高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp4的表达及其抗血清的制备

根据GenBank中已发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV）HuN4株全基因组序列,设计合成一对引物,对PRRSV HuN4株非结构蛋白Nsp4（Nonstructural protein 4基因进行RT-PCR扩增,克隆到原核表达载体pET30a（＋）中,构建重组表达载体pET30a-Nsp4,经酶切测序鉴定。将pET30a-Nsp4转化表达菌株BL21（DE3）,诱导可表达分子量约为27kDa重组蛋白。Westernblot显示其具有较好的反应原性,经镍离子亲和层析（Ni-NTA）纯化获得了高纯度的可溶性重组蛋白。将纯化的Nsp4蛋白免疫BALB／c小鼠,抗血清ELISA效价达1：16000,Western blot和IFA表明,所制备的抗血清能够特异性识别PRRSV自身表达的Nsp4蛋白。本研究获得了可溶性的PRRSV Nsp4蛋白,制备了Nsp4特异性多抗血清,为进一步研究Nsp4蛋白的亚细胞定位及功能奠定了基础。     

我国新发人畜共患传染病及其防控策略

近年来,各种生物学因素、自然因素以及社会因素加剧了新发人畜共患传染病的发生、传播与流行,给人类的健康带来了很大的威胁,也造成了很大的经济损失,同时,也导致了诸多的社会问题.面对新发人畜共患传染病的挑战,人类应重新认识人畜共患传染病对人类健康的危害和影响,提高警惕,采取切实有效的应对措施,预防和控制传染病的发生和流行.本文就新发人畜共患传染病对人类健康和生存的严重威胁、影响因素和预防控制对策进行了分析和探讨.     

甘肃陇南亚高山退化草地牧草引种试验

2006～2007年,在甘肃省陇南市宕昌县车拉乡的亚高山退化草地上进行了牧草引种试验,筛选出了垂穗披碱草、无芒雀麦、岷山红三叶等一批适应性强、生长速度快、草产量高的适用于人工种植、改良退化草地的优良牧草,同时,初步证明试验所在地带是川陕甘秦巴山地白三叶、红三叶、苜蓿、黑麦草、鸡脚草亚区向青藏高原老芒麦、垂穗披碱草、中华羊茅、无芒雀麦亚区过渡的地带.     

布鲁菌S2疫苗株免疫牛与牛种、羊种布鲁菌自然感染牛ELISA鉴别诊断方法的建立

为建立区分猪种布鲁菌S2疫苗株接种奶牛与布鲁菌自然感染奶牛,BLAST比对分析羊种、牛种、猪种、犬种、沙林鼠种和绵羊种6种布鲁菌基因序列,发现repA—related基因是猪种布鲁菌与牛种及羊种布鲁菌的差异基因。设计引物PCR扩增获得repA-related基因片段,克隆并原核表达得到了布鲁菌repA—related融合蛋白,以repArelated蛋白建立间接EI．IsA检测方法。用repA—related蛋白间接ELISA检测猪种s2疫苗株接种动物血清为阳性,检测牛种和羊种布鲁菌自然感染动物血清为阴性。repA—related蛋白间接EusA能从试管凝聚实验（SAT）及常规ELIsA检测阳性的奶牛血清样本中,区分出s2疫苗接种牛与牛种布鲁菌感染牛。     

28～56日龄湘黄鸡真可消化钙需要量的研究

在研究了28-56日龄黄鸡的真可消化钙需要量。采用单因子试验设计,将400只健康1日龄的黄鸡随机分成5个处理组,每个处理5个重复,每个重复16只鸡。以磷酸氢钙和石粉为真可消化钙的来源,分别设置了0.28%、0.38%、0.48%、0.58%和0.68%五个真可消化钙水平,进行了为期28d的养殖试验。结果表明,随着钙水平的增加,采食量和日增重有显著下降的趋势,料肉比则为先减少后增加的趋势。湘黄鸡的真可消化钙需要量,当分别以生长性能、最大胫骨灰份和最大胫骨折断力为评定指标时,分别为：0.38%,0.41%和0.45%。     

茧层量差异家蚕品种后部丝腺细胞和血液组织的蛋白质表达谱分析

为了研究家蚕茧层量性状的分子调控机制,采用蛋白质双向电泳和图像分析技术,分析了遗传背景基本相同,而结茧性状和茧层量具有明显差异的正常茧、薄皮茧、裸蛹3个家蚕品种的丝腺细胞和血液组织的蛋白质表达与茧层量的关系。结果表明:裸蛹品种的丝腺细胞蛋白斑点与正常茧品种的蛋白斑点的匹配率仅在65%左右,且存在35%左右的特异蛋白斑点,暗示裸蛹性状可能是主效基因控制的微效多基因遗传;3个品种后部丝腺细胞特异蛋白斑点、匹配蛋白斑点按等电点划分的分布规律具有明显差异,而血液组织相应的分布规律非常相似,暗示丝腺细胞中的蛋白及其基因对家蚕茧层量性状的作用要大于血液组织中的蛋白及其基因;正常茧、薄皮茧和裸蛹3个品种后部丝腺细胞中特异蛋白斑点及上调和下调蛋白斑点中,可能分别存在着与家蚕高茧层量性状、结薄皮茧性状以及不结茧性状有关的蛋白质。     

不同地区及不同季节的柞蚕寄生蝇RAPD分析

利用RAPD技术对不同地区及不同季节发生危害的柞蚕寄生蝇进行了遗传多态性研究。选取11个随机引物对14份供试材料的基因组DNA进行扩增,共扩增出140条稳定条带,其中128(91.43%)条为多态性条带,表明柞蚕饰腹寄蝇(Blepharipa tibialis)、秋柞蚕寄生蝇(未命名)及栗蚕寄生蝇(未命名)间具有丰富的多态性。各材料间的遗传距离在0.0214~0.5143之间,利用UPGMA法进行聚类分析,14份供试材料可聚为两大类:栗蚕(Dic-tyoplocajaponica)寄生蝇与寄生柞蚕的寄生蝇各聚为一类,其中来自河南省的柞蚕饰腹寄蝇自成一类,来自东北地区的柞蚕饰腹寄蝇与秋柞蚕寄生蝇又各自聚为一类。     

鸡胸腺肽的提取及其生物学活性的初步研究

采用两种不同的方法提取鸡胸腺肽,计算胸腺肽得率,鉴定和比较提取物的生物学活性。结果显示,两种方法的提取物在体外不仅能使脱E受体的淋巴细胞恢复其E受体的功能,并能促进体外培养的淋巴细胞增殖;而且能增强鸡的淋巴细胞增殖能力,增加鸡外周血中γ-干扰素的含量。除了E玫瑰花环实验,各项体内外的活性检测均显示第二批鸡胸腺肽具有较高的活性,并且与购买的人用胸腺肽相当。本研究的结果表明,提取方法二操作简便,产率高,其提取物生物学活性较高,可用于兽医临床研究。     

Research on the Antioxident Function of Sulforaphane on the Leydig Cells of Cadmium Exposured Mice

The study was aimed to explore the antioxident function of sulforaphane (SFN) on the leydig cells of cadmium (Cd) exposured mice.Cd and SFN were added to the cell culture medium of TM3 cell, half inhibitory concentration (IC₅₀) of Cd and SFN safe dose range were determined.The tested model was set up,and the relative survival rate of TM3 cells, lactate dehydrogenase (LDH) activity and cell antioxidant levels were determined to study the antioxident function of SFN to cadmium exposured mice.The results showed that:①With the increase of Cd concentration,the relative survival rate of TM3 cells was decreased,and the IC₅₀ of Cd was 51.4 μmol/L;Within a certain concentration range,SFN could increased the cells survive rate,but there was toxicity when the SFN concentration was more than the scope,and the greater the concentration,the greater the toxicity. At experimental condition,SFN safety concentration were 2.5,5 and 10 μmol/L.②Compared with the control group,the GSH content,the T-SOD and GSH-Px activities in Cd group were significantly or extremely significantly decreased (P < 0.05;P < 0.01),and the LDH activity,the MDA content were increased.Additionally,the LDH activity and MDA content of SFN groups were decreased,while others three indexes were increased. Compared with Cd group,the GSH content,the T-SOD and GSH-Px activities of Cd+SFN groups were significantly or extremely significantly increased (P < 0.05;P < 0.01),however,the LDH activity,MDA content were decreased. The result indicated that SFN had the antagonism effect on toxicity of Cd in TM3 cell.     

芩花口服液抗鸡新城疫病毒体外研究

为研发抗新城疫病毒(NDV)新药,将黄芩、金银花、前胡、甘草等中药制成的芩花口服液稀释至安全范围浓度,在鸡胚成纤维细胞(CEF)培养系统中进行抗NDV感染试验.用MTT法测定NDV感染CEF能力的变化.结果显示:先加芩花口服液后接种NDV、先接种NDV后加芩花口服液、芩花口服液和NDV同时加入,芩花口服液浓度为0.0625、0.125、0.25、0.50、1.0、2.0 mg/mL时均有显著抗NDV感染CEF作用.此试验初步为寻求抗NDV药物提供一条新途径.