转录组测序在林草植物抗逆性研究中的应用

生物和非生物胁迫对农作物产量和生态环境造成极大的威胁,林草植物对外界环境具有较强的适应能力,因此挖掘林草植物抗逆基因,分析其抗逆机制已经成为当下的研究趋势。随着科学技术的发展,利用生物测序技术研究植物抗逆的分子机制已成为当今植物逆境生理和分子生物学研究的一个重大课题,其中转录组测序(RNA-seq)研究是揭示植物抗逆机理以及筛选抗逆基因的主要研究技术。以Roche/454、Illumina/Solexa和ABI/SOLID为代表的二代测序技术(NGS)发展迅速,相较于传统测序手段具有成本低、测序时间短、高通量等优点,已被广泛应用于全基因组、RNA-seq和miRNA测序等研究。因此,RNA-seq技术可加快林草植物抗逆机制的研究和抗逆基因资源的挖掘,从而为农作物、优良林草植物抗逆性遗传改良和新品种培育奠定基础。本研究详细介绍了近年来NGS技术在林草植物应对病虫害、高温、冷害、盐、干旱以及土地贫瘠等方面的转录组学的研究进展,最后针对转录组测序的发展趋势和应用前景进行了展望。     

基于实时荧光定量PCR技术的猪伪狂犬病活疫苗含毒量评价

为定量分析贵州省临床用猪伪狂犬病(pseudorabies,PR)活疫苗中病毒含量,根据GenBank中公布的伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gB基因序列(登录号:M17321.1)设计1对特异性引物,建立实时荧光定量PCR方法,并对来自6个不同厂家的猪伪狂犬病活疫苗进行含毒量分析。结果显示,试验成功建立了可用于PRV检测的实时荧光定量PCR方法,标准曲线中标准品各稀释度质粒拷贝数与Ct值呈良好的线性关系,标准曲线方程为:Y=-0.97X+33.66(R^2=0.999),该方法最低检测病毒含量为3.19×10~1拷贝/μL,敏感性高且具有良好的重复性和特异性。应用所建立的实时荧光定量PCR方法对贵州省临床用6个厂家生产的猪伪狂犬病活疫苗的病毒含量进行检测,结果显示,6种市售猪伪狂犬病活疫苗(A～F)中病毒含量分别为1.67×10~7、4.83×10~5、2.64×10~6、4.27×10~7、3.39×10~6和3.68×10~5拷贝/μL,来自不同厂家的疫苗病毒含毒量存在明显差异,最大差异可达116倍,其中来自A、D厂家的两种猪伪狂犬病活疫苗具有较高的含毒量。本试验所建立的实时荧光定量PCR方法可用于猪伪狂犬病活疫苗病毒含量的快速检测和评价,对猪伪狂犬病活疫苗的质控和临床用疫苗选择具有一定的指导意义。     

内蒙古自治区畜禽养殖粪污资源化利用的对策与建议

畜牧产业是内蒙古自治区的支柱产业之一,随着畜牧业快速发展,畜禽粪污产量持续增加,导致粪污污染日益严重,因此,畜禽养殖粪污资源化利用显得尤为迫切和重要。调研了内蒙古自治区11个旗（县、区）、95户大中型规模化养殖企业,并通过文献查阅及专家咨询等方式调研了3 700户规模化养殖企业,从内蒙古自治区畜禽粪污的基本特征、畜禽粪污资源化利用主要特征和对策与建议方面分析了自治区畜禽养殖粪污及资源化利用的情况。     

不同腐熟剂接种下肉牛粪污腐熟进程的比较研究

通过肉牛粪污好氧堆肥发酵,对接种不同腐熟剂与空白处理堆肥过程进行物理化性质分析比较,研究不同腐熟剂接种对堆肥过程的影响。结果表明：向堆肥物料中添加腐熟剂可加快堆肥升温速度,提高水分散失率、有机质降解速率,加快粪污腐熟进程,缩短堆肥周期;自主研发腐熟剂和市售腐熟剂堆肥效果相似,项目组自主研发腐熟剂具有加速肉牛粪污腐熟进程的功效。     

树莓叶黄酮提取的正交试验和响应曲面法工艺优化对比

旨在为树莓叶黄酮的开发应用提供数据参考,通过正交试验与响应曲面法设计改良乙醇提取工艺,并通过HPLC建立树莓叶黄酮的色谱分离条件为:Agilent ZorBax SB色谱柱,流动相为1mg/mL乙酸-乙腈=72.5∶27.5,等度分离,柱温30℃,检测波长:257nm,完成树莓叶黄酮的初步分离,以及黄酮中芦丁含量的准确测定和验证。最佳提取工艺为:646mL/mL乙醇,料液比1∶12.5,41.9℃加热回流173.3min,最佳工艺所得提取率1.127%,响应曲面法最佳工艺提取率略高于正交试验法,且其工艺条件均较优于正交试验所得工艺,可为后期研发树莓叶芦丁兽用中药制剂提供理论参考。     

恒河猴甲状腺与甲状旁腺的组织学观察

应用光镜和透射电镜技术，探讨了2～15岁恒河猴甲状腺和甲状旁腺的细微结构。结果表明，甲状腺实质由滤泡和滤泡旁细胞构成。滤泡大小不等，平均直径173μm，由单层低立方上皮细胞围成，细胞平均高度4．93μm，胞质内含较丰富的细胞器和胶质小泡等。滤泡旁细胞较少，平均直径13．20μm，位于滤泡之间或镶嵌于滤泡上皮细胞之间，胞质内含少量的分泌颗粒。甲状旁腺位于甲状腺内，其实质由暗主细胞、淡主细胞、暗嗜酸性细胞、淡嗜酸性细胞组成，并可见腺泡样结构和脂肪细胞。主细胞平均直径6．96μm，嗜酸性细胞11．69μm。     

牛阴道开膣器输精技术

在多年的实践经验的基础上,重点介绍了以牛阴道开膣器输精的技术要点,主要为选定最佳的输精时间、严格技术操作规范、做好母牛早期妊娠诊断工作等。     

猪孤雌激活早期胚胎线粒体分布及mtDNA拷贝数变化的研究

本研究通过线粒体分子探针标记技术检测孤雌激活早期胚胎线粒体的分布变化,运用实时荧光定量PCR技术检测mtDNA拷贝数的变化,揭示早期胚胎发育过程中线粒体分布、mtDNA拷贝数变化趋势。结果表明,成熟卵母细胞电激活后,由2-细胞胚胎开始,卵裂球内线粒体分布均匀且密集,每个细胞均有分布,卵裂球之外的空隙未见线粒体分布,直到囊胚形成,线粒体均有分布。孤雌激活4-细胞胚胎mtDNA拷贝数显著高于8-细胞胚胎mtDNA拷贝数(907210.77±145520.77,186224.33±103308.00,P<0.05),但显著低于2-细胞胚胎、桑椹胚、囊胚的mtDNA拷贝数(1563422.54±224666.51、1697626.25±176999.53和1752301.29±101146.64,P<0.05)。孤雌激活扩张囊胚mtDNA拷贝数最高,为2812545.67±156819.31,显著高于其他发育时期胚胎的mtDNA拷贝数(P<0.05)。由此可见,孤雌激活早期胚胎发育进程中线粒体分布及mtDNA拷贝数会发生变化。     

鸡毒霉形体HS株pMGA多基因族序列分析

用限制性核酸内切酶对鸡毒霉形体(MG)HS株基因文库中经初步估测可能含有的4个鸡毒霉形体粘附蛋白(protein of Mycoplasma gallisepticum adhesin,pMGA)基因的MgW17重组质粒进行了不同组合的酶消化,根据消化片段的大小及酶切位点绘制了7.5kb外源片段的物理图谱;然后根据所得的物理图谱,选用Pst I和EcoR I将MgW17外源片段酶解成1.3、2.0、4.2 kb 3个部分,将它们分别亚克隆到SK(十)质粒上,得到了3个亚克隆子SGp100、SGp200、SGp300.使用核酸外切酶Ⅲ缺失法构建缺失子系列,经序列分析后得到MgW17外源片段的全部序列.序列全长7 434 bp,中间含有2个完整的pMGA基因和另2个不完整的pMGA基因的首部和尾部,分别将它们顺次命名为H-pMGA1.1、H-pMGA1.2、H-pMGA1.3和H pMGA1.4.2个完整的pMGA基因的阅读框长度分别为1 967 bp(1.2)和2039 bp(1.3);H-pMGA1.1首部不完整的阅读框的长度为720 bp,尾部不完整的H-pMGA1.4的长度为1 752 bp.将H-pMGA基因与已报道的MG.S6株、F株的pMGA基因进行了比较,探讨了pMGA基因在不同MG菌株中的相似性、基因启动子结构的差异、间隔区内GAA重复序列对转录调控的影响等.     

光照强度对马蹄金保护酶活性和光合特性的影响

通过盆栽试验,利用遮荫网设置光照梯度(透光率分别为100％、76.19％、59.27％、38.09％),研究了光照强度对马蹄金生理指标和光合特性的影响.结果表明,随着光照强度的降低,马蹄金叶片中SOD、POD、CAT活性均逐渐增大;O2-含量和MDA含量均呈下降趋势,说明高度遮荫马蹄金叶片膜系统受到伤害;叶绿素a和叶绿素b均表现出上升的趋势,叶绿素a与叶绿素b的比值逐渐下降;光合有效辐射、净光合速率和蒸腾速率逐渐降低.光合有效辐射均呈“单峰”型,最高峰出现在13:00.遮荫条件下T1处理蒸腾速率最大.高度遮荫不利于马蹄金的生长.