猪丁型冠状病毒在悬浮培养猪肾细胞LLC-PK1上的增殖特性分析

旨在分析猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)在悬浮培养的猪肾细胞LLC-PK1上的增殖特性,为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供细胞材料。采用逐步降血清法优化LLC-PK1细胞悬浮培养工艺;利用有限稀释法筛选PDCoV适应性细胞株;利用间接免疫荧光法鉴定PDCoV对LLC-PK1细胞的感染性;分别对PDCoV接种LLC-PK1悬浮细胞的初始密度、MOI、收毒时间、TPCK胰酶浓度等参数进行优化,确定最佳悬浮培养条件。成功筛选出可高效增殖PDCoV的单克隆悬浮细胞株LLC-PK1Sa,且利用其增殖的PDCoV可特异性的感染LLC-PK1细胞;PDCoV按MOI为10^-3接种于密度为2×10⁶ cells·mL^-1的LLC-PK1Sa细胞,当TPCK胰酶终浓度达到7.5 μg·mL^-1时,接毒后48 h收获的病毒液滴度最高。本研究首次实现了PDCoV在LLC-PK1Sa悬浮细胞中的高效增殖,并对悬浮培养条件进行了初步优化,可为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供理论参考。     

几种草坪草对SO_2的净化效果研究

贵州省瓮福磷肥厂内因SO2污染,建植的草坪成坪后20~30 d开始出现SO2污染伤害症状,但伏生臂型草、假俭草、狗牙根、根丛型高羊茅和黔草1号高羊茅表现出一定的抗SO2污染和吸收净化能力。从含硫量的相对值分析,吸收和积累硫的能力依次为:狗牙根>黔草1号高羊茅>根茎型高羊茅>假俭草>伏生臂型草。结果表明草坪草对SO2的吸收和积累与距离污染源的远近有关,与草坪草在污染的空气条件下暴露时间的长短成正相关关系。     

Real-time PCR方法和PCR方法检测虾白斑综合征病毒

由白斑综合征病毒引起的虾白斑综合征是国际兽医局（OIE）规定的必须上报的水生动物二类疫病。本研究首先通过设计新的PCR引物，提高了PCR检测白斑综合征病毒的阳性检出率。为进一步提高白斑综合征病毒检测的灵敏度，本研究采用TaqMan探针技术建立了快速检测白斑综合征病毒的real-time PCR方法，通过与常规PCR方法比较，证实其检测灵敏度显著提高。     

应用RT-PCR和病毒学方法诊断山东省鸡新城疫感染的比较研究

分别应用病毒分离和区分新城疫强弱毒株的RT—PCR技术,对山东各地疑似鸡新城疫感染的25份病料进行了实验室诊断。结果表明：从18份病料中既扩增到了新城疫强毒基因,也分离到了新城疫病毒;3份病料未分离到病毒,仅扩增到了新城疫强毒基因;4份病料分离到了新城疫病毒,但未检测到相关基因。研究表明,将RT—PCR和病毒分离鉴定两种方法相结合,可更好的满足快速、灵敏、准确的新城疫诊断要求。     

猪戊型肝炎病毒分子生物学与流行病学研究进展

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是20世纪80年代发现的又一新型肝炎病毒,近年来对戊型肝炎病毒病原学、流行病学、实验室诊断、基因结构等方面研究取得了重大进展,本文就HEV的形态、基因分型、分子生物学特性、戊型肝炎(Hepatitis E,HE)的流行病学特点作一简要概述。     

特异抗体致敏的SPA茵体浓缩新城疫病毒方法在临床诊断中的应用

为提高新城疫临床诊断的准确率,建立了新城疫病毒浓缩方法,将粪便及脑、肺等器官组织病料中的新城疫病毒经特异性抗体致敏的金黄色葡萄球菌(SPA菌)吸附浓缩后,用RT-PCR进行检测.结果表明,所建立的新城疫病毒浓缩方法应用于临床诊断后,可显著提高检测敏感性,从而提高临床诊断的准确率.     

基于荧光显色的环介导等温扩增技术(LAMP)检测禽呼肠孤病毒

建立了一种基于荧光显色的禽呼肠孤病毒(ARV)环介导等温扩增(LAMP)检测方法.该检测方法使用针对ARV的p10基因8个区域的6条LAMP引物,能够在等温(63℃)条件下1h内完成反应,具有良好的敏感性和特异性,最低能够检出102个拷贝的病毒,敏感性比普通PCR高100倍,而对其他病毒检测结果为阴性.在荧光显色中分别应用SYBR Green Ⅰ和钙黄绿素作为显色剂,其结果与琼脂糖凝胶电泳一致.在对80份临床样本的检测中,使用LAMP和PCR检测出阳性样本的数量分别为68份和55份.因此,基于荧光显色的LAMP方法可以应用于ARV的快速检测,具有在科研机构、基层实验室特别是检测现场推广和应用的潜力.     

鸡包涵体肝炎病理形态学观察

鸡包涵体肝炎 ( IBH)患鸡主要表现为肝脂肪变性和肝细胞内包涵体形成为特征的一种鸡腺病毒感染症。 1 980年以后我国辽宁、河北、山东、内蒙古呼和浩特市区先后有该病发生的报道。 1 997年河北省呈地方性流行。我们对该病进行了系统的病理形态学观察。1　材料与方法被检病例取自河北省 5个县市 1 7家养鸡场的发病鸡群 ,进行了流行病学调查、临床症状观察、细菌学、病理学检验。采集自然死亡病鸡肝脏、胸腺、脾脏、肾脏、法氏囊等病理材料 ,Bouin氏液固定 ,常规石蜡包埋、切片、苏木素—伊红、亚甲蓝伊红染色、光学显微镜检查。2　结果2 .1…     

气相色谱法检测牛奶及奶粉中共轭亚油酸

采用气相色谱对牛奶及奶粉中的共轭亚油酸的含量进行检测.样品通过脂肪提取、甲基化和上机测定,可以完全定性和定量分析CLA.结果表明:采用该方法可以使牛奶和奶粉中的c9,t11-CLA得到很好的分离,且方法简单、安全,结果准确可靠,检验数据重现性好.     

伊维菌素对藏獒犬蠕形螨病的治疗效果

通过0．06ml/kg体重肌注上海产伊维菌素及体外辅助疗法，对藏獒犬蠕形螨病的治愈率为92．9％，副作用小，达到了良好的疗效。