猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp9基因的克隆与原核表达

通过PCR方法从重组质粒pSK-B2扩增得到非结构蛋白Nsp9的基因片段。将基因克隆至原核表达载体pET-28a( ),得到重组表达载体pET-28-Nsp9,转化Escherichia coliBL21(DE3)细胞。经IPTG诱导,Nsp9蛋白以包涵体形式表达,SDS-PAGE分析表明重组蛋白的分子量约为27.3 kD,表达量占菌体蛋白的43.2%。Western-Blotting结果表明重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别。表达的重组蛋白为进一步研究PRRSV的免疫特性和分子生物学功能奠定了基础。     

枯草芽孢杆菌铜对先天性缺铜大鼠生长发育、器官指数、铜沉积量、血清生化和抗氧化指标的影响

本试验旨在研究枯草芽孢杆菌铜对先天性缺铜大鼠生长发育、器官指数、铜沉积量、血清生化和抗氧化指标的影响。试验分为模型期和干预试验期。模型期选取怀孕10 d的SD大鼠72只,平均分为模型组和对照组,每组6个重复,每个重复6只。模型组大鼠孕期饲喂缺铜饲粮(铜含量为0.33 mg/kg),对照组大鼠孕期饲喂正常饲粮(在缺铜饲粮基础上添加6.0 mg/kg五水硫酸铜),持续到哺乳期结束,验证建模是否成功。干预试验期选择24日建模成功的缺铜幼龄大鼠108只,随机分成6个试验组,Ⅰ～Ⅲ组为硫酸铜组(缺铜饲粮基础上分别添加3.0、6.0和9.0 mg/kg五水硫酸铜),Ⅳ～Ⅵ组为枯草芽孢杆菌铜组(缺铜饲粮基础上分别添加3.0、6.0和9.0 mg/kg枯草芽孢杆菌铜),每个组3个重复,每个重复6只。试验期35 d。结果表明:1)在铜添加量相同条件下,Ⅳ组体重和血清谷丙转氨酶(ALT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著或极显著高于Ⅰ组(P<0.05或P<0.01),Ⅳ组血清谷草转氨酶/谷丙转氨酶(AST/ALT)显著低于Ⅰ组(P<0.05)。Ⅴ组血清铜蓝蛋白(CP)、碱性磷酸酶(AKP)活性显著或极显高于Ⅱ组(P<0.05或P<0.01),Ⅴ组血清丙二醛(MDA)含量显著低于Ⅱ组(P<0.05)。Ⅵ组血清AKP活性和肾脏中铜沉积量显著或极显高于Ⅲ组(P<0.05或P<0.01)。2)在硫酸铜组中,Ⅱ、Ⅲ组体重、体长显著高于Ⅰ组(P<0.05),Ⅲ组血清CP活性显著或极显著高于Ⅰ、Ⅱ组(P<0.05或P<0.01),Ⅲ组血清AKP活性显著高于Ⅱ组(P <0.05),Ⅲ组血清谷草转氨酶(AST)、GSH-Px和铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)活性及肾脏中铜沉积量显著或极显著高于Ⅰ组(P<0.05或P<0.01),Ⅲ组血清M DA含量极显著低于Ⅰ组(P <0.01)。在枯草芽孢杆菌铜组中,Ⅵ组体重、体长,血清AST、GSH-Px和CuZn-SOD活性,心脏、肝脏、肾脏中铜沉积量显著或极显著高于Ⅳ组(P<0.05或P<0.01),Ⅵ组血清CP和AKP活性显著或极显著高于Ⅳ、Ⅴ组(P <0.05或P <0.01)。由此可见,枯草芽孢杆菌铜能提高先天性缺铜大鼠体重,血清CP、AKP、ALT活性,提高机体抗氧化能力,增加肝脏、肾脏中铜沉积量,效果优于硫酸铜,且降低了饲粮中铜添加量。     

猪圆环病毒3型TaqMan-MGB荧光定量PCR方法的建立及应用

为建立猪圆环病毒3型(PCV3)荧光定量PCR检测方法,本研究根据GenBank中PCV3基因序列设计特异性引物和探针,经过反应体系和条件优化,建立了特异性检测PCV3的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法。该检测方法在4.78×10~1拷贝/μL～4.78×10~9拷贝/μL质粒标准品范围内均有良好的线性关系;该方法特异性试验结果显示,其与多种常见猪病病毒均无交叉反应,特异性良好;本研究建立的方法敏感性是常规PCR方法的100倍,敏感性较高;批内批间重复性试验变异系数均小于2.3%,重复性良好。对临床样品的检测结果显示,该方法对PCV3的检出率高于常规PCR方法,并且PCV3阳性样品多存在混合感染情况。该方法的建立为PCV3的实验室诊断及流行病学调查提供了快速、准确的检测手段。     

鲤春病毒血症病毒单克隆抗体制备及鉴定

为制备鲤春病毒血症病毒(SVCV)单克隆抗体(MAb),本研究用纯化的SVCV免疫BALB/c鼠,通过杂交瘤细胞技术,制备2株抗SVCV的MAb,分别命名为2A3和3H7。经间接ELISA检测腹水效价为1:10240和1:12150。亚类鉴定证实,这2株亚类均为IgG1型。经非竞争酶免疫试验测定2A3和3H7的抗体亲和力常数分别为4.86×108L/mol和1.86×109L/mol,3H7相对亲和力高于2A3。MAb 2A3和3H7的饱和度均为1:400,叠加试验所得增值指数为63.2%,大于50%。抗体反应增值结果表明:两株MAb分别针对不同抗原位点。免疫印迹分析检测表明,两株纯化的MAb均可与SVCV抗原发生特异反应。     

抢救新疆黑蜂纪行(三)--进阿尔泰山寻觅黑蜂

(接上期)抢救新疆黑蜂的前期工作安排就绪之后,我们就将赴新疆寻找黑蜂的方案,用电话报给农业部畜牧兽医总站品种资源管理处,徐处长马上安排杨红杰副处长给新疆畜牧厅打电话,安排落实我们赴新疆的工作。2002年9月8日从吉林出发,9月9日19:00我们一行二人从北京登上了飞往乌鲁木齐的XO9106次班机,开始了新疆之行的旅途。22:10到达乌鲁木齐机场,按预定计划乘车来到汇源酒店,自治区畜牧厅畜牧处处长田烽和副处级调研员巩巴正在等候我们。当时,田处长就把根据农业部畜牧兽医总站的电话通知所做的安排告诉我们,9月10日畜牧厅将派一辆尼桑越野吉普…     

不同日粮蛋白质水平对乌金猪肉品质的影响

旨在研究日粮不同蛋白水平对乌金猪肉品质的影响及最优肉品质所需的日粮适宜蛋白水平。选取体质量15kg左右的乌金猪90头,随机分为5组,每组18头,下设3个重复,每个重复6头。试验采用单因子随机分组设计,在体质量为15～30、30～60和60～100kg阶段的日粮蛋白水平分别为最高蛋白水平（HHP,18％、16％和14％）、中高蛋白水平（HMP,17％、15％和13％）、中蛋白水平（MMP,16％、14％和12％）、中低蛋白水平（MLP,15％、13％和11％）和最低蛋白水平（LLP,14％、12％和10％）。各组在不同生长阶段日粮能量、微量元素、氨基酸等水平固定。试验期至100kg体质量,分别在30、60和100kg体质量时屠宰,测定肉品质指标及肌肉营养成分,采用模糊综合评定系统分析并确定最优肉品质日粮适宜蛋白水平。结果表明,日粮不同蛋白水平对乌金猪不同生长阶段肌肉pH、系水力、剪切力、烹煮损失和滴水损失有明显影响,其中高、中、低蛋白组间差异显著（P〈0．05）,大理石纹评分随蛋白水平的降低而增加,低蛋白组显著高于高蛋白组（P〈0．05）。随着日粮蛋白水平的增加,肌肉中粗蛋白含量提高,在100kg体质量时达显著水平（P〈0．05）;粗脂肪、肌内脂肪和肌苷酸含量降低,不同生长阶段高、中、低能量组间差异显著（P〈0．05或P〈0．01）。以大理石纹、剪切力和滴水损失为评定肉品质的代表指标,通过综合评定确定30、60和100kg体质量时最优肉品质适宜的日粮蛋白水平分别为15．88％、14．13％和11．42％。研究结果为乌金猪的合理饲养和改善肉品质提供了科学依据。     

Physiological but not morphological adjustments along latitudinal gradients in a human commensal species,the Eurasian tree sparrow

Human commensal species take advantage of anthropogenic conditions that are less likely to be challenged by the selective pressures of natural environments. Their morphological and physiological phenotypes can therefore dissociate from habitat characteristics. Understanding how these species adjust their morphological and physiological traits across latitudinal gradients is fundamental to uncovering the eco-physiological strategies underlying coping mechanisms. Here, we studied morphological traits in breeding Eurasian tree sparrows (ETSs; Passer montanus) among low-latitude (Yunnan and Hunan) and middle-latitude (Hebei) localities in China. We then compared body mass; lengths of bill, tarsometatarsus, wing, total body, and tail feather; and baseline and capture stress-induced levels of plasma corticosterone (CORT) and the metabolites including glucose (Glu), total triglyceride (TG), free fatty acid (FFA), total protein, and uric acid (UA). None of the measured morphological parameters varied with latitude except in the Hunan population, which demonstrated longer bills than those in other populations. Stress-induced CORT levels significantly exceeded baseline levels and decreased with increasing latitude, but total integrated CORT levels did not vary with latitude. Capture stress-induced significantly increased Glu levels and decreased TG levels, independent of site. However, the Hunan population had significantly higher baseline CORT, baseline and stress-induced FFA levels, but lower UA levels, which differed from other populations. Our results suggest that rather than morphological adjustments, physiological adjustments are mainly involved in coping mechanisms for middle-latitude adaptation in ETSs. It is worth investigating whether other avian species also exhibit such dissociation from external morphological designs while depending on physiological adjustments.     

VEGF在绵羊生殖管道中的表达规律

以不同发情周期雌性绵羊子宫、输卵管为研究对象,采用免疫组织化学技术,针对血管内皮生长因子（VEGF）在绵羊子宫、输卵管的表达、定位和变化规律进行了检测,同时应用相关图像分析软件对抗原染色强度进行了定量分析。结果表明：输卵管在发情0～15d,VEGF表达量在第9天达到峰值后经历波动逐渐下降过程,输卵管内膜上皮细胞是VEGF抗原的主要靶细胞;而子宫角在发情0～15d,VEGF表达量在第5天达到峰值后经历波动逐渐下降过程,子宫内膜固有层及腺体周围细胞为VEGF抗原的主要靶细胞。该研究结果为绵羊生产中进一步提高受胎率和妊娠率及频密产羔等技术的应用提供了科学依据。     

Bad基因在黄体期绵羊生殖器官中表达的比较研究

以黄体期小尾寒羊和萨福克羊为研究对象,采用免疫组织化学技术,针对Bad基因在母羊生殖器官卵巢,输卵管和子宫中的表达与定位进行初步研究,在卵巢中Bad基因均在多数黄体细胞中表达;在输卵管宫管结合部、峡部和壶腹部的分泌细胞Bad基因均有不同程度的表达,未发现纤毛细胞Bad阳性细胞;子宫内膜腺体小泡表达Bad阳性,子宫内膜子叶、基质的阳性细胞数极少,阳性细胞呈轻度着色,显弱阳性.利用计算机图像分析技术测量小尾寒羊和萨福克羊Bad基因表达的阳性细胞率和平均光密度,Bad基因在这两种绵羊组织中的表达规律大体相似,也存在一些明显的差异:萨福克羊的黄体细胞较小尾寒羊中的细胞凋亡更明显,萨福克羊输卵管伞部和壶腹部上皮Bad阳性细胞率均高于小尾寒羊,小尾寒羊子宫内膜子叶和基质Bad阳性细胞率和平均先密度均显著高于萨福克(P＜0.01).结果表明,小尾寒羊和萨福克羊生殖器官中细胞凋亡的差异与Bad基因表达的差异,可能是造成两者繁殖力高低差异的基础.     

鸭疫里默氏杆菌的共感染情况调查

为了调查山东省鸭疫里默氏杆菌病与其他疾病的混合感染情况,对从山东省6个肉鸭养殖较多县(市)收集到的118份样品进行了大肠杆菌、沙门氏菌和鸭病毒性肝炎的分离鉴定。结果显示,鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌单独感染分别占到样品总数的21.18%和11.86%,鸭疫里默氏杆菌与大肠杆菌和鸭病毒性肝炎的双重感染最为普遍,分别占到样品总数的38.14%和18.64%,鸭疫里默氏杆菌、鸭大肠杆菌、鸭病毒性肝炎的三重感染占到样品总数的6.78%。其中,鸭大肠杆菌的优势血清型为O₇₈和O₉₂,分别占总分离株数的16.90%和15.49%,其次是血清型O₉₃和O₁₄₂,分别占到总分离株的11.27%和8.45%。