牛Th1/Th2型细胞因子实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

根据GenBank中牛Th1/Th2(BoTNF-α、BoIFN-γ、BoIL-2、BoIL-4、BoIL-6、BoIL-8、BoIL-10)型细胞因子的基因序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以牛3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,采用SYBR GreenⅠ染料以建立实时荧光定量PCR检测方法。将Th1/Th2型细胞因子基因克隆至pMD18-T载体上,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR-GreenⅠ荧光定量RT-PCR标准曲线和溶解曲线,并做灵敏性、特异性和重复性试验。对建立的Th1/Th2型细胞因子SYBR-GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法进行分析,结果表明牛IFN-α、IFN-β、IFN-γ和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×101～1×108 copies/μL范围分别呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991。溶解曲线分析表明产物为特异的单峰,具有较高的灵敏性和特异性,重复性较好。建立了检测Th1/Th2型细胞因子的实时荧光定量RT-PCR方法,为在mR-NA水平对牛Th1/Th2型细胞因子的定量分析奠定了基础。     

鸡新城疫病毒河北分离株F基因的分子特性分析

通过毒力测定、RT-PCR及F基因的序列测定与遗传进化分析,对2005-2008年从河北省部分地区的发病鸡群中分离到的10株新城疫病毒（NDV）进行了研究。各分离株经典毒力测定结果显示：MDT在37.6～54.4h之间,ICPI在1.71～2.0之间,IVPI值在2.16～2.8之间,均为新城疫病毒强毒株特征。F基因的序列测定表明,分离株之间的核苷酸序列具有77.4%～98.0%的同源性,与疫苗株Lasota的同源性为87.0%～98.9%,与国内标准强毒株F48E9同源性为89.7%～98.9%。推导其氨基酸序列分析表明,8个分离株的F蛋白的裂解位点氨基酸组成为112 R-R-Q-K-R-F117,具有NDV强毒株特征,与毒力测定结果相符,2个分离株的F蛋白的裂解位点氨基酸组成为112 G-R-Q-G-R-L117,与弱毒株特征相符。F基因分型和同源性比较显示：目前河北新城疫的流行以基因Ⅶ型为主（占70%）,同时兼有基因Ⅱ型（占20%）和基因Ⅸ型（占10%）。     

基于当量因子法的甘肃省草原生态系统服务价值评估

天然草原是甘肃省最大陆地生态系统,是全省乃至全国的重要生态屏障,科学、准确地估算甘肃省天然草原生态系统服务价值,对甘肃草原重要性认识和生态安全维持具有重要意义.本研究利用甘肃省主要粮食作物产量和价格数据,计算出甘肃省生态系统服务价值基准单价,然后结合甘肃省各种草原类生物量,修正甘肃省草原生态系统服务价值当量,最后计算出甘肃省各类草原生态系统服务价值.结果表明:1)草原提供的其他单项生态系统服务价值均在食物生产和原材料生产价值的3.1倍和3.7倍以上;2)甘肃省暖性灌草丛单位面积生态服务价值最高,为84418.28元·hm?2,温性荒漠单位面积生态服务价值最低,为10120.21元·hm?2;3)甘肃省草原生态服务总价值为7069.73×108元,是2016年畜牧业总产值的23倍,约等于甘肃省2016年国民生产总值(gross domestic product,GDP);4)高寒草甸生态系统服务总价值最高,为1733.27×108元,占草原生态系统服务价值的24.52％;高寒荒漠生态系统服务总价值最低,为58.51×108元,占草原生态服务价值的0.83％.本研究不仅为区域内生态系统服务价值的估算提供了思路,也为利用法律手段保护草原提供了科学依据.     

中国驴品种资源现状及其分子遗传育种研究进展

驴是中国一个古老畜种,对不良环境适应性强,耐粗饲、抗病力强,一直是役、驮、乘、肉、药多用资源之一。但随着农业机械化、运输业快速发展及人民生活水平提高,近些年来驴品种资源整体面临着种质资源退化、种群数量和质量显著下降等问题。本文针对我国驴品种资源概况、保护利用现状、存在问题及其分子遗传育种研究进展进行综述,以期为驴品种资源的保护及开发利用提供参考。     

牦牛炭疽和出血性败血症的病原分离与鉴定

对急性致血性死亡，怀疑为牦牛炭疽痛的病死牛的耳进行巴氏轩菌和炭疽杆菌的分离与培养鉴定，结合流行病学、临床症状和实验室捡查．诊断为炭疽杆菌和多杀性巴氏杆菌混合感染。     

短穗兔耳草的克隆生长特征

以调查统计的方法研究了高寒草甸匍匐茎植物短穗兔耳草Lagotis brachystachya无性系的生长特征、形态特征以及能量分配规律,研究结果表明:匍匐茎只有1条的短穗兔耳草最多,占60．47％,匍匐茎有4条的短穗兔耳草只占6．98％。在牧草生长盛期,短穗兔耳草无性系的基株高度4．03 cm,根长为9．11 cm,叶数为7．98;分株高度0．85 cm,根长2．73 cm,叶数为3．08;匍匐茎的茎生叶数为12．54,长度为15.14 cm,匍匐茎比节间重为2．18 mg／cm,粗度为0．97 mm,不同构件的干质量呈现出基株>匍匐茎>分株>茎生叶的规律。随着匍匐茎数目的增多,短穗兔耳萆无性系的基株根长逐渐增加,用于克隆繁殖的能量投资也有增加的趋势,其他参数都没有明显的变化规律。     

蓝茎冰草种子产量与施氮量和密度互作的模型分析

通过3因素5水平二次通用正交旋转组合设计方案,建立回归模型,进行解析、寻优和频数分析。结果表明:各试验因素对蓝茎冰草(Pascopyrum smithii)种子产量影响的大小顺序为施氮量(X₂)>植株密度(X₁)>喷施PP 333(X₃);施氮量与植株密度的互作效应对种子产量的作用为协同效应;同时得出了3因素对种子产量的优化配比方案:植株密度429.4~450×10⁴株/hm²,施氮量160~164.9kg/hm²,喷施PP 333量0.197~0.233 a.i.kg/hm²。     

Masson三色染色与HE染色在豚鼠牙齿组织石蜡切片中的比较研究及应用

针对牙齿组织形态学研究的难点,选择适宜固定液,用EDTA-2Na进行脱钙,完成了牙齿组织石蜡切片的制作。通过确定染色程序及各种染料的最佳作用时间,分别利用Masson三色染色法、传统的苏木精和伊红（HE）染色法对牙齿组织切片进行了染色观察。染色结果表明,与HE染色法相比,Masson三色染色更能使牙齿的各主要成分以不同颜色显现出来,色彩对比鲜明,亮丽润眼,为牙齿组织生理及病理组织形态学研究奠定了基础。针对机体中硬组织的相似特性,该试验方法可以在骨骼、软骨等硬组织的形态学研究中参考、改进并推广使用。     

鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定

鸡传染性支气管炎是鸡的一种急性、高度接触性传染病,是严重危害中国养禽业的疫病之一。本研究通过临床表现、解剖症状、病毒干扰试验、鸡胚的特征性矮小病变、动物回归试验和RT-PCR试验等方法确认分离到的病毒是鸡传染性支气管炎病毒。     

成年兔睾丸支持细胞的分离纯化研究

本试验以5月龄公兔为试验动物,去除睾丸被膜及血管,分离出完整的曲精细管后 用0．5％胰蛋白酶和0．1％胶原酶消化并进行低渗处理,将制成的细胞悬液植入25 cm2的培 养瓶,于38．7℃、5％CO2条件下培养,结果表明:经1:3Hanks超纯水低渗处理后,离体支持 细胞纯度和活率分别达到72．04％和84．5％,显著提高了离体支持细胞的获取量和活率。