较小尾寒羊中的细胞凋亡更明显,萨福克羊输卵管伞部和壶腹部上皮Bad阳性细胞率均高于小尾寒羊,小尾寒羊子宫内膜子叶和基质Bad阳性细胞率和平均先密度均显著高于萨福克(P＜0.01).结果表明,小尾寒羊和萨福克羊生殖器官中细胞凋亡的差异与Bad基因表达的差异,可能是造成两者繁殖力高低差异的基础.     

不同营养状态大鼠胃和小肠ERα的表达

为探讨不同营养应激对大鼠胃和小肠内雌激素受体α(ERα)表达的影响,本试验用免疫组织化学SP法分别对标准营养、高营养和低营养条件下健康雄性SD大鼠胃和小肠内ERα阳性细胞的分布和数量变化进行研究.结果发现,ERα阳性细胞在大鼠的胃和小肠内均有分布,以胃的黏膜固有层胃底腺区和小肠的固有层及黏膜下层分布为主.低营养组ERα的表达量显著低于其他组(P＜0.01);低营养恢复标准营养后,胃中ERα的表达量无明显变化,小肠中ERα的表达量极显著升高(P＜0.01);高营养组恢复到标准营养后,胃中ERα表达量显著减少(P＜0.05),十二指肠和空肠中ERα表达量极显著减少(P＜0.01),回肠无明显变化.表明ERα参与食物应激反应中胃肠道的消化和吸收和免疫调节活动.     

镉重度超标耕地饲料桑利用安全性评价研究

通过试验研究筛选出生物产量高、营养成份丰富的饲料桑品种粤桑11号,在镉重度超标耕地桑叶中镉的含量符合国家饲料卫生标准。镉重度超标耕地桑叶发酵料中镉的含量也符合国家饲料卫生标准,在饲料桑基地用桑叶发酵料配合饲料饲养生猪其肉质指标测定结果符合食品要求。研究结果表明,在镉超标耕地上可种植桑品种粤桑11号进行饲料化利用。     

谷氨酰胺对早期断奶仔猪胰腺及小肠胰蛋白酶活性的影响

选用大长北母猪所产仔猪 45头 ,2 1日龄断奶。断奶时宰杀 5头公仔猪作为哺乳对照 ,其余仔猪按公母各半随机分为 2组 ,试验组添加 1.2 %谷氨酰胺。断奶后 14d和 2 8d宰杀仔猪 ,以研究谷氨酰胺对早期断奶仔猪胰腺和小肠胰蛋白酶活性的影响。断奶后 14d,日粮中添加谷氨酰胺可极显著提高胰腺胰蛋白酶相对活性和总活性 (P<0 .0 0 1)以及比活 (P<0 .0 1) ,而对十二指肠、空肠和回肠食糜及粘膜中胰蛋白酶活性无显著影响 ;断奶后 2 8d时 ,日粮添加谷氨酰胺对胰腺、十二指肠、空肠和回肠食糜粘膜中胰蛋白酶活性均无显著影响。对照组仔猪胰腺、十二指肠和回肠胰蛋白酶活性在断奶后 14d已基本恢复到断奶时水平 ,空肠胰蛋白酶活性显著超过断奶时水平 (P<0 .0 5 ) ;断奶后 2 8d胰腺胰蛋白酶比活和总活性极显著高于断奶后 14d(P<0 .0 1) ,胰腺和回肠胰蛋白酶相对活性显著高于断奶后 14d(P<0 .0 5 )。试验组仔猪胰腺和空肠胰蛋白酶相对活性和比活在断奶后 14d极显著超过断奶时水平 (P<0 .0 1) ,达到了对照组断奶后 2 8d时酶活性水平 ;断奶后 2 8d胰腺胰蛋白酶相对活性、比活和总活性维持在断奶后 14d水平 ,而空肠胰蛋白酶相对活性和比活又降至断奶时水平。结果表明 ,早期断奶仔猪日粮中添加谷氨酰胺有助于缓解由于早期     

应用PCR检测隐孢子虫卵囊的研究

隐孢子虫病是一种重要的人畜共患原虫病。为了在临床样品中更准确、快速地检测隐孢子虫卵囊，从初步纯化的含有不同数量隐孢子虫卵囊的样品中和含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中，直接提取DNA或用DNA纯化试剂盒对提取的奶牛粪便中卵囊DNA进行纯化之后用作PCR模板，用1对人工合成寡核苷酸作为PCR引物，扩增片段大小为452bp。优化了Mg^2 浓度、引物浓度和dNTP浓度，并进行了特异性检验。建立的PCR具有隐孢子虫属特异性，不仅扩增出新鲜样品DNA提取物中的目的片段，而且扩增出放置6年之久的DNA提取物中的目的片段。样品经过初步纯化之后，最低检测值100个卵囊／ml；从含有隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中提取DNA，尔后经过DNA纯化试剂盒纯化，PCR最低检测值为10^5个卵囊/g粪便。     

我国蚕茧生产成本变化的实证分析

以时间和空间为维度,梳理了1991～2010年间我国蚕茧生产成本资料,从蚕茧生产成本与蚕农收益的关系、蚕茧生产成本波动及成本结构的变化、7个蚕茧主产省(区)的蚕茧生产成本比较、蚕茧与其它农作物的比较效益等方面进行实证分析。结果表明:蚕茧生产成本变化与养蚕收益的变化有密切关系;全国蚕茧生产成本在1991～2010年明显呈现出"谷—峰—谷—峰"的变化特征;蚕茧生产总成本中人工费用占比明显高于物质费用;7个蚕茧主产省(区)的蚕茧生产成本相比较,四川省的生产成本最低,陕西省最高;与其它竞争作物蔬菜、水果、棉花相比,蚕茧生产成本依旧相对较高,比较效益较低。创新省力化养蚕技术及培育高产蚕、桑新品种,提高蚕农收益,是保障蚕丝业可持续发展的关键。     

保护性耕作对黄土旱塬玉米土壤呼吸及微生物数量的影响

研究了实施保护性耕作10年后秸秆还田和免耕对土壤可培养微生物数量和CO2释放的影响,采用LI COR 6400 09土壤气室连接红外线气体分析仪测定了玉米（Zea mays cv.Zhongdan No.2）土壤呼吸速率,采用平板涂抹计数法测定了根际土壤细菌、真菌和放线菌数量。结果表明,免耕和秸秆还田处理玉米花期土壤呼吸速率降低了8.3%和7.8%,玉米收获期土壤呼吸速率降低了15.5%和13.6%;土壤10 cm处地温与土壤呼吸速率变化趋势一致,且在传统耕作处理下最高;与传统耕作相比,免耕和秸秆还田不同程度地增加了根际土壤细菌、真菌和放线菌的数量,但各类微生物数量之间的比例恒定;土壤呼吸速率与3类根际土壤微生物的数量呈负相关,但不显著。可利用免耕和秸秆还田提高黄土旱塬土壤碳库贮量。     

萨能奶山羊乳腺组织5-HTR4基因的克隆序列分析与原核表达

利用同源序列克隆原理设计5-羟色胺受体4(5-HTR4)一对克隆引物,对萨能奶山羊乳腺组织中5-HTR4进行克隆、测序,并进行分析;再根据克隆序列设计引物,从重组克隆载体中扩增出含Bam HⅠ/XhoⅠ酶切位点的5-HTR4片段,酶切后亚克隆至pGEX-4T-1载体,构建重组原核表达载体pGEX-5-HTR4,经IPTG诱导进行表达、鉴定。奶山羊5-HTR4基因的ORF与兔(Z50162)、猪(NM-001173418)、人(human5HT1D)、狗(NM-001003280)和鼠(AK082016)的同源性分别为46.1%、47.2%、78.9%、45.8%及89.8%。Smart分析发现,奶山羊5-HTR4基因推测氨基酸序列信号肽与人、鼠5-HTR4基因氨基酸序列信号肽均为1～23aa,SapB结构域均为49～126aa,结构特征与人、鼠的5-HTR4结构特征相一致。     

远红外碳纤维发热板设计仔猪保育箱的应用效果研究

为研发更为合理有效的断奶仔猪保温设备,提高养猪效益,采用远红外碳纤维发热板加热,温控器控温以及木箱箱体和聚氯乙烯门帘保温组合方式对普通仔猪保育箱进行了改进,并通过对比试验考察该设备的应用效果。结果显示:与对照组相比,断奶前期试验组平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)分别提高了9. 51%(P<0. 01)和10. 44%(P=0. 06);腹泻率、腹泻频率分别降低33. 0%和42. 9%(P>0. 05);免疫球蛋白G (Ig G)较对照组提高6. 75%(P>0. 05);日平均温度提高2. 3℃(P<0. 01),日平均湿度降低2. 6个百分点(P<0. 01);每圈日平均耗电量降低90. 2%(P<0. 01)。结果表明:改进后的保育箱可显著提高断奶初期日采食量,具有提高仔猪日增重、免疫力,降低仔猪腹泻的趋势,升温和保温效果明显,节能高效,具有较大的推广应用价值。