PRRSV GP5蛋白在杆状病毒表达系统中的表达

参照包含猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV) VR2332株完整ORF5基因的载体pMD18T-ORF5的核酸序列设计引物,扩增全长的PRRSV ORF5基因片段,同时以SOE-PCR技术扩增缺失信号肽和跨膜区的ORF5核酸片段ORF5NC,分别克隆至Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBac-HTA,获得重组转移载体pFastBacHTA-ORF5及截短表达的重组转移载体pFastBacHTA-ORF5NC。将供体质粒分别转化DH10Bac细胞,获得重组穿梭质粒,转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western blot检测结果表明,在Sf9细胞中分别成功表达了全长的GP5重组蛋白和缺失信号肽、跨膜区的截短GP5重组蛋白。2种重组蛋白经纯化后,免疫小鼠制备抗血清,ELISA方法检测免疫GP5全长和截短重组蛋白的小鼠血清中抗体滴度分别为1∶800和1∶1 600,表明重组蛋白具有良好的免疫原性。本试验为进一步分析重组蛋白诱导中和抗体产生的能力以及为PRRSV基因工程亚单位疫苗的研究奠定基础。     

大米提取复合糖对断奶仔猪生长性能、肠道形态与功能的影响

本试验旨在研究大米提取复合糖在无诱食剂条件下对断奶仔猪生长性能、肠道形态与功能的影响。试验选取(26±2)日龄健康、体重相近的三元杂断奶仔猪160头,随机分为5个组,每组4个重复,每个重复8头猪,A组饲喂标准饲粮,B组饲喂基础饲粮(标准饲粮中去除甜味剂、香味剂、葡萄糖、蔗糖),C组饲喂标准饲粮+3%大米提取复合糖,D组饲喂基础饲粮+3%大米提取复合糖,E组饲喂基础饲粮+5%大米提取复合糖。结果表明:1)与A组相比,B组的平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)差异不显著(P>0.05),C组的ADG、ADFI显著提高(P<0.05);与B组相比,D组的ADG、ADFI和料重比(F/G)差异不显著(P>0.05),E组的ADG、ADFI显著提高(P<0.05),F/G显著降低(P<0.05)。2)与A组相比,B组的粗蛋白质(CP)表观消化率显著降低(P<0.05),C组的CP表观消化率有提高的趋势(P=0.069);与B组相比,D组的养分表观消化率无显著差异(P>0.05),E组干物质(DM)、CP和粗脂肪(EE)表观消化率均显著提高(P<0.05)。3)与A组相比,B组的隐窝深度(CD)显著提高(P<0.05),绒毛高度/隐窝深度(V/C)有降低的趋势(P=0.073),C组的绒毛高度(VH)和V/C显著提高(P<0.05);与B组相比,D组的VH和CD均无显著差异(P>0.05),V/C有提高的趋势(P=0.053),E组的V/C显著提高(P<0.05)。4)与A组相比,B组闭合蛋白(occludin)的mRNA表达量显著提高(P<0.05),C组闭合小环蛋白-1(ZO 1)的mRNA表达量显著下降(P<0.05),occludin的mRNA表达量显著提高(P<0.05);与B组相比,D组ZO 1和occludin的mRNA表达量显著提高(P<0.05),E组ZO 1的mRNA表达量有提高的趋势(P=0.075),occludin的mRNA表达量显著下降(P<0.05)。5)与A组相比,B组的血清总抗氧化能力(T AOC)显著降低(P<0.05),C组的血清T AOC无显著差异(P>0.05);与B组相比,D组和E组的血清T AOC显著提高(P<0.05)。6)5个组之间的回肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(SIgA)和血清免疫球蛋白G(IgG)含量无显著差异(P>0.05)。综上所述,在无诱食剂条件下,断奶仔猪饲粮中添加大米提取复合糖可以通过提高养分消化吸收、抗氧化能力和肠道屏障等途径实现对仔猪生长性能的改善。     

荧光实时定量PCR方法检测猪链球菌2型

以猪链球菌2型的荚膜多糖抗原编码基因cps2J为靶基因设计引物,利用SYBR GreenⅠ能特异地与双链DNA结合发出荧光的特性,以ABI7000为平台,建立荧光实时定量PCR检测猪链球菌2型的方法。该方法检测猪链球菌2型参考株和猪链球菌2型国内分离株都呈阳性,具有良好的特异性。整个检测过程于2h内完成,检测限度为24CFU,标准曲线的相关系数为0.997。对5份采集于猪链球菌2型病猪的病料进行检测,结果表明肝脏和脾脏最适于检测。     

夏南牛新品种培育技术研究

夏南牛培育项目始于1986年。夏南牛是以夏洛来牛为父本,以南阳牛为母本,应用人工授精技术,采用杂交创新、横交固定和自群繁育三阶段开放式育种方法,根据血统、外貌、体重综合选择,以体重为主,同时考虑早熟性,经过21年严格的选种选育,育成的含夏洛来牛血37.5%的肉用牛新品种。通过中间试验、育肥试验、屠宰试验,夏南牛表现出良好的肉用特征,生长发育速度、屠宰率、净肉率、肉品质等方面明显优于南阳牛。本文总结出了一套适合我国国情的肉牛新品种育种成功经验。     

不同生境种源盐地碱蓬幼苗生长发育对盐分胁迫的响应和适应

为探讨盐地碱蓬适应不同生境的生理机制,研究了不同盐分处理(0,200和400 mmol/L的NaCl;0,200和400 mmol/L的KCl)对盐碱地和潮间带两种种源盐地碱蓬的生长发育、植株离子积累、叶片光合荧光指标和植株抗氧化系统的影响。结果表明,与对照相比,200 mmol/L的NaCl处理使盐地碱蓬的地上部鲜重、干重、肉质化程度显著增加,400 mmol/L的NaCl处理和两种浓度的KCl处理使盐地碱蓬的鲜重、干重、肉质化程度显著降低。不同浓度的NaCl处理使盐地碱蓬地上部Na⁺和Cl^-含量显著增加,K⁺含量显著降低;不同浓度的KCl处理使盐地碱蓬地上部K⁺和Cl^-含量显著增加,Na⁺含量显著降低。200 mmol/L的NaCl处理对碱蓬叶片的净光合速率、光合放氧速率、F_v/F_m值和φPSⅡ值无明显影响,而KCl处理则使碱蓬叶片各光合荧光参数显著降低。低浓度(200 mmol/L)NaCl处理使碱蓬SOD活性显著增加,但高浓度(400 mmol/L)NaCl处理和两种浓度的KCl处理均使碱蓬SOD活性显著降低。两种离子的不同浓度处理均使碱蓬POD活性显著增加。潮间带种源盐地碱蓬的地上部鲜重、干重、肉质化程度、光合荧光参数、地上部离子含量(Na⁺和Cl^-)均显著低于盐碱地生境。钾盐对盐地碱蓬的胁迫效应显著大于钠盐。盐碱地生境种源盐地碱蓬对盐分胁迫的响应显著高于潮间带。     

外源一氧化氮(NO)对低温胁迫下南瓜幼苗氧化损伤的保护效应

探讨外源 NO 供体硝普钠(SNP)对冷害胁迫下南瓜生长和氧化损伤的内在机制。以南瓜银辉2号和青栗为材料,通过室内人工模拟低温逆境的方法,研究 SNP(100 μmol/L)对冷害胁迫下南瓜幼苗生长、叶绿体色素含量、有机渗透调节物质含量及活性氧代谢的影响。结果表明,冷害导致南瓜幼苗活性氧积累增加,膜质过氧化加剧,光合色素含量下降,渗透调节能力降低,从而显著抑制南瓜幼苗的生长;正常生长条件下, SNP显著提高了超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)和谷胱甘肽还原酶(GR)活性,显著增加幼苗地上和地下部干重及谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢(H₂O₂)、类胡萝卜素和氨基酸总量;8 ℃/5 ℃(昼/夜)的低温胁迫下,叶面喷施外源100 μmol/L NO供体硝普钠(SNP),促进了植株生长和干物质积累,显著提高了叶片SOD、POD、APX 和GR的活性以及Pro和可溶性糖含量,减少了H₂O₂和膜脂过氧化产物丙二醛(MDA)的积累;外源NO明显提高了南瓜叶片叶绿素、类胡萝卜素含量、抗坏血酸(ASA)、GSH和可溶性蛋白及氨基酸总量。低温胁迫下,外源NO通过促进抗氧化酶活性、抗氧化剂及有机渗透调节物质含量的提高,降低H₂O₂和MDA的积累,保护了细胞膜结构的稳定性,维持了冷害下南瓜幼苗碳氮代谢的正常进行,增强了南瓜的抗冷性。试验条件下,NO对银辉2号的促进作用大于青栗。     

低浓度阿奇霉素对猪链球菌2型蛋白表达、荚膜多糖与药物敏感性的影响

本研究通过探索低浓度阿奇霉素对猪链球菌2型蛋白表达、荚膜多糖与药物敏感性的影响,为进一步研究环境中低浓度抗生素对微生物的影响奠定基础。用低浓度阿奇霉素处理猪链球菌2型,利用蛋白质组学iTRAQ技术,筛选关键差异表达蛋白。同时测定猪链球菌2型的荚膜多糖含量和药物敏感性。结果显示,共鉴定到差异表达蛋白174个,占总鉴定蛋白的11.6%,多数差异表达蛋白参与催化和代谢过程,属于膜蛋白,其中,3个荚膜多糖蛋白、9个ABC转运蛋白、1个50 S核糖体蛋白、1个核糖体RNA甲基转移酶、1个DNA回旋酶上调表达;8个荚膜多糖蛋白、4个50S核糖体蛋白、4个30S核糖体蛋白、1个核糖体RNA甲基转移酶、1个DNA聚合酶IV下调表达。用低浓度阿奇霉素处理猪链球菌2型,发现其对多种抗生素的敏感性降低,存活下来的菌株,恢复正常培养后,药物敏感性恢复。用低浓度阿奇霉素处理猪链球菌2型,荚膜多糖含量也未发生大幅度变化。猪链球菌2型通过改变自身蛋白质组的表达量,以适应低浓度阿奇霉素的选择压力。与低浓度阿奇霉素共存时,猪链球菌2型开启外排泵系统,会增加细菌产生多重耐药的风险。     

种植方式对青海湖流域人工草地植被和土壤养分特征的影响

为探究多年生人工草地在青海湖流域的适应性和稳定性,本研究以青海草地早熟禾(Poa pratensis. Qinghai)和青海中华羊茅(Festuca sinensis. Qinghai)单播及混播人工草地为研究对象,分析不同种植方式下人工草地植被和土壤养分特征的变化。结果表明：青海草地早熟禾+青海中华羊茅混播草地和青海草地早熟禾单播草地的生物量和盖度高于青海中华羊茅单播草地,且在生长旺期(8月),青海草地早熟禾+青海中华羊茅混播草地生物量最高,为586.2 g·m^-2;青海草地早熟禾单播、青海中华羊茅单播和青海草地早熟禾+青海中华羊茅混播草地间土壤有机质、全氮、全磷、硝态氮、铵态氮和土壤含水量在相同土壤深度下差异不显著,但土壤氮、磷及有机质间存在显著的相关性。综上所述,在青海湖流域建植青海草地早熟禾+青海中华羊茅混播型人工草地可以获得较高的产量,但需在种植和管理过程中协调好土壤氮、磷间的关系。     

冀北寒区秋冬季节荷斯坦奶牛产奶性能及血液常规指标的变化规律研究

试验旨在探索奶牛对气候变化较为敏感的血液常规指标,为荷斯坦奶牛低温应激研究提供相关数据支撑及科学依据,并对该地区冬季奶牛饲养管理及耐应激个体选育提供理论依据。以河北省承德市围场县某规模化奶牛场的健康荷斯坦泌乳奶牛为研究对象,连续监测了秋季（2018年10月24日至2018年10月30日）、初冬（2018年12月4日至2018年12月10日）和深冬（2018年12月25日至2018年12月31日）牛舍温湿指数（THI）,并分别采集了15头荷斯坦奶牛血液样本,测定了9种血液常规指标,同时收集了试验牛群的8项产奶性能数据,分析荷斯坦奶牛在秋冬季节产奶性能及血液常规指标的变化规律,筛选气候变化较为敏感的血液常规指标。结果显示：秋季,牛舍平均温度为8.0 ℃,平均THI为49.38,说明试验牛群在该时期处于非低温应激状态;初冬,牛舍平均温度为－6.4 ℃,平均THI达到23.56,在168 h监测期,有92 h －8≤THI < 25,76 h 25≤THI < 39,试验牛群在该时期大部分时间处于中度低温应激状态;深冬,牛舍平均温度为－7.59 ℃,平均THI达到21.86,有43 h 25≤THI < 39,117 h 8≤THI < 25,试验牛群在该时期绝大部分时间处于中度低温应激状态。随着温度下降,奶牛直肠温度、呼吸频率显著降低（P < 0.05）;冬季奶牛血中白细胞计数（WBC）、红细胞计数（RBC）、血红蛋白（HGB）、红细胞压积（HCT）、血小板总数（PLT）、血小板压积（PCT）、单核细胞数（MO）、淋巴细胞数（LY）极显著或显著升高（P < 0.01;P < 0.05）;除红细胞压积（HCT）、白细胞计数外,其他各指标在初冬与深冬间差异不显著（P > 0.05）;红细胞平均体积（MCV）在各季节间变化不显著（P > 0.05）;与秋季相比,初冬、深冬奶牛平均日产奶量（AMY）分别下降0.71和1.17 kg/d（P < 0.01）;初冬乳脂率（FP）、乳蛋白率（PP）、脂蛋比（F/P）显著或极显著下降（P < 0.05;P<0.01）,深冬时期恢复至秋季水平（P > 0.05）;乳中非脂肪固体物质率（SP）在初冬显著下降,在深冬显著上升（P < 0.05）;初冬、深冬乳中体细胞数（SCC）分别比秋季高1.84×10⁵、1.63×10⁵ 个/mL（P < 0.05）;乳糖率（LP）及酸度在各时期均无显著差异（P > 0.05）。综合以上结果,冀北寒区荷斯坦奶牛在秋季处于非应激状态,在初冬和深冬处于中度低温应激状态,且牛群的生理指标和产奶性能受气候影响较为严重;奶牛血液红细胞、白细胞、淋巴细胞和单核细胞数为受气候影响变化较为灵敏的血液常规指标。