3种中国鲤mtDNA D—Loop序列的多态性与系统进化研究

【目的】探讨长江野生鲤、荷包红鲤和兴国红鲤3种中国鲤的遗传变异、亲缘关系及系统进化。【方法】对3种鲤的D-Loop序列进行扩增并测序,分析其遗传多样性,并与GenBank中获取的另外5种鲤鱼的D-Loop序列一起构建进化树。【结果】3种鲤的碱基组成中A+T含量均高于C+G含量;T碱基含量最高,平均为33.5%;C碱基最低,平均为13.7%。在检测的3种鲤上共发现37个突变位点,其中有2个插入,28个转换,7个颠换,碱基的替换有明显偏倚。单倍型多样性指数最高的是长江野生鲤(0.984±0.019),最低的是荷包红鲤(0.113±0.072);核苷酸多样性指数以长江野生鲤最高,为0.00623,荷包红鲤最低,为0.00012。长江野生鲤的遗传多样性较兴国红鲤和荷包红鲤丰富,荷包红鲤的遗传多样性最低。聚类分析表明,8种鲤属鱼聚为2大支,德国鲤单独为一类,其余7种聚为一类。【结论】荷包红鲤和兴国红鲤虽都原产于江西省,但2种鲤最初是独立从野生鲤中通过体色变异分化而来的。     

保鲜剂对香石竹切花生理生化特性的影响

试验表明,2种含有不同物质的保鲜剂均能不同程度地增加香石竹切花鲜重和花径,改善体内水分状况,延缓可溶性蛋白的降解,延长瓶插寿命,其中以保鲜剂1(2%S+200mg·L-1 8-HQ+150mL AC+50 mg·L-1 Al2(SO4)3+100 mg·L-1VC+50 mg·L-1 SA)的效果较好,属环保型保鲜剂.     

酶活性、丙二醛含量变化与豇豆抗枯萎病的关系

以豇豆抗病品种丰产二号和感病品种之豇28-2为试材,对接种枯萎病菌后2、4、6、8、10 d幼苗叶片的多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化氢酶(CAT)、几丁质酶(chitinase)、β-1,3-葡聚糖酶活性及丙二醛(MDA)含量的变化进行分析.结果表明:1) 未接种枯萎病菌的抗、感品种酶活性与MDA含量均无明显差异.2) 接种后,抗、感品种酶活性与MDA含量都呈升高趋势,抗病品种的酶活性升高幅度大于感病品种,抗病品种PPO、CAT活性与MDA含量始终高于感病品种.3) 接种后,抗病品种PPO、POD、CAT、几丁质酶活性升高比感病品种早,可能是它们可以较早启动抗病性反应.     

浙东白鹅GAPDH基因的扩增及其在荧光定量PCR中的应用

三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是一种糖酵解酶,在脊椎动物的所有组织均有稳定的表达,经常作为看家基因来研究基因的表达,本研究分析了鸭GAPDH基因序列,设计了一对引物,利用PCR,RT-PCR技术扩增得到了浙东白鹅的GAPDH基因的DNA序列为235 bp,mRNA序列为209 bp,作为参比基因应用于荧光定量PCR来研究目标基因的表达,目标基因在mRNA水平上的表达量可通过参比基因校正cDNA加入量的不同来研究,荧光定量PCR显示了以cDNA为模板,此引物扩增时Ct具有单一的溶解曲线,说明其表达稳定,可以作为参比基因用于浙东白鹅基因的定量表达研究。     

山核桃叶片提取物的抑菌作用

研究了山核桃Carya cathayensis叶片提取物对几种常见菌种的抑制作用。采用滤纸片法,检测不同浓度山核桃叶片乙醇和水提取物对金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus,大肠杆菌Escherichia coli,酵母菌Saccharomyces cerevisiae,黑曲霉菌Aspergillus niger,黄曲霉菌Aspergillus flavus和青霉菌Penicillium sp.的抑制效果。结果表明,培养12 h,乙醇提取物对5个供试菌种表现出显著的抑制作用(P<0.05),其效果优于水提取物。培养24 h,乙醇提取物和水提取物对黄曲霉菌的抑制作用明显(P<0.05),而对金黄色葡萄球菌和酵母菌的抑制作用较12 h前有所降低。培养36 h,乙醇提取物对金黄色葡萄球菌和酵母菌仍保持一定的抑制作用。表2参9     

大豆体细胞胚胎发生系统组织学研究

通过对栽培大豆品种体细胞胚胎发生频率组织学进行研究,了解在农杆菌和卡那霉素存在的条件下,大豆未成熟子叶胚性细胞的发生、分化、发育过程和胚胎发生规律,为大豆未成熟子叶诱导体细胞胚发生高效转化体系提供理论依据。     

犬血清IgG的纯化、抗体制备及其鉴定

[目的]探讨犬血清IgG的纯化方法。[方法]采用硫酸铵盐析法结合SephadexG-200凝胶柱层析提取纯化犬血清IgG,利用SDS-PAGE电泳和免疫印迹法鉴定所得产品的纯度和免疫活性。[结果]获得的纯化犬血清IgG的SDS-PAGE图谱中存在2条蛋白条带,表明获得了高纯度的犬血清IgG;重链分子量为58kD,轻链分子量为27kD,IgG分子量为170kD。特异性检测发现犬血清IgG重链和轻链都能与鼠抗犬血清IgG抗体结合,表明纯化犬血清IgG具有免疫原性和反应原性。[结论]硫酸铵盐析法结合SephadexG-200凝胶柱层析可获得纯度高、活性好的纯化犬血清IgG,为犬血清IgG相关的免疫学试验提供了高质量的免疫材料。     

牛白细胞介素15基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

根据GenBankTM中发表的牛IL-15基因序列设计并合成了特异性引物,以经LPS和ConA刺激的牛外周血单个核细胞提取的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出长度约500 bp的目的基因片段,并将该基因克隆到pMD18-T载体上.酶切、PCR及序列测定结果表明,获得了牛IL-15全长基因的克隆.进一步通过PCR方法得到缺失其N端48个氨基酸的信号肽序列的牛IL-15成熟蛋白基因,将其亚克隆到原核表达载体pET-32a上,构建重组表达质粒pET-IL-15,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,该菌表达以包涵体形式存在的相对分子质量约为33 000的融合蛋白.用Ni螯合层析方法纯化表达的蛋白.Western-blot试验显示表达的重组融合蛋白能与抗6×His的单克隆抗体发生反应,同时也能与鼠抗猪IL-15的多克隆抗体发生明显交叉反应.     

寿光鸡MSTN基因3种不同转录子的克隆及序列分析

采集1日龄寿光鸡腿肌,提取RNA进行RT-PCR反应、TA克隆和测序,序列测定结果表明：寿光鸡腿肌中存在3种不同大小的MSTNcDNA。第1种MS刑cDNA由1128bp组成,将该序列命名为csMSTN-1,与已报道的鸡MSTNcDNA序列（gb：AF019621．1）同源性为99％;第2种MS孙cDNA由985bp组成,命名为CSMSTN-2．与csMSTN-1相比,缺失了374～517处的143个碱基,并且在6处存在碱基变化;第3种MSTNcDNA由754bp组成,命名为csMSTN-3,与csMSTN-1相比,缺失了374～748处的374个碱基,并且存在26处碱基变化。这是世界上首次发现鸡体内存在3种不同大小的MSTN基因转录子．该结果为进一步确定MSTN基因的作用机理提供了新的试验依据。     

玉米新品种铜玉一号不同密度、肥料用量研究

运用三元二次正交回归旋转组合设计,研究铜玉一号玉米新品种产量与种植密度、施氮量、施钾量等主要栽培因素间的关系,建立了各因素与产量指标的数学模式:Y=8.173-0.084X1+0.444X2+0.015X3-0.115X1X2-0.073X1X3-0.268X2X3-0.301X21-0.124X22+0.084X23;确立了铜玉一号高产栽培合理的种植密度和施肥量的优化方案:种植密度为3 300株/667 m2,施氮量为30 kg/667 m2,施KC l量为15 kg/667 m2。在这一组合措施下,可获得10 160 kg/hm2的最高产量。各因素对铜玉一号产量的影响为施氮量插秧规格(密度)施钾量。