LINC24065在体细胞核移植牛中的异常表达

旨在揭示DLK1-DIO3印记域上一个新的长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)LINC24065在自然繁殖牛(natural reproduction,NR)与体细胞核移植牛(somatic cell nuclear transfer,SCNT)中的组织表达与印记状态,对进一步了解DLK1-DIO3印记域在供体核重编程中的作用提供一定的理论基础。本研究以自然繁殖牛的大脑组织为试验材料,利用RACE和RT-PCR技术,在牛的DLK1-DIO3印记域内鉴定了一个新的印记的lncRNA基因,命名为LINC24065。用基于SNP(single nucleotide polymopisms)的RT-PCR产物直接测序方法分析LINC24065在自然繁殖牛和体细胞核移植牛组织中的表达及印记状态。序列分析发现,LINC24065编码6个可变剪接体,并在自然繁殖牛被检测的7个组织中都表达,而在体细胞核移植牛组织中没有检测到可变剪接体LINC24065-V3,且其它5个剪接体呈现组织特异性表达。印记状态分析发现,LINC24065在自然繁殖牛和体细胞核移植牛的7个组织中均为单等位基因表达,但在体细胞核移植牛的大脑组织中出现了与其他组织亲本来源不同的单等位基因表达。研究结果说明,LINC24065基因在体细胞核移植牛的大脑中出现了印记紊乱,并且剪接体在组织中的表达也发生了改变。以上研究结果说明LINC24065基因与体细胞核移植牛的发育异常有关。     

中草药饲料添加剂的生产新工艺与应用

中草药饲料添加剂是指以天然中草药的药性(阴、阳、寒、凉、温、热)、药味(辛、酸、甘、咸)和物间关系的传统理论为基础,以现代动物营养学和饲养学理论为指导,并结合生产实际,研制的单一或复合型的添加剂。1中草药饲料添加剂的特点1.1低毒性天然性中草药取自动植物、矿物及其产     

产蛋下降综合征（EDS－76）病毒DNA探针的制备及应用研究

用纯化的产蛋下降综合征（ＥＤＳ－７６）病毒（Ｈ９１毒株）悬液提取的核酸，经琼脂糖凝胶电泳只出现１条分子量较大、背景清晰的核酸带。用ＢａｍＨＩ酶消化产生４个片段，大小分别为１７ｋｂ、１０ｋｂ、４．０ｋｂ和２．０ｋｂ。将其中的２．０ｋｂ片段克隆进ｐＵＣ１８ＤＮＡ载体中，重组质粒ＤＮＡ用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记作为ＤＮＡ探针，在ｄｏｔｂｌｏｔ中该探针不与鹅胚尿囊液核酸抽提物、马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＤＮＡ、鸡传染性贫血病毒（ＣＡＶ）ＤＮＡ、ＳＰＦ鸡基因组ＤＮＡ等核酸反应，只与３株ＥＤＳ病毒（ＥＤＳ标准毒株ＡＶ－１２７、ＥＤＳＨ９１毒株和从健康鹅体中分离的ＥＤＳＹ８１毒株）ＤＮＡ呈阳性反应。人工感染产蛋母鸡和雏鸡后２４ｈ即可用该探针从泄殖腔棉拭子样品中检测出ＥＤＳ病毒ＤＮＡ，在感染后３５ｈ仍能从部分感染鸡样品中检出。对部分探针检测阳性鸡的泄殖腔棉拭子样品用ＳＰＦ鸡胚分离病毒，并用ＨＡ和ＨＩ试验检测分离病毒的特异性；在感染过程中，同时检测了血清中ＨＩ抗体的消长情况。结果表明，人工感染鸡排毒至少可以维持２个月左右，而且血清中ＨＩ抗体即使很高，也不能阻止感染鸡的排毒。     

干番茄渣代替豆粕对肉牛瘤胃发酵和氮代谢的影响

干番茄渣可用于反刍动物的替代营养饲料。据有限的文献资料显示,用干番茄渣代替豆粕会降低瘤胃发酵和微生物合成能力。在本试验中,用装瘤胃瘘管的肉牛来验证用干番茄渣代替豆粕是否会对采食、瘤胃发酵和氮代谢造成影响。用拉丁方设计饲喂试验,受试牛分别饲喂混入3.2%、8.0%和11.2%干番茄渣的全混日粮。结果发现,用干番茄渣代替饲料中豆粕不影响采食量,但是改变了瘤胃发酵指标,即增加干番茄渣摄入量导致瘤胃pH值升高和氨浓度增加,并且呈摄入量依赖性增加,但是挥发性脂肪酸浓度和瘤胃微生物数量并未改变;饲料中添加高水平干番茄渣使血液中尿素浓度呈线性、剂量依赖性增加。很明显,胃肠道对中性和耐酸纤维的总消化率并未受番茄渣的影响。饲喂番茄渣增加了粪氮的排泄,从而降低了尿氮的排泄量。用干番茄渣代替豆粕影响肉牛瘤胃发酵和氮的代谢,但是实际上对反刍动物生产性能的影响还不能确定。     

猪瘟病毒C株检测用国家核酸标准物质的研制

为研制均匀、稳定的猪瘟病毒（CSFV）核酸标准物质,选择CSFV C株接种于PK-15细胞并收获病毒液,然后经过病毒灭活、分装、冻干,最终形成核酸标准物质。用微滴式数字PCR对制备的CSFV标准物质进行均匀性和稳定性评估、标准物质合作定值,在评定不确定度后计算得出最终量值结果,并开展临床试用。结果显示,该标准物质均匀,4 ℃条件下可稳定存放4周,25 ℃可稳定存放1周,-20 ℃可稳定存放11个月,量值结果为（5.1±0.7）×105 copies/mg;临床试用显示,所制备的标准物质与临床样本的互通性良好。本研究制备的CSFV C株国家核酸标准物质均一性良好、稳定、量值准确度高,并通过了全国标准物质管理委员会评定,可用于动物及动物产品质量安全检测,从而有效保障猪瘟防治工作的开展。     

蛋氨酸的功能及代谢吸收过程

本文介绍了蛋氨酸的功能,并且详细阐述了蛋氨酸的代谢过程和吸收过程,为合理调控蛋氨酸在动物体内的吸收代谢和在饲料中添加蛋氨酸提供了理论依据。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与应用

为建立一种快速、准确、常规的猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)检测方法,根据PHEV N蛋白基因序列,设计1对引物和1条探针,建立了PHEV实时荧光RT-PCR检测方法。该方法特异性好,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪圆环病毒2型(PCV2)均无交叉反应;用阳性质粒Puc57-PHEVn评估其敏感性,发现检测下限达10~(-6) ng/μL(224拷贝/μL)。采集233份发病猪组织样品进行临床检测,发现该方法与巢式RT-PCR的符合率达98.3%,准确筛查出巢式RT-PCR并测序阳性的样品14份,且检出率高于巢式RT-PCR。结果表明,本方法敏感、特异,可用于PHEV临床样品的检测。     

母猪饲粮添加甜菜碱对巴马香猪哺乳仔猪血液指标的影响

本试验旨在研究母猪饲粮添加甜菜碱对巴马香猪哺乳仔猪血液指标的影响。选取3~7胎次妊娠巴马香猪40头,随机分为2组,每组20头,单栏饲养。对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中添加3.5 kg/t甜菜碱。试验期为母猪配种后第3天至分娩后第21天。试验结束时,从每组随机选取10窝仔猪,每窝选取1头仔猪采血,测定血浆激素含量、抗氧化指标和游离氨基酸含量。结果表明:与对照组相比,甜菜碱组哺乳仔猪血浆胆囊收缩素(CCK)、酪酪肽(PYY)、瘦素(LEP)、丙二醛(MDA)、过氧化氢(H2 O2)和丙氨酸(Ala)含量显著降低(P<0.05),血浆鹅肌肽(Ans)、1-甲基组氨酸(1⁃MeHis)和3-甲基组氨酸(3⁃MeHis)含量显著升高(P<0.05),血浆苏氨酸(Thr)(P=0.069)、谷氨酸(Glu)(P=0.055)和肌肽(Car)(P=0.055)含量呈下降趋势,血浆亮氨酸(Leu)含量呈升高趋势(P=0.069)。综上所述,母猪饲粮添加甜菜碱可降低哺乳仔猪血浆摄食相关因子水平,减弱机体的氧化水平,改变血浆游离氨基酸含量,有利于仔猪的生长发育与机体健康。     

鸡新城疫病毒强毒Q-BS株的分离与鉴定

从2003年10月至2004年6月,在河北、辽宁、山东等地区鸡群中大规模发生以神经症状、肠道出血为主的流行性疾病。本文对从河北省某AA肉鸡场的病死鸡中分离的病毒毒株,经过实验室的系统鉴定,证实该分离株具有血凝性,且可被ND标准阳性血清所抑制和中和,不能被AI(H5亚型与H9亚型)标准阳性血清及阴性血清抑制;该分离株的毒价为109.3ELD50/0.1ml,MDT为57.6h,ICPI为1.89,IVPI为2.62,回归试验鸡的临床表现与自然病例基本一致。试验结果证明,该毒株属于嗜神经型新城疫病毒强毒株,并命名为Q-BS株。     

颗粒人工饲料育对小蚕生长发育的影响

本文探讨了颗粒人工饲料育的饲养方法和饲育环境对小蚕生长发育的影响，结果表明：1－2龄最适给饵量为50mg/头，适宜饲养密度为1.5头／cm^2，增加给饵次数有利于小蚕的生长发育，温度和光照对小蚕的生长发育有显著的影响，以29－30℃黑暗饲育成绩最好。