外源氮对紫花苜蓿固氮酶活性和酰脲含量的影响及其相关关系研究

以‘甘农3号’为研究材料,采用室外(防雨网室)盆栽营养液砂培法,模拟土壤中2种氮素形态(NO₃^--N和NH₄⁺-N)的存在形式,研究混合态氮(NO₃^--N:NH₄⁺-N为1:1)的5个供氮水平(0,105,210,315,420 mg·L^-1)对紫花苜蓿固氮酶活性和酰脲含量的影响并筛选出最佳氮浓度;在筛选出的最佳氮浓度下研究2种形态(NO₃^--N和NH₄⁺-N)氮的7种不同的配比NO₃^--N:NH₄⁺-N(1/7,1/3,3/5,5/5,5/3、3/1,7/1)对紫花苜蓿固氮酶活性和酰脲含量的影响;并对根瘤固氮酶活性和酰脲含量之间的相关关系进行了分析。研究表明:最能促进紫花苜蓿酰脲累积和根瘤固氮能力的外源氮浓度为210 mg·L^-1;最佳混合型态氮配比为NO₃^--N:NH₄⁺-N=1/3。2种试验处理下紫花苜蓿地上部分酰脲含量(y)与固氮酶活性(x)之间分别存在显著正相关关系(P < 0.01),可分别用y=0.0321x+0.4759(R=0.911)和y=0.0313x+0.5545(R=0.960)表示,且2模型高度相似,这为寻求生产中评估紫花苜蓿固氮能力的简便方法提供理论依据。     

N-甲基-D-天冬氨酸对猪生长激素和生长抑素动态分泌模式及特征的影响

本试验通过在日粮中添加一定水平的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)研究其对猪生长激素(GH)和生长抑素(SS)动态分泌模式及特征的影响.选取体重为(53.0±3.6)kg的杜长大三元杂交猪60头,随机分为2组,每组3个重复,每个重复10头猪(公母各1/2,公猪已阉割),分别饲喂添加0、100 mg/kg NMDA的日粮,猪体重接近90 kg时结束试验,分析猪的生长性能并测定GH和SS.结果显示,在日粮中添加100 mg/kg的NMDA,猪的日增重显著增加(P<0.05),料重比显著降低(P<0.05);GH分泌的总体水平、基线水平和峰强度显著提高(P<0.05).从性别角度而言,阉公猪GH分泌总体水平增加36.91%(P<0.05);基线水平提高了55.69%(P<0.05);母猪GH分泌总体水平提高了45.95%(P<0.05);基线水平提高了50.10%(P<0.05).100 mg/kg NMDA组阉公猪与母猪SS的分泌水平有所提高,但与对照组差异不显著(P>0.05).以上结果表明:日粮添加100 mg/kg的NMDA可以促进猪的生长、提高猪GH的分泌水平,使GH分泌表现出较强的脉冲分泌规律;而NMDA对SS的分泌模式和分泌水平未产生明显影响.     

异源抗体对接方法预测流感病毒血凝素B细胞构象表位

为了对异源抗体对接方法预测流感病毒血凝素B细胞构象表位的可行性进行分析,本研究基于蛋白质相互作用界面的形状互补理论,使用异源抗体(来自于抗原抗体复合物1G9M、1RVF、1TPX、1NCA、1A2Y)的晶体结构同流感病毒血凝素(A/Aichi/2/68(H3N2))的晶体结构进行刚性分子对接,通过计算B细胞表位的预测表面和实际表面C-α原子之间的RSMD以及表位氨基酸的准确率,分析用异源抗体探测出血凝素B细胞表位的可能性。结果表明,不同的异源抗体均可结合到A/Aichi/2/68(H3N2)的已知B细胞表位,最佳的对接构象与原晶体结构重叠后表位残基C-α原子的均方根偏差均小于0.6埃,表位氨基酸预测的准确性大于60%,说明异源抗体对接方法可以尝试用于B细胞构象表位的预测。     

粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)培养细胞对家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)的吞噬过程观察

观察微孢子虫在非天然宿主细胞系的生物行为过程,有助于探究微孢子虫的侵染特异性机制。选用鳞翅目昆虫粉纹夜蛾(Trichoplusia ni,Tn)细胞系为材料,接种家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)孢子后观察其吞噬过程。结果发现:经氢氧化钾发芽预处理的Nb孢子虽然可以在Tn培养细胞液中发芽,但未见发芽孢子的孢原质进入Tn培养细胞;在接种Nb孢子浓度为2.0×105mL-1以上时,观察到孢子通过内吞作用进入了Tn培养细胞,但未见孢子的增殖;随着时间的延长和进入Tn培养细胞的Nb孢子的增加,可引起Tn培养细胞的超微结构变化,并导致细胞的裂解。以上结果说明,虽未见Nb以发芽形式感染Tn培养细胞,但Nb能够被吞噬进入Tn培养细胞并破坏其结构。     

陇东肉牛PON1基因结构与功能的生物信息学分析

为阐明陇东肉牛对氧磷酶1（paraoxonase 1,PON1）基因的结构与功能,本研究运用PCR扩增陇东肉牛PON1基因所有外显子序列并测序,通过Seqman软件完成序列拼接,结合生物信息学方法预测和分析其碱基组成、开放阅读框及编码蛋白的理化性质、原子组成、氨基酸残基数、亲水性和疏水性、分子质量、等电点、二级结构、高级结构等。结果显示,陇东肉牛PON1基因CDS区序列全长1 068 bp,编码355个氨基酸残基,其中数目最多的为亮氨酸（Leu）,数目最少的为半胱氨酸和色氨酸（Cys和Trp）。碱基组成中A+T含量（56.55%）高于G+C含量（43.26%）。与GenBank中牛PON1基因序列（登录号：EU289337）比对分析发现,在PON1基因外显子4、6、8、9中存在突变,但均未导致氨基酸发生变化,为同义突变。PON1蛋白的原子组成是C₁₈₁₀H₂₇₉₆N₄₅₄O₅₃₃S₁₂,分子质量为39.83 ku,理论等电点为5.24,为稳定的水溶性蛋白质。PON1蛋白二级结构中无规则卷曲、延展链、α-螺旋和β-转角分别由159、116、55和25个氨基酸构成,最终形成了以无规则卷曲和延展链为主的混合型。PON1蛋白的疏水性结果表明,第8位苏氨酸（Thr）疏水性最强（最高分值2.878）,第299位脯氨酸（Pro）亲水性最强（最低分值-2.222）。本试验结果为深入研究陇东肉牛PON1蛋白功能及探讨PON1基因突变对甘肃地方肉牛胴体、肉质性状的影响奠定基础。     

家蚕葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶家族基因BmGMCβ2的克隆及序列与表达分析

葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶(glucose-methanol-choline oxidoreductases,GMC)家族是昆虫体内一大类以黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)为辅酶的氧化还原酶类,家蚕基因组中含有43个GMC家族基因。以家蚕5龄幼虫cDNA为模板克隆到一个家蚕GMC家族基因,命名为BmGMCβ2(GenBank登录号:JQ965926)。该基因cDNA全长1 875 bp,编码624个氨基酸,预测蛋白质分子质量为69.3 kD,pI为6.21,定位于家蚕16号染色体的nscaf3058上,编码蛋白质含GMC家族共有的ADP-bindingβ-α-β折叠结构域。系统发育分析表明该基因是家蚕GMC家族β亚家族基因成员。RT-PCR检测家蚕不同发育时期和5龄第3天幼虫不同组织中BmGMCβ2基因mRNA转录水平,以5龄盛食期最高,并且主要在表皮、脂肪体和气管中转录表达;Westernblotting分析BmGMCβ2蛋白主要在5龄第3天幼虫的脂肪体中表达。将BmGMCβ2克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,转化E.coli BL21表达菌株,IPTG诱导表达BmGMCβ2融合蛋白,通过His-亲和层析得到纯化的融合蛋白并制备多克隆抗体,为后续研究该蛋白在家蚕生长发育过程中的功能奠定了基础。     

绵羊NRCAM基因的生物信息学分析

利用生物基因组学数据库,对绵羊神经原相关的细胞粘附分子基因(neuro-related celladhesion molecule,NRCAM)进行生物信息学分析,以初步了解其结构并对其编码的蛋白质的功能进行预测。结果表明,绵羊NRCAM基因含有1个最大长度为3 648 bp的开放阅读框,编码1215个氨基酸残基。NRCAM基因编码产物的分子质量为134 367.13 KDa,理论等电点为5.49。亚细胞定位主要位于细胞质(26.1%),属于分泌蛋白,且存在信号肽序列。存在5段IGc2区、1段IG区,1段低复杂性区域以及4段FN3区,且有1段跨膜结构;二级结构以无规卷曲和β折叠为主,三级结构主要由无规卷曲和β折叠缠绕形成。     

Effects of remifentanil on monophasic action potential and transmural dispersion of repolarization in rabbit myocardium

AIM: To study the effect of remifentanil on monophasic action potential and transmural dispersion of repolarization (TDR) in the 3-layer myocardium of isolated rabbit hearts. METHODS: Adult rabbits (n=18, 2.0 ~ 2.5 kg) were used to isolate the hearts for preparing Langendorff perfusion model. The hearts were randomly divided into 3 groups after perfusion with K-H solution for 15 min: the perfusion in control group (C group) continued for 60 min; the hearts in remifentanil group (R group) were perfused with 12 μg/L remifentanil K-H solution for 60 min; the hearts in remifentanil+aminophylline group (RA group) were given 60-min perfusion of 12 μg/L K-H remifentanil+30 mg/L aminophylline. The HR and 3 layers of myocardial monophasic action potential (MAP) in the left ventricular anterior wall were recorded at time points after balanced infusion for 15 min (T₀), and continued perfusion for 15 min (T₁), 30 min (T₂) and 60 min (T₃). The monophasic action potential duration of repolarization at 90% (MAPD₉₀) and the transmural dispersion of repolarization (TDR) were calculated. The early afterdepolarization, delay afterdepolarization and arrhythmia were also observed. RESULTS: In R group, slower HR and prolonger MAPD₉₀ and TDR at T₁~T₃ were observed as compared with those at T₀ (P<0.05). R group showed slower HR and longer MAPD₉₀ and TDR than C group and RA group (P<0.05). CONCLUSION: Remifentanil slows the HR, extends the MAPD₉₀ and increases the TDR, thus being prone to induce reentry. Aminophylline makes HR faster and MAPD₉₀ shorter, thereby reducing the TDR.     

二月兰与杜鹃花共建百里杜鹃景区景观时空观赏性

百里杜鹃景区花期过于集中,花期大多在4—5月,旅游期短。现以二月兰与优势种马缨杜鹃为试材,通过在马缨杜鹃树下配种二月兰,研究二月兰是否增加景区的观赏效果,同时,研究引种二月兰是否对马缨杜鹃的生长造成不良影响。结果表明:在马缨杜鹃树下种植二月兰并不影响其生长;二月兰的花期为3—5月,株高多分布在50~100cm,与马缨杜鹃相比,在群落上属于下层景观;这使得景区的可观赏时间提前了将近1个月,同时增强景区空间上的观赏效果。