NaCl胁迫下黑麦草种子萌发过程中DNA甲基化与基因表达分析

为了解黑麦草（Lolium perenne）种子在正常条件与NaCl胁迫下萌发过程中DNA甲基化动态变化以及重要盐胁迫相关基因的表达。运用甲基化敏感扩增多态性技术分析对照和150 mmol·L^-1 NaCl处理下黑麦草种子萌发过程（0,1,2,4,7 d）的DNA甲基化水平及动态变化,并通过实时荧光定量 PCR（QRT-PCR）检测8个重要的盐胁迫相关基因的表达情况。结果表明：黑麦草种子萌发过程中甲基化水平呈下降趋势,以双链甲基化方式为主,甲基化变化同时发生在编码序列和非编码序列中。NaCl处理下DNA甲基化程度高于CK,而去甲基化程度低于CK,最终导致NaCl处理下基因组净的甲基化位点数目增加。黑麦草种子耐盐萌发过程中代谢增强,8个盐胁迫相关基因表达量呈上升趋势,而NaCl胁迫延缓了种子萌发进程,在大多数时间点的基因表达低于对照。     

干旱预处理对一年生黑麦草耐盐性的影响

全球土壤盐渍化正在威胁着植物的生长发育,提高植物抗盐性已是当前亟待解决的问题。利用植物对逆境胁迫的交叉适应性是提高抗逆性的一种经济有效的方法,但关于干旱能否增强植物耐盐性的研究甚少。本试验以一年生黑麦草（Lolium multiflorum Lam.）为试验材料,对植物进行单一盐处理（NaCl）、经干旱预处理的盐处理（PEG-NaCl）,以及盐旱同时处理（PEG+NaCl）,比较相对含水量、叶绿素含量、丙二醛、钠离子及钾离子含量等生理指标。结果表明：盐胁迫使植物的钠离子含量显著增加,叶绿素含量及相对含水量降低;但经PEG处理后,相比于单一盐处理,叶绿素及钠离子分别有所增加及降低,其中,5% PEG的作用显著优于10% PEG处理;而盐旱同时发生则对植物造成了最大的伤害。因此,适宜强度的干旱预处理在一定程度上可减少盐胁迫对植物的伤害。     

猪带绦虫六钩蚴TSOL18基因疫苗表达载体的构建及其免疫原性研究

为研制新型猪囊尾蚴疫苗,将猪带绦虫六钩蚴阶段编码 TSOL18 的基因定向克隆于真核表达质粒 pVAX1, 经筛选、鉴定及 DNA序列分析正确后,将重组质粒 pVAX1/TSOL18 转染 BHK-21 细胞,通过 SDS-PAGE、Western blotting、免疫荧光试验等方法检测细胞中表达的 TSOL18 抗原。结果表明,重组真核质粒 pVAX1/TSOL18 可在 BHK-21 细胞中表达TSOL18 目的蛋白,表达蛋白能被猪囊尾蚴病阳性血清所识别。动物免疫试验表明,真核表达载体能有效地诱导机体产生细胞免疫和体液免疫应答,这为猪囊尾蚴病基因疫苗的研究奠定了良好基础。     

杜仲叶影响绵羊血清代谢组学的研究

为探索杜仲叶（Eucommia ulmoides leaves,EUL）对绵羊营养代谢和生理功能的影响,本研究选取25~30 kg、70~80日龄的湖羊30只,随机分为3组,每组10只,分别为对照组（无杜仲叶日粮组,CTL）、低剂量添加组（10%杜仲叶日粮组,EUL1）、高剂量添加组（20%杜仲叶日粮组,EUL2）。预试期15 d,正试期90 d。试验结束时,通过静脉采血,离心后分别取血浆和血清,血浆用于生化分析,血清用于代谢组学分析。结果显示,饲喂杜仲叶后,EUL1和EUL2组绵羊血浆中葡萄糖、非酯化脂肪酸、高密度脂蛋白和极低密度脂蛋白均升高,EUL2组与CTL组差异显著或极显著（P<0.05;P<0.01）,EUL1组与CTL组差异不显著（P>0.05）;EUL1和EUL2组尿素较CTL组极显著降低（P<0.01）,总胆固醇水平显著降低（P<0.05）,EUL1和EUL2组间差异不显著（P>0.05）。血清样品采用液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）进行检测,在正模式下得到593个代谢物,在负模式下得到1 570个代谢物。通过主成分分析（PCA）、偏最小二乘判别分析（PLS-DA）及正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）发现,各试验组间的差异代谢物较多,能将其得分图明显区分。进一步对变量重要性因子大于1.0（VIP>1.0）的代谢物进行t检验后发现,各组之间有24种特征代谢物差异显著（P<0.05）。这些差异代谢物涉及体内葡萄糖、脂肪酸和氨基酸等的代谢,有的代谢物还与动物的免疫机能相关。杜仲叶饲料对绵羊的营养代谢、生理状态和免疫状况可产生明显的影响,代谢组学可有针对性地分析代谢物发生的步骤及生理作用,为阐明杜仲叶影响营养代谢的机制提供参考。     

饲粮中添加不同生物制剂对杜寒杂交肉羊生产性能和屠宰性能的影响

本试验旨在比较饲粮添加不同生物制剂对杜寒杂交肉羊生产性能、屠宰性能、组织器官发育及肉品质的影响。采用单因素试验设计,选取平均体重约为32 kg的杜寒杂交F1代肉羊160只,随机分为5组,每组4个重复,每个重复8只。对照组采用基础饲粮,试验组分别添加21 mg/kg莫能菌素、4×109CFU/kg地衣芽孢杆菌、3.2×109CFU/kg酿酒酵母菌、1.1 g/kg复合生物制剂(地衣芽孢杆菌≥6×109CFU/g、酿酒酵母菌≥4×109CFU/g、碱性蛋白酶≥1 000 U/g)。预试期10 d,正试期56 d,每2 d记录1次采食量,每20 d进行1次称重,当复合生物制剂组羊只的平均体重达到约50 kg时,每组选取10只羊进行屠宰,测定其屠宰性能、组织器官重量和肉品质指标。结果表明:1)复合生物制剂组平均日增重、屠宰率显著高于对照组(P0.05);地衣芽孢杆菌组和复合生物制剂组料重比显著低于对照组(P0.05)。2)地衣芽孢杆菌组、酿酒酵母菌组、复合生物制剂组复胃重量均显著高于对照组(P0.05),复合生物制剂组复胃重量占宰前活重比例显著高于对照组和莫能菌素组(P0.05);地衣芽孢杆菌组、酿酒酵母菌组、复合生物制剂组小肠重量及其占宰前活重比例均显著高于对照组、莫能菌素组(P0.05)。3)酿酒酵母菌组肾脏重量占宰前活重比例显著高于对照组(P0.05),其他内脏器官重量占宰前活重比例在各组间无显著差异(P0.05)。4)各组肉品质指标差异不显著(P0.05)。综合得出,从作为饲料添加剂对肉羊生产性能作用效果来看,地衣芽孢杆菌、酿酒酵母菌、复合生物制剂可以替代莫能菌素,地衣芽孢杆菌好于酿酒酵母菌,复合生物制剂最佳。     

抑制不同种类瘤胃微生物活性对水牛瘤胃发酵和脂肪酸代谢的影响

试验旨在采用体外产气法研究抑制瘤胃细菌、真菌、原虫对添加亚油酸和亚麻酸后水牛瘤胃体外发酵参数和脂肪酸代谢的影响。体外培养底物0.5 g,精粗比为3：7,分别添加底物干物质量3%的亚油酸和3%的亚麻酸,每组设置5个重复,同时再设立4个组：对照组及抑制原虫、细菌、真菌组。体外模拟瘤胃发酵培养24 h,测定24 h产气量和气体中的甲烷（CH₄）含量、瘤胃发酵液的pH、挥发性脂肪酸（VFA）、氨态氮（NH₃-N）、微生物蛋白（MCP）浓度以及长链脂肪酸（LFA）组成。结果表明：①在添加亚麻酸情况下,与对照组相比,抑制细菌和原虫生长后产气量显著降低,抑制细菌和真菌生长后CH₄产量显著升高,而抑制原虫生长后CH₄产量显著降低（P<0.05）;在添加亚油酸情况下,与对照组相比,抑制细菌、真菌或原虫生长后产气量均显著降低,且抑制原虫后CH₄产量显著低于其他组（P<0.05）。②抑制细菌、真菌或原虫生长后,添加亚油酸和亚麻酸显著影响了体外瘤胃发酵液pH和MCP浓度（P<0.05）,添加亚油酸对NH₃-N浓度影响不显著（P>0.05）。③与对照组相比,抑制细菌、真菌或原虫生长后显著降低了乙酸、丙酸含量（P<0.05）;在添加亚麻酸情况下,抑制细菌生长显著降低了丁酸含量（P<0.05）;在添加亚油酸情况下,抑制细菌、真菌或原虫生长后丁酸含量显著降低（P<0.05）。④与对照组相比,在添加亚麻酸情况下,抑制细菌生长显著降低了C11：0、C12：0、C13：0、C14：0、C14：1n5、C15：1n5、C16：1n7、C16：0、C18：3n3、C18：2n6c、C18：0、C20：2n6、C20：3n6、C20：1、C20：3n3、C20：0、C21：0、C22：6n3、C22：2n6、C22：0浓度（P<0.05）;在添加亚油酸情况下,抑制细菌生长显著降低了C12：0、C13：0、C14：0、C15：0、C16：1n7、C16：0、C17：0、C18：3n6、C18：3n3、C18：2n6c、C18：1n9t、C18：0、C18：2（cis-9,trans-11）、C18：2（trans-10,cis-12）、C20：2n6、C20：1、C20：0、C21：0、C22：6n3、C22：0、C23：0、C24：1n9、C24：0浓度（P<0.05）。由此可见,抑制细菌、真菌或原虫生长后,添加亚油酸和亚麻酸对体外瘤胃发酵参数、CH₄产量和脂肪酸组成均能产生影响,原虫对产气量和CH₄产量贡献最大,细菌对瘤胃液脂肪酸代谢影响最大。     

伊维菌素和吡喹酮复方注射液在绵羊体内的药代动力学

本文对自制伊维菌素(IVM)和吡喹酮(PZQ)复方制剂在绵羊体内的药代动力学进行了研究,试验将18只绵羊随机分为3组,A组肌肉注射自制复方制剂;B组皮下注射市售单方IVM注射液;C组口服市售单方PZQ片剂,其中伊维菌素的给药剂量均为0.2 mg/kg体重,A组PZQ的剂量为30 mg/kg体重,C组PZQ剂量为100 mg/kg体重.试验结果显示,肌肉注射自制复方制剂中IVM的各项药代动力学参数与单方对照药物相比均无显著差异;尽管复方制剂PZQ的剂量约为单方对照品的1/3,但两者的AUC值相似,复方制剂中PZQ的达峰时间比单方对照品快约6倍,T1/2beta长约3倍,维持有效血药浓度时间长达24 h,结果说明,自制复方制剂中IVM的生物利用度与单方对照药物相似,吡喹酮的生物利用度与单方对照药物相比有显著提高,且具有起效快、疗效长的特点.     

内生真菌对醉马草白粉病抗性的影响

为研究内生真菌对醉马草白粉病抗性的影响,在温室条件下,对自然发生不同程度白粉病(健康、轻度感病和重度感病植株)的带内生真菌(E+)和不带内生真菌(E-)的醉马草植株的发病率、病叶率、病情指数及各项生理生化指标进行测定。结果表明,E+醉马草的发病率48%显著低于E-醉马草的发病率97%(P0.05),E+的病叶率60%显著低于E-醉马草病叶率86%(P0.05),E+醉马草的病情指数为50.76,E-醉马草的病情指数为82.49;通过各项生理生化指标的测定发现与健康植株相比,在轻度和重度发病植株中,内生真菌的存在可以显著(P0.05)提高醉马草叶片的叶绿素含量和脯氨酸含量,E+醉马草的SOD酶活性和POD酶活性也显著高于E-醉马草,同时内生真菌显著地降低了醉马草叶片中丙二醛(MDA)的含量。据此说明内生真菌的存在能够提高醉马草抗白粉病的能力。     

黄土丘陵区白羊草与达乌里胡枝子混播草地土壤呼吸日变化特征

土壤呼吸是反映土壤质量和肥力性状的重要指标,阐明禾―豆混播草地土壤呼吸作用的变化规律及其影响因素,可以为准确评估混播草地的环境效应及响应提供依据。在2011和2012年6月份,采用动态密闭气室分析法,比较了白羊草(Bothriochloa ischaemum)与达乌里胡枝子(Lespedeza davurica)不同比例间作混播草地总土壤呼吸速率的日变化特征、混播植物贡献率以及温度敏感性等。结果表明,不同混播比例草地的总土壤呼吸速率日变化为单峰型曲线,峰值出现在12:00~14:00。总土壤呼吸速率日均值高低顺序为单播白羊草白羊草和达乌里胡枝子间作单播达乌里胡枝子。不同间作比例草地的总土壤呼吸速率与白昼气温相关显著(P0.05),而与5、10和15 cm土层白昼土壤温度关系不明显;单播条件下,白羊草草丛的土壤呼吸对温度的敏感性高于达乌里胡枝子;各草地土壤呼吸Q10值的变化范围为1.48~2.61,以单播白羊草最高,单播达乌里胡枝子和两者间作混播草地间无显著差异(P0.05)。